এডিস ইজিপ্টি (ডিপটেরা: কিউলিসিডি) মশার লার্ভা ও পূর্ণাঙ্গ মশার বিরুদ্ধে প্রতিষেধক হিসেবে উদ্ভিদের এসেনশিয়াল অয়েল-ভিত্তিক টারপিন যৌগের মিশ্রণ।

Nature.com-এ আসার জন্য আপনাকে ধন্যবাদ। আপনি যে ব্রাউজারটি ব্যবহার করছেন, সেটিতে CSS সাপোর্ট সীমিত। সর্বোত্তম ফলাফলের জন্য, আমরা আপনাকে ব্রাউজারের একটি নতুন সংস্করণ ব্যবহার করার পরামর্শ দিচ্ছি (অথবা ইন্টারনেট এক্সপ্লোরারে কম্প্যাটিবিলিটি মোড নিষ্ক্রিয় করুন)। আপাতত, নিরবচ্ছিন্ন সাপোর্ট নিশ্চিত করার জন্য, আমরা সাইটটি কোনো স্টাইলিং বা জাভাস্ক্রিপ্ট ছাড়াই প্রদর্শন করছি।
উদ্ভিদ থেকে প্রাপ্ত কীটনাশক যৌগের সংমিশ্রণ কীটপতঙ্গের বিরুদ্ধে সিনারজিস্টিক (সহায়ক) বা অ্যান্টাগনিস্টিক (বিপরীতমুখী) মিথস্ক্রিয়া প্রদর্শন করতে পারে। এডিস মশা দ্বারা বাহিত রোগের দ্রুত বিস্তার এবং প্রচলিত কীটনাশকের প্রতি এডিস মশা জনগোষ্ঠীর ক্রমবর্ধমান প্রতিরোধের পরিপ্রেক্ষিতে, উদ্ভিদের এসেনশিয়াল অয়েলের উপর ভিত্তি করে টারপিন যৌগের আঠাশটি সংমিশ্রণ তৈরি করা হয়েছিল এবং এডিস ইজিপ্টি মশার লার্ভা ও পূর্ণাঙ্গ দশার বিরুদ্ধে পরীক্ষা করা হয়েছিল। প্রাথমিকভাবে পাঁচটি উদ্ভিদের এসেনশিয়াল অয়েল (EOs)-এর লার্ভানাশক ও পূর্ণাঙ্গ মশার উপর কার্যকারিতা মূল্যায়ন করা হয়েছিল এবং GC-MS ফলাফলের উপর ভিত্তি করে প্রতিটি EO-তে দুটি প্রধান যৌগ শনাক্ত করা হয়েছিল। শনাক্তকৃত প্রধান যৌগগুলো ক্রয় করা হয়েছিল, যথা ডায়ালিল ডাইসালফাইড, ডায়ালিল ট্রাইসালফাইড, কারভোন, লিমোনিন, ইউজেনল, মিথাইল ইউজেনল, ইউক্যালিপটল, ইউডেসমল এবং মশা আলফা-পিনিন। এরপর এই যৌগগুলোর বাইনারি সংমিশ্রণ সাবলেথাল ডোজ ব্যবহার করে প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং তাদের সিনারজিস্টিক ও অ্যান্টাগনিস্টিক প্রভাব পরীক্ষা ও নির্ধারণ করা হয়েছিল। লিমোনিনের সাথে ডাইঅ্যালিল ডাইসালফাইড মিশিয়ে সেরা লার্ভানাশক মিশ্রণ পাওয়া যায়, এবং কারভোনের সাথে লিমোনিন মিশিয়ে সেরা পূর্ণাঙ্গ মশানাশক মিশ্রণ পাওয়া যায়। বাণিজ্যিকভাবে ব্যবহৃত কৃত্রিম লার্ভানাশক টেমফস এবং পূর্ণাঙ্গ মশার ঔষধ ম্যালাথিয়নকে আলাদাভাবে এবং টারপিনয়েডের সাথে দ্বৈত মিশ্রণে পরীক্ষা করা হয়েছিল। ফলাফলে দেখা গেছে যে, টেমফস ও ডাইঅ্যালিল ডাইসালফাইডের এবং ম্যালাথিয়ন ও ইউডেস্মলের মিশ্রণটি ছিল সবচেয়ে কার্যকর মিশ্রণ। এই শক্তিশালী মিশ্রণগুলো এডিস ইজিপ্টি মশার বিরুদ্ধে ব্যবহারের সম্ভাবনা রাখে।
উদ্ভিদের এসেনশিয়াল অয়েল (EOs) হলো সেকেন্ডারি মেটাবোলাইট, যাতে বিভিন্ন বায়োঅ্যাক্টিভ যৌগ থাকে এবং সিন্থেটিক কীটনাশকের বিকল্প হিসেবে এর গুরুত্ব ক্রমশ বাড়ছে। এগুলো শুধু পরিবেশবান্ধব ও ব্যবহারবান্ধবই নয়, বরং বিভিন্ন বায়োঅ্যাক্টিভ যৌগের একটি মিশ্রণ, যা ঔষধ-প্রতিরোধ ক্ষমতা তৈরির সম্ভাবনাও কমিয়ে দেয়¹। জিসি-এমএস (GC-MS) প্রযুক্তি ব্যবহার করে গবেষকরা বিভিন্ন উদ্ভিদের এসেনশিয়াল অয়েলের উপাদান পরীক্ষা করেছেন এবং ১৭,৫০০ সুগন্ধি উদ্ভিদ থেকে ৩,০০০-এরও বেশি যৌগ শনাক্ত করেছেন², যার বেশিরভাগই কীটনাশক বৈশিষ্ট্যের জন্য পরীক্ষিত এবং এগুলোর কীটনাশক প্রভাব রয়েছে বলে জানা গেছে³,⁴। কিছু গবেষণায় দেখা গেছে যে, যৌগটির প্রধান উপাদানের বিষাক্ততা এর অপরিশোধিত ইথিলিন অক্সাইডের সমান বা তার চেয়ে বেশি। কিন্তু একক যৌগের ব্যবহার আবারও প্রতিরোধ ক্ষমতা তৈরির সুযোগ রেখে যেতে পারে, যেমনটা রাসায়নিক কীটনাশকের ক্ষেত্রে ঘটে থাকে⁵,⁶। তাই, কীটনাশক কার্যকারিতা বাড়াতে এবং নির্দিষ্ট কীটপতঙ্গের মধ্যে প্রতিরোধ ক্ষমতা তৈরির সম্ভাবনা কমাতে ইথিলিন অক্সাইড-ভিত্তিক যৌগের মিশ্রণ তৈরির উপর বর্তমান মনোযোগ কেন্দ্রীভূত করা হচ্ছে। এসেনশিয়াল অয়েলে (EO) উপস্থিত স্বতন্ত্র সক্রিয় যৌগগুলি সংমিশ্রণে সিনারজিস্টিক বা অ্যান্টাগনিস্টিক প্রভাব প্রদর্শন করতে পারে, যা EO-এর সামগ্রিক ক্রিয়াকলাপকে প্রতিফলিত করে। এই বিষয়টি পূর্ববর্তী গবেষকদের দ্বারা পরিচালিত গবেষণায় বিশেষভাবে জোর দেওয়া হয়েছে৭,৮। বাহক নিয়ন্ত্রণ কর্মসূচিতেও EO এবং এর উপাদানগুলি অন্তর্ভুক্ত রয়েছে। কিউলেক্স এবং অ্যানোফিলিস মশার উপর এসেনশিয়াল অয়েলের মশানাশক ক্রিয়াকলাপ ব্যাপকভাবে অধ্যয়ন করা হয়েছে। সামগ্রিক বিষাক্ততা বাড়াতে এবং পার্শ্বপ্রতিক্রিয়া কমাতে বাণিজ্যিকভাবে ব্যবহৃত সিন্থেটিক কীটনাশকের সাথে বিভিন্ন উদ্ভিদ একত্রিত করে কার্যকর কীটনাশক তৈরির জন্য বেশ কয়েকটি গবেষণা করা হয়েছে৯। কিন্তু এডিস ইজিপ্টির বিরুদ্ধে এই ধরনের যৌগের গবেষণা বিরল। চিকিৎসা বিজ্ঞানের অগ্রগতি এবং ওষুধ ও টিকার বিকাশ কিছু বাহক-বাহিত রোগ মোকাবেলায় সহায়তা করেছে। কিন্তু এডিস ইজিপ্টি মশা দ্বারা সংক্রামিত ভাইরাসের বিভিন্ন সেরোটাইপের উপস্থিতি টিকাদান কর্মসূচিকে ব্যর্থ করে দিয়েছে। অতএব, যখন এই ধরনের রোগ দেখা দেয়, তখন রোগের বিস্তার রোধ করার জন্য বাহক নিয়ন্ত্রণ কর্মসূচিই একমাত্র বিকল্প। বর্তমান প্রেক্ষাপটে, এডিস ইজিপ্টি মশা নিয়ন্ত্রণ করা অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ, কারণ এটি ডেঙ্গু জ্বর, জিকা, ডেঙ্গু হেমোরেজিক ফিভার, ইয়েলো ফিভার ইত্যাদি সৃষ্টিকারী বিভিন্ন ভাইরাস এবং তাদের সেরোটাইপের একটি প্রধান বাহক। সবচেয়ে উল্লেখযোগ্য বিষয় হলো, মিশরে প্রতি বছর প্রায় সমস্ত বাহক-বাহিত এডিস রোগের ঘটনা বাড়ছে এবং বিশ্বজুড়েও এর প্রকোপ বাড়ছে। অতএব, এই প্রেক্ষাপটে, এডিস ইজিপ্টি মশার সংখ্যা নিয়ন্ত্রণের জন্য পরিবেশবান্ধব এবং কার্যকর ব্যবস্থা গ্রহণের জরুরি প্রয়োজন রয়েছে। এক্ষেত্রে সম্ভাব্য উপাদান হলো এসেনশিয়াল অয়েল (EO), এর উপাদান যৌগসমূহ এবং এদের সংমিশ্রণ। তাই, এই গবেষণায় কীটনাশক গুণসম্পন্ন পাঁচটি উদ্ভিদ (যেমন, পুদিনা, তুলসী, ইউক্যালিপটাস স্পটেড, অ্যালিয়াম সালফার এবং মেলালিউকা) থেকে প্রাপ্ত প্রধান উদ্ভিদ এসেনশিয়াল অয়েল যৌগসমূহের কার্যকর সমন্বিত সংমিশ্রণ এডিস ইজিপ্টি মশার বিরুদ্ধে শনাক্ত করার চেষ্টা করা হয়েছে।
নির্বাচিত সমস্ত এসেনশিয়াল অয়েল (EO) এডিস ইজিপ্টি মশার বিরুদ্ধে সম্ভাব্য লার্ভানাশক কার্যকারিতা প্রদর্শন করেছে, যার ২৪-ঘণ্টার LC50 মান ০.৪২ থেকে ১৬৩.৬৫ পিপিএম পর্যন্ত। সর্বোচ্চ লার্ভানাশক কার্যকারিতা পুদিনা (Mp) এসেনশিয়াল অয়েলের ক্ষেত্রে রেকর্ড করা হয়েছে, যার ২৪ ঘণ্টায় LC50 মান ০.৪২ পিপিএম, এবং এর পরেই রয়েছে রসুন (As), যার ২৪ ঘণ্টায় LC50 মান ১৬.১৯ পিপিএম (সারণি ১)।
Ocimum Sainttum (Os EO) ব্যতীত, পরীক্ষিত অন্য চারটি EO সুস্পষ্ট অ্যালার্জি-নাশক প্রভাব দেখিয়েছে, এবং ২৪-ঘণ্টার সংস্পর্শের সময়কালে এদের LC50 মান ছিল ২৩.৩৭ থেকে ১২০.১৬ পিপিএম। ২৪ ঘণ্টার সংস্পর্শে পূর্ণাঙ্গ পোকামাকড় মারতে Thymophilus striata (Cl) EO ছিল সবচেয়ে কার্যকর, যার LC50 মান ছিল ২৩.৩৭ পিপিএম। এর পরেই ছিল Eucalyptus maculata (Em), যার LC50 মান ছিল ১০১.৯১ পিপিএম (সারণি ১)। অন্যদিকে, Os-এর LC50 মান এখনও নির্ধারণ করা হয়নি, কারণ সর্বোচ্চ মাত্রায় ৫৩% সর্বোচ্চ মৃত্যুহার রেকর্ড করা হয়েছিল (পরিপূরক চিত্র ৩)।
NIST লাইব্রেরি ডেটাবেসের ফলাফল, GC ক্রোমাটোগ্রামের ক্ষেত্রফলের শতাংশ এবং MS স্পেকট্রার ফলাফলের উপর ভিত্তি করে প্রতিটি EO-এর দুটি প্রধান উপাদান যৌগ শনাক্ত ও নির্বাচন করা হয়েছিল (সারণি ২)। EO As-এর ক্ষেত্রে, শনাক্তকৃত প্রধান যৌগগুলো ছিল ডাইঅ্যালিল ডাইসালফাইড এবং ডাইঅ্যালিল ট্রাইসালফাইড; EO Mp-এর ক্ষেত্রে, শনাক্তকৃত প্রধান যৌগগুলো ছিল কারভোন এবং লিমোনিন; EO Em-এর ক্ষেত্রে, শনাক্তকৃত প্রধান যৌগগুলো ছিল ইউডেসমল এবং ইউক্যালিপটল; EO Os-এর ক্ষেত্রে, শনাক্তকৃত প্রধান যৌগগুলো ছিল ইউজেনল এবং মিথাইল ইউজেনল; এবং EO Cl-এর ক্ষেত্রে, শনাক্তকৃত প্রধান যৌগগুলো ছিল ইউজেনল এবং α-পিনিন (চিত্র ১, পরিপূরক চিত্র ৫–৮, পরিপূরক সারণি ১–৫)।
নির্বাচিত এসেনশিয়াল অয়েলগুলোর প্রধান টারপেনয়েডসমূহের ভর বর্ণালিবীক্ষণের ফলাফল (A-ডাইঅ্যালিল ডাইসালফাইড; B-ডাইঅ্যালিল ট্রাইসালফাইড; C-ইউজেনল; D-মিথাইল ইউজেনল; E-লিমোনিন; F-অ্যারোমেটিক সেপেরোন; G-α-পিনিন; H-সিনিওল; R-ইউডামোল)।
মোট নয়টি যৌগকে (ডাইঅ্যালিল ডাইসালফাইড, ডাইঅ্যালিল ট্রাইসালফাইড, ইউজেনল, মিথাইল ইউজেনল, কারভোন, লিমোনিন, ইউক্যালিপটল, ইউডেসমল, α-পিনিন) কার্যকরী যৌগ হিসেবে চিহ্নিত করা হয়েছে, যেগুলো ইও (EO)-এর প্রধান উপাদান এবং লার্ভা পর্যায়ে এডিস ইজিপ্টি মশার বিরুদ্ধে পৃথকভাবে জৈব-পরীক্ষা করা হয়েছে। ২৪ ঘণ্টা সংস্পর্শের পর ইউডেসমল যৌগটির লার্ভানাশক কার্যকারিতা ছিল সর্বোচ্চ, যার LC50 মান ছিল ২.২৫ পিপিএম। ডাইঅ্যালিল ডাইসালফাইড এবং ডাইঅ্যালিল ট্রাইসালফাইড যৌগ দুটিরও সম্ভাব্য লার্ভানাশক প্রভাব রয়েছে বলে দেখা গেছে, যাদের গড় উপ-প্রাণঘাতী মাত্রা ১০-২০ পিপিএম-এর মধ্যে। ইউজেনল, লিমোনিন এবং ইউক্যালিপটল যৌগগুলির ক্ষেত্রে মাঝারি লার্ভানাশক কার্যকারিতা পুনরায় পরিলক্ষিত হয়েছে, যাদের LC50 মান ২৪ ঘণ্টা পর যথাক্রমে ৬৩.৩৫ পিপিএম, ১৩৯.২৯ পিপিএম এবং ১৮১.৩৩ পিপিএম (সারণি ৩)। তবে, মিথাইল ইউজেনল এবং কারভোনের কোনো উল্লেখযোগ্য লার্ভানাশক ক্ষমতা সর্বোচ্চ মাত্রাতেও পাওয়া যায়নি, তাই LC50 মান গণনা করা হয়নি (সারণি ৩)। কৃত্রিম লার্ভানাশক টেমেফসের ক্ষেত্রে, ২৪ ঘণ্টার সংস্পর্শে এডিস ইজিপ্টি মশার বিরুদ্ধে গড় প্রাণঘাতী ঘনত্ব ছিল ০.৪৩ পিপিএম (সারণি ৩, পরিপূরক সারণি ৬)।
সাতটি যৌগকে (ডাইঅ্যালিল ডাইসালফাইড, ডাইঅ্যালিল ট্রাইসালফাইড, ইউক্যালিপটল, আলফা-পিনিন, ইউডেসমল, লিমোনিন এবং কারভোন) কার্যকরী ইও (EO)-এর প্রধান যৌগ হিসেবে চিহ্নিত করা হয়েছিল এবং পূর্ণাঙ্গ মিশরীয় এডিস মশার বিরুদ্ধে পৃথকভাবে পরীক্ষা করা হয়েছিল। প্রোবিট রিগ্রেশন বিশ্লেষণ অনুসারে, ২৪-ঘণ্টার সংস্পর্শে ইউডেসমলের LC50 মান ১.৮২ পিপিএম হওয়ায় এর কার্যকারিতা সর্বোচ্চ বলে প্রমাণিত হয়েছে, এরপরেই রয়েছে ইউক্যালিপটল যার LC50 মান ১৭.৬০ পিপিএম। পরীক্ষিত বাকি পাঁচটি যৌগ পূর্ণাঙ্গ মশার জন্য মাঝারিভাবে ক্ষতিকর ছিল, যাদের LC50-এর মান ১৪০.৭৯ থেকে ৭৩৭.০১ পিপিএম পর্যন্ত ছিল (সারণি ৩)। কৃত্রিম অর্গানোফসফরাস ম্যালাথিয়ন ইউডেসমলের চেয়ে কম শক্তিশালী এবং অন্য ছয়টি যৌগের চেয়ে বেশি শক্তিশালী ছিল, যার LC50 মান ২৪-ঘণ্টার সংস্পর্শে ৫.৪৪ পিপিএম ছিল (সারণি ৩, পরিপূরক সারণি ৬)।
সাতটি শক্তিশালী প্রধান যৌগ এবং অর্গানোফসফরাস ট্যামেফোসেটকে তাদের LC50 ডোজের ১:১ অনুপাতে দ্বৈত সংমিশ্রণ তৈরির জন্য নির্বাচন করা হয়েছিল। মোট ২৮টি দ্বৈত সংমিশ্রণ প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং এডিস ইজিপ্টি মশার বিরুদ্ধে তাদের লার্ভানাশক কার্যকারিতা পরীক্ষা করা হয়েছিল। নয়টি সংমিশ্রণকে সিনারজিস্টিক, ১৪টি সংমিশ্রণকে অ্যান্টাগনিস্টিক এবং পাঁচটি সংমিশ্রণকে লার্ভানাশক নয় বলে পাওয়া গেছে। সিনারজিস্টিক সংমিশ্রণগুলোর মধ্যে, ডায়ালিল ডাইসালফাইড এবং টেমোফলের সংমিশ্রণটি সবচেয়ে কার্যকর ছিল, যেখানে ২৪ ঘণ্টা পর ১০০% মৃত্যুহার পরিলক্ষিত হয়েছে (সারণি ৪)। একইভাবে, ডায়ালিল ডাইসালফাইডের সাথে লিমোনিন এবং থাইমেটফসের সাথে ইউজেনলের মিশ্রণ ৯৮.৩% লার্ভা মৃত্যুহারের সাথে ভালো সম্ভাবনা দেখিয়েছে (সারণি ৫)। অবশিষ্ট ৪টি সংমিশ্রণ, যথা ইউডেস্মল ও ইউক্যালিপটল, ইউডেস্মল ও লিমোনিন, ইউক্যালিপটল ও আলফা-পিনিন, এবং আলফা-পিনিন ও টেমেফস, উল্লেখযোগ্য লার্ভানাশক কার্যকারিতা দেখিয়েছে, যেখানে পর্যবেক্ষণকৃত মৃত্যুহার ৯০%-এর বেশি ছিল। প্রত্যাশিত মৃত্যুহার ৬০-৭৫%-এর কাছাকাছি। (সারণি ৪)। তবে, লিমোনিনের সাথে α-পিনিন বা ইউক্যালিপটাসের সংমিশ্রণ বিপরীতধর্মী প্রতিক্রিয়া দেখিয়েছে। একইভাবে, টেমেফসের সাথে ইউজেনল বা ইউক্যালিপটাস বা ইউডেস্মল বা ডাইঅ্যালিল ট্রাইসালফাইডের মিশ্রণ বিপরীতধর্মী প্রভাব ফেলে বলে দেখা গেছে। একইভাবে, ডাইঅ্যালিল ডাইসালফাইড ও ডাইঅ্যালিল ট্রাইসালফাইডের সংমিশ্রণ এবং এই যৌগগুলোর যেকোনো একটির সাথে ইউডেস্মল বা ইউজেনলের সংমিশ্রণ তাদের লার্ভানাশক ক্রিয়ায় বিপরীতধর্মী। ইউডেস্মলের সাথে ইউজেনল বা α-পিনিনের সংমিশ্রণের ক্ষেত্রেও বিপরীতধর্মীতার কথা জানা গেছে।
প্রাপ্তবয়স্ক পোকার উপর অম্লীয় ক্রিয়াকলাপের জন্য পরীক্ষিত ২৮টি বাইনারি মিশ্রণের মধ্যে, ৭টি সংমিশ্রণ সিনারজিস্টিক (সহায়ক), ৬টির কোনো প্রভাব ছিল না এবং ১৫টি অ্যান্টাগনিস্টিক (বিপরীতধর্মী) ছিল। ইউডেস্মলের সাথে ইউক্যালিপটাস এবং লিমোনিনের সাথে কারভোনের মিশ্রণ অন্যান্য সিনারজিস্টিক সংমিশ্রণের চেয়ে বেশি কার্যকর বলে প্রমাণিত হয়েছে, যেখানে ২৪ ঘণ্টায় মৃত্যুর হার ছিল যথাক্রমে ৭৬% এবং ১০০% (সারণি ৫)। লিমোনিন এবং ডাইঅ্যালিল ট্রাইসালফাইড ব্যতীত অন্যান্য সমস্ত যৌগের সংমিশ্রণের সাথে ম্যালাথিয়নের সিনারজিস্টিক প্রভাব পরিলক্ষিত হয়েছে। অন্যদিকে, ডাইঅ্যালিল ডাইসালফাইড এবং ডাইঅ্যালিল ট্রাইসালফাইডের সাথে এদের যেকোনো একটির সাথে ইউক্যালিপটাস, বা ইউক্যালিপটল, বা কারভোন, বা লিমোনিনের সংমিশ্রণের মধ্যে অ্যান্টাগনিজম (বিপরীতধর্মী) পরিলক্ষিত হয়েছে। একইভাবে, আলফা-পিনিনের সাথে ইউডেসমল বা লিমোনিন, ইউক্যালিপটলের সাথে কারভোন বা লিমোনিন, এবং লিমোনিনের সাথে ইউডেসমল বা ম্যালাথিয়নের সংমিশ্রণগুলো বিপরীতধর্মী লার্ভানাশক প্রভাব দেখিয়েছে। অবশিষ্ট ছয়টি সংমিশ্রণের ক্ষেত্রে, প্রত্যাশিত এবং পর্যবেক্ষিত মৃত্যুহারের মধ্যে কোনো উল্লেখযোগ্য পার্থক্য ছিল না (সারণি ৫)।
সমন্বিত প্রভাব এবং প্রাণঘাতী নয় এমন মাত্রার উপর ভিত্তি করে, বিপুল সংখ্যক এডিস ইজিপ্টি মশার বিরুদ্ধে এদের লার্ভানাশক বিষাক্ততা অবশেষে নির্বাচন করা হয় এবং আরও পরীক্ষা করা হয়। ফলাফলে দেখা যায় যে, ইউজেনল-লিমোনিন, ডাইঅ্যালিল ডাইসালফাইড-লিমোনিন এবং ডাইঅ্যালিল ডাইসালফাইড-টাইমফস-এর দ্বৈত সংমিশ্রণ ব্যবহার করে পর্যবেক্ষণকৃত লার্ভা মৃত্যুহার ছিল ১০০%, যেখানে প্রত্যাশিত লার্ভা মৃত্যুহার ছিল যথাক্রমে ৭৬.৪৮%, ৭২.১৬% এবং ৬৩.৪% (সারণি ৬)। লিমোনিন এবং ইউডেস্মলের সংমিশ্রণটি তুলনামূলকভাবে কম কার্যকর ছিল, ২৪-ঘণ্টার সংস্পর্শে ৮৮% লার্ভা মৃত্যুহার পরিলক্ষিত হয় (সারণি ৬)। সারসংক্ষেপে, নির্বাচিত চারটি দ্বৈত সংমিশ্রণ বৃহৎ পরিসরে প্রয়োগ করা হলে এডিস ইজিপ্টি মশার বিরুদ্ধে সমন্বিত লার্ভানাশক প্রভাব প্রদর্শন করে (সারণি ৬)।
পূর্ণাঙ্গ এডিস ইজিপ্টি মশার বিশাল জনসংখ্যা নিয়ন্ত্রণের জন্য পূর্ণাঙ্গ মশানাশক জৈব পরীক্ষার উদ্দেশ্যে তিনটি সমন্বিত সংমিশ্রণ নির্বাচন করা হয়েছিল। পোকামাকড়ের বড় কলোনিতে পরীক্ষা করার জন্য সংমিশ্রণ নির্বাচন করতে, আমরা প্রথমে দুটি সেরা সমন্বিত টারপিন সংমিশ্রণের উপর মনোযোগ দিয়েছিলাম, যথা কারভোন ও লিমোনিন এবং ইউক্যালিপটল ও ইউডেস্মল। দ্বিতীয়ত, কৃত্রিম অর্গানোফসফেট ম্যালাথিয়ন এবং টারপিনয়েডের সংমিশ্রণ থেকে সেরা সমন্বিত সংমিশ্রণটি নির্বাচন করা হয়েছিল। আমরা বিশ্বাস করি যে ম্যালাথিয়ন এবং ইউডেস্মলের সংমিশ্রণটি পোকামাকড়ের বড় কলোনিতে পরীক্ষার জন্য সেরা, কারণ এতে সর্বোচ্চ মৃত্যুহার পরিলক্ষিত হয়েছে এবং নির্বাচিত উপাদানগুলোর LC50 মান অত্যন্ত কম। ম্যালাথিয়ন আলফা-পিনিন, ডায়ালিল ডাইসালফাইড, ইউক্যালিপটাস, কারভোন এবং ইউডেস্মলের সাথে সংমিশ্রণে সমন্বিত প্রভাব প্রদর্শন করে। কিন্তু যদি আমরা LC50 মানের দিকে তাকাই, তবে ইউডেস্মলের মান সর্বনিম্ন (২.২৫ পিপিএম)। ম্যালাথিয়ন, আলফা-পিনিন, ডায়ালিল ডাইসালফাইড, ইউক্যালিপটল এবং কারভোনের গণনাকৃত LC50 মান ছিল যথাক্রমে ৫.৪, ৭১৬.৫৫, ১৬৬.০২, ১৭.৬ এবং ১৪০.৭৯ পিপিএম। এই মানগুলো নির্দেশ করে যে ডোজের দিক থেকে ম্যালাথিয়ন এবং ইউডেস্মলের সংমিশ্রণটিই সর্বোত্তম সংমিশ্রণ। ফলাফল থেকে দেখা যায় যে, কারভোন ও লিমোনিন এবং ইউডেস্মল ও ম্যালাথিয়নের সংমিশ্রণে ১০০% পর্যবেক্ষণকৃত মৃত্যুহার দেখা গেছে, যেখানে প্রত্যাশিত মৃত্যুহার ছিল ৬১% থেকে ৬৫%। আরেকটি সংমিশ্রণ, ইউডেস্মল ও ইউক্যালিপটল, ২৪ ঘণ্টা সংস্পর্শে থাকার পর ৭৮.৬৬% মৃত্যুহার দেখিয়েছে, যেখানে প্রত্যাশিত মৃত্যুহার ছিল ৬০%। নির্বাচিত তিনটি সংমিশ্রণই পূর্ণবয়স্ক এডিস ইজিপ্টি মশার বিরুদ্ধে বৃহৎ পরিসরে প্রয়োগ করা হলেও সিনারজিস্টিক প্রভাব প্রদর্শন করেছে (সারণি ৬)।
এই গবেষণায়, নির্বাচিত উদ্ভিদ এসেনশিয়াল অয়েল যেমন Mp, As, Os, Em এবং Cl, Aedes aegypti মশার লার্ভা এবং পূর্ণাঙ্গ দশার উপর আশাব্যঞ্জক প্রাণঘাতী প্রভাব দেখিয়েছে। Mp এসেনশিয়াল অয়েলের লার্ভানাশক কার্যকারিতা ছিল সর্বোচ্চ, যার LC50 মান ছিল ০.৪২ পিপিএম। এর পরেই ছিল As, Os এবং Em এসেনশিয়াল অয়েল, যাদের ২৪ ঘণ্টা পর LC50 মান ছিল ৫০ পিপিএম-এর কম। এই ফলাফলগুলো মশা এবং অন্যান্য ডিপটেরাস মাছি নিয়ে করা পূর্ববর্তী গবেষণার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ¹⁰,¹¹,¹²,¹³,¹⁴। যদিও Cl-এর লার্ভানাশক ক্ষমতা অন্যান্য এসেনশিয়াল অয়েলের তুলনায় কম, যার ২৪ ঘণ্টা পর LC50 মান ১৬৩.৬৫ পিপিএম, তবে পূর্ণাঙ্গ মশার উপর এর কার্যকারিতা সর্বোচ্চ, যার LC50 মান ২৪ ঘণ্টা পর ২৩.৩৭ পিপিএম। Mp, As এবং Em EO-গুলোও ২৪ ঘণ্টা সংস্পর্শে ১০০-১২০ পিপিএম পরিসরে LC50 মান সহ ভালো অ্যালার্জি-নাশক ক্ষমতা দেখিয়েছে, কিন্তু তাদের লার্ভা-নাশক কার্যকারিতার তুলনায় তা তুলনামূলকভাবে কম ছিল। অন্যদিকে, EO Os সর্বোচ্চ থেরাপিউটিক ডোজেও একটি নগণ্য অ্যালার্জি-নাশক প্রভাব প্রদর্শন করেছে। সুতরাং, ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে উদ্ভিদের প্রতি ইথিলিন অক্সাইডের বিষাক্ততা মশার বিকাশের পর্যায়ের উপর নির্ভর করে পরিবর্তিত হতে পারে¹⁵। এটি পোকামাকড়ের দেহে EO-গুলোর প্রবেশের হার, নির্দিষ্ট লক্ষ্য এনজাইমগুলির সাথে তাদের মিথস্ক্রিয়া এবং প্রতিটি বিকাশের পর্যায়ে মশার বিষমুক্তকরণ ক্ষমতার উপরও নির্ভর করে¹⁶। বহু গবেষণায় দেখা গেছে যে ইথিলিন অক্সাইডের জৈবিক ক্রিয়াকলাপের ক্ষেত্রে প্রধান উপাদান যৌগটি একটি গুরুত্বপূর্ণ বিষয়, কারণ এটি মোট যৌগের বেশিরভাগ অংশই দখল করে থাকে³,¹²,¹⁷,¹⁸। অতএব, আমরা প্রতিটি EO-তে দুটি প্রধান যৌগ বিবেচনা করেছি। GC-MS ফলাফলের উপর ভিত্তি করে, ডায়ালিল ডাইসালফাইড এবং ডায়ালিল ট্রাইসালফাইডকে EO As-এর প্রধান যৌগ হিসেবে শনাক্ত করা হয়েছে, যা পূর্ববর্তী প্রতিবেদন¹⁹,²⁰,²¹-এর সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। যদিও পূর্ববর্তী প্রতিবেদনগুলোতে মেন্থলকে এর অন্যতম প্রধান যৌগ হিসেবে উল্লেখ করা হয়েছিল, Mp EO²²,²³-এর প্রধান যৌগ হিসেবে পুনরায় কারভোন এবং লিমোনিনকে শনাক্ত করা হয়েছে। Os EO-এর গঠন প্রোফাইল থেকে দেখা যায় যে ইউজেনল এবং মিথাইল ইউজেনল হলো এর প্রধান যৌগ, যা পূর্ববর্তী গবেষকদের¹⁶,²⁴ গবেষণার ফলাফলের অনুরূপ। Em পাতার তেলে উপস্থিত প্রধান যৌগ হিসেবে ইউক্যালিপটল এবং ইউক্যালিপটল-এর কথা বলা হয়েছে, যা কিছু গবেষকের²⁵,²⁶ গবেষণার ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ কিন্তু ওলালাদে প্রমুখের²⁷ গবেষণার ফলাফলের বিপরীত। মেলালিউকা এসেনশিয়াল অয়েলে সিনিওল এবং α-পিনিনের প্রাধান্য লক্ষ্য করা গেছে, যা পূর্ববর্তী গবেষণা²⁸,²⁹-এর অনুরূপ। একই উদ্ভিদ প্রজাতি থেকে বিভিন্ন স্থানে নিষ্কাশিত অপরিহার্য তেলের গঠন এবং ঘনত্বের মধ্যে আন্তঃপ্রজাতিগত পার্থক্য পরিলক্ষিত হয়েছে এবং এই গবেষণায়ও তা লক্ষ্য করা গেছে, যা ভৌগোলিক উদ্ভিদ বৃদ্ধির অবস্থা, ফসল তোলার সময়, বিকাশের পর্যায়, বা উদ্ভিদের বয়স, কেমোটাইপের আবির্ভাব ইত্যাদি দ্বারা প্রভাবিত হয়।২২,৩০,৩১,৩২ এরপর চিহ্নিত প্রধান যৌগগুলি ক্রয় করে তাদের লার্ভানাশক প্রভাব এবং পূর্ণবয়স্ক এডিস ইজিপ্টি মশার উপর প্রভাব পরীক্ষা করা হয়েছিল। ফলাফলে দেখা গেছে যে ডায়ালিল ডাইসালফাইডের লার্ভানাশক কার্যকারিতা অপরিশোধিত ইও এএস-এর সাথে তুলনীয়। কিন্তু ডায়ালিল ট্রাইসালফাইডের কার্যকারিতা ইও এএস-এর চেয়ে বেশি। এই ফলাফলগুলি কিউলেক্স ফিলিপিন্স-এর উপর কিম্বারিস এট আল. ৩৩ দ্বারা প্রাপ্ত ফলাফলের অনুরূপ। তবে, এই দুটি যৌগ লক্ষ্য মশার বিরুদ্ধে ভালো স্ব-নাশক কার্যকারিতা দেখায়নি, যা টেনিব্রিও মলিটর-এর উপর প্লাটা-রুয়েডা এট আল. ৩৪-এর ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। Os EO এডিস ইজিপ্টি মশার লার্ভা দশার বিরুদ্ধে কার্যকর, কিন্তু পূর্ণাঙ্গ দশার বিরুদ্ধে নয়। এটি প্রতিষ্ঠিত হয়েছে যে প্রধান স্বতন্ত্র যৌগগুলির লার্ভানাশক কার্যকারিতা অপরিশোধিত Os EO-এর চেয়ে কম। এটি অপরিশোধিত ইথিলিন অক্সাইডে অন্যান্য যৌগ এবং তাদের পারস্পরিক ক্রিয়ার ভূমিকার ইঙ্গিত দেয়। শুধুমাত্র মিথাইল ইউজেনলের কার্যকারিতা নগণ্য, যেখানে শুধুমাত্র ইউজেনলের লার্ভানাশক কার্যকারিতা মাঝারি। এই উপসংহার একদিকে,³⁵,³⁶ পূর্ববর্তী গবেষকদের উপসংহারকে সমর্থন করে, এবং অন্যদিকে, তাদের উপসংহারের বিরোধিতা করে।³⁷,³⁸ ইউজেনল এবং মিথাইলইউজেনলের কার্যকরী গ্রুপগুলির মধ্যে পার্থক্যের কারণে একই লক্ষ্যবস্তু পোকামাকড়ের প্রতি তাদের বিষাক্ততা ভিন্ন হতে পারে।³⁹ লিমোনিনের লার্ভানাশক কার্যকারিতা মাঝারি পাওয়া গেছে, যেখানে কারভোনের প্রভাব ছিল নগণ্য। একইভাবে, পূর্ণাঙ্গ পোকামাকড়ের প্রতি লিমোনিনের তুলনামূলকভাবে কম বিষাক্ততা এবং কারভোনের উচ্চ বিষাক্ততা কিছু পূর্ববর্তী গবেষণার ফলাফলকে সমর্থন করে,⁴⁰ কিন্তু অন্যদের বিরোধিতা করে।⁴¹ অন্তঃচক্রীয় এবং বহিঃচক্রীয় উভয় অবস্থানে দ্বিবন্ধনের উপস্থিতি লার্ভানাশক হিসেবে এই যৌগগুলির উপকারিতা বাড়াতে পারে³,⁴¹, যেখানে কারভোন, যা অসম্পৃক্ত আলফা এবং বিটা কার্বনযুক্ত একটি কিটোন, পূর্ণাঙ্গ মশার ক্ষেত্রে উচ্চতর বিষাক্ততার সম্ভাবনা প্রদর্শন করতে পারে⁴²। তবে, লিমোনিন এবং কারভোনের স্বতন্ত্র বৈশিষ্ট্যসমূহ মোট EO Mp-এর তুলনায় অনেক কম (সারণি ১, সারণি ৩)। পরীক্ষিত টারপিনয়েডগুলির মধ্যে, ইউডেস্মলের লার্ভানাশক এবং পূর্ণাঙ্গ মশার উপর সর্বাধিক কার্যকারিতা পাওয়া গেছে, যার LC₅₀ মান ২.৫ পিপিএম-এর নিচে, যা এটিকে এডিস মশা নিয়ন্ত্রণের জন্য একটি সম্ভাবনাময় যৌগ হিসেবে তৈরি করে। এর কার্যকারিতা সম্পূর্ণ EO Em-এর চেয়েও ভালো, যদিও এটি চেং এট আল.⁴⁰-এর গবেষণার ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ নয়। ইউডেস্মল হলো দুটি আইসোপ্রিন এককযুক্ত একটি সেসকুইটারপিন যা ইউক্যালিপটাসের মতো অক্সিজেনযুক্ত মনোটারপিনের চেয়ে কম উদ্বায়ী এবং তাই কীটনাশক হিসেবে এর সম্ভাবনা বেশি। ইউক্যালিপটলের নিজস্ব পূর্ণাঙ্গ মশার উপর কার্যকারিতা লার্ভানাশক কার্যকারিতার চেয়ে বেশি, এবং পূর্ববর্তী গবেষণার ফলাফল এই বিষয়টিকে সমর্থন ও খণ্ডন উভয়ই করে থাকে। এর একক কার্যকারিতা প্রায় সম্পূর্ণ ইউক্যালিপটল অক্সাইডের (EO Cl) কার্যকারিতার সমতুল্য। আরেকটি বাইসাইক্লিক মনোটারপিন, α-পিনিন, এডিস ইজিপ্টি মশার উপর লার্ভানাশক প্রভাবের চেয়ে পূর্ণাঙ্গ মশার উপর কম প্রভাব ফেলে, যা সম্পূর্ণ ইউক্যালিপটল অক্সাইডের (EO Cl) প্রভাবের বিপরীত। টারপিনয়েডের সামগ্রিক কীটনাশক কার্যকারিতা তাদের লিপোফিলিসিটি, উদ্বায়িতা, কার্বন শাখা, প্রক্ষেপণ ক্ষেত্র, পৃষ্ঠতল ক্ষেত্রফল, কার্যকরী গ্রুপ এবং তাদের অবস্থান দ্বারা প্রভাবিত হয়। এই যৌগগুলি কোষের জমাটবদ্ধতা ধ্বংস করে, শ্বসন ক্রিয়া বন্ধ করে, স্নায়ু সংকেতের সঞ্চালন ব্যাহত করে ইত্যাদি উপায়ে কাজ করতে পারে। কৃত্রিম অর্গানোফসফেট টেমেফসের সর্বোচ্চ লার্ভানাশক কার্যকারিতা পাওয়া গেছে, যার LC50 মান ০.৪৩ পিপিএম, যা লেকের তথ্যের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। কৃত্রিম অর্গানোফসফরাস ম্যালাথিয়নের পূর্ণাঙ্গ মশার উপর কার্যকারিতা ৫.৪৪ পিপিএম মাত্রায় পরিলক্ষিত হয়েছে। যদিও এই দুটি অর্গানোফসফেট এডিস ইজিপ্টি মশার পরীক্ষাগার স্ট্রেইনের বিরুদ্ধে অনুকূল প্রতিক্রিয়া দেখিয়েছে, বিশ্বের বিভিন্ন অংশে এই যৌগগুলির প্রতি মশার প্রতিরোধ ক্ষমতা তৈরি হওয়ার খবর পাওয়া গেছে⁴⁹। তবে, ভেষজ ওষুধের প্রতি প্রতিরোধ ক্ষমতা তৈরির অনুরূপ কোনো প্রতিবেদন পাওয়া যায়নি⁵⁰। সুতরাং, বাহক নিয়ন্ত্রণ কর্মসূচিতে রাসায়নিক কীটনাশকের সম্ভাব্য বিকল্প হিসেবে উদ্ভিদজাত দ্রব্যকে বিবেচনা করা হয়।
শক্তিশালী টার্পেনয়েড এবং থাইমেটফসের সাথে টার্পেনয়েড থেকে প্রস্তুত ২৮টি বাইনারি সংমিশ্রণের (১:১) উপর লার্ভানাশক প্রভাব পরীক্ষা করা হয়েছিল, এবং ৯টি সংমিশ্রণকে সিনারজিস্টিক, ১৪টিকে অ্যান্টাগনিস্টিক এবং ৫টিকে অ্যান্টাগনিস্টিক হিসেবে পাওয়া গেছে। কোনো প্রভাব নেই। অন্যদিকে, পূর্ণাঙ্গ প্রাণীর উপর কার্যকারিতার বায়োঅ্যাসেতে, ৭টি সংমিশ্রণকে সিনারজিস্টিক, ১৫টি সংমিশ্রণকে অ্যান্টাগনিস্টিক হিসেবে পাওয়া গেছে এবং ৬টি সংমিশ্রণের কোনো প্রভাব নেই বলে জানা গেছে। নির্দিষ্ট কিছু সংমিশ্রণের সিনারজিস্টিক প্রভাব তৈরির কারণ হতে পারে যে, পরীক্ষামূলক যৌগগুলো একই সাথে বিভিন্ন গুরুত্বপূর্ণ পথে মিথস্ক্রিয়া করে, অথবা একটি নির্দিষ্ট জৈবিক পথের বিভিন্ন মূল এনজাইমের ক্রমিক বাধাদানের কারণেও হতে পারে৫১। লিমোনিনের সাথে ডায়ালিল ডিসালফাইড, ইউক্যালিপটাস বা ইউজেনলের সংমিশ্রণ ছোট এবং বড় উভয় পরিসরের প্রয়োগেই সিনারজিস্টিক বলে পাওয়া গেছে (সারণী ৬), যেখানে ইউক্যালিপটাস বা α-পিনিনের সাথে এর সংমিশ্রণ লার্ভার উপর অ্যান্টাগনিস্টিক প্রভাব ফেলে বলে দেখা গেছে। গড় হিসাবে, লিমোনিন একটি ভালো সিনারজিস্ট বলে মনে হয়, সম্ভবত মিথাইল গ্রুপের উপস্থিতি, স্ট্র্যাটাম কর্নিয়ামে ভালো অনুপ্রবেশ এবং একটি ভিন্ন কার্যপ্রণালীর কারণে৫২,৫৩। পূর্বে রিপোর্ট করা হয়েছে যে লিমোনিন পোকামাকড়ের কিউটিকল ভেদ করে (সংস্পর্শজনিত বিষক্রিয়া), পরিপাকতন্ত্রকে প্রভাবিত করে (খাদ্যগ্রহণে বাধা দেয়), বা শ্বসনতন্ত্রকে প্রভাবিত করে (ধূমায়ন ক্রিয়া) বিষাক্ত প্রভাব ফেলতে পারে,৫৪ যেখানে ইউজেনলের মতো ফিনাইলপ্রোপানয়েড বিপাকীয় এনজাইমকে প্রভাবিত করতে পারে ৫৫। অতএব, ভিন্ন কার্যপ্রণালীযুক্ত যৌগগুলির সংমিশ্রণ মিশ্রণের সামগ্রিক প্রাণঘাতী প্রভাব বাড়িয়ে তুলতে পারে। ইউক্যালিপটলকে ডায়ালিল ডিসালফাইড, ইউক্যালিপটাস বা α-পিনিনের সাথে সিনারজিস্টিক হিসাবে পাওয়া গেছে, কিন্তু অন্যান্য যৌগের সাথে অন্যান্য সংমিশ্রণ হয় লার্ভানাশক ছিল না অথবা অ্যান্টাগনিস্টিক ছিল। প্রাথমিক গবেষণায় দেখা গেছে যে ইউক্যালিপটলের অ্যাসিটাইলকোলিনেস্টারেজ (AChE), সেইসাথে অক্টাঅ্যামাইন এবং GABA রিসেপ্টরগুলির উপর প্রতিরোধমূলক ক্রিয়া রয়েছে৫৬। যেহেতু চক্রীয় মনোটারপিন, ইউক্যালিপটল, ইউজেনল ইত্যাদির কার্যপ্রণালী তাদের নিউরোটক্সিক কার্যকলাপের মতোই হতে পারে, 57 তাই পারস্পরিক বাধার মাধ্যমে তাদের সম্মিলিত প্রভাব হ্রাস পায়। একইভাবে, টেমেফসের সাথে ডায়ালিল ডিসালফাইড, α-পিনিন এবং লিমোনিনের সংমিশ্রণকে সিনারজিস্টিক বলে মনে করা হয়, যা ভেষজ পণ্য এবং সিন্থেটিক অর্গানোফসফেটের মধ্যে সিনারজিস্টিক প্রভাবের পূর্ববর্তী প্রতিবেদনগুলিকে সমর্থন করে58।
এডিস ইজিপ্টি মশার লার্ভা এবং পূর্ণাঙ্গ দশার উপর ইউডেসমল এবং ইউক্যালিপটলের সংমিশ্রণের একটি সিনারজিস্টিক প্রভাব পাওয়া গেছে, সম্ভবত তাদের ভিন্ন রাসায়নিক কাঠামোর কারণে তাদের ভিন্ন কার্যপ্রণালীর জন্য। ইউডেসমল (একটি সেসকুইটারপিন) শ্বসনতন্ত্রকে প্রভাবিত করতে পারে ৫৯ এবং ইউক্যালিপটল (একটি মনোটারপিন) অ্যাসিটাইলকোলিনেস্টারেজকে প্রভাবিত করতে পারে ৬০। দুই বা ততোধিক টার্গেট সাইটে উপাদানগুলির সহ-প্রভাব সংমিশ্রণটির সামগ্রিক প্রাণঘাতী প্রভাব বাড়িয়ে তুলতে পারে। পূর্ণাঙ্গ মশার উপর পদার্থের বায়োঅ্যাসে-তে, ম্যালাথিয়নকে কারভোন বা ইউক্যালিপটল বা ডায়ালিল ডাইসালফাইড বা α-পিনিনের সাথে সিনারজিস্টিক বলে পাওয়া গেছে, যা ইঙ্গিত করে যে এটি লিমোনিন এবং ডাই-এর সংযোজনের সাথে সিনারজিস্টিক। অ্যালিল ট্রাইসালফাইড ব্যতীত টারপিন যৌগগুলির সম্পূর্ণ পোর্টফোলিওর জন্য ভাল সিনারজিস্টিক অ্যালারসাইড প্রার্থী। থাঙ্গাম এবং কাথিরেসান৬১ ভেষজ নির্যাসের সাথে ম্যালাথিয়নের সিনারজিস্টিক প্রভাবের অনুরূপ ফলাফল রিপোর্ট করেছেন। এই সিনারজিস্টিক প্রতিক্রিয়া পোকামাকড়ের ডিটক্সিফাইং এনজাইমের উপর ম্যালাথিয়ন এবং ফাইটোকেমিক্যালের সম্মিলিত বিষাক্ত প্রভাবের কারণে হতে পারে। ম্যালাথিয়নের মতো অর্গানোফসফেটগুলি সাধারণত সাইটোক্রোম P450 এস্টারেজ এবং মনোঅক্সিজিনেজ৬২,৬৩,৬৪ কে বাধা দিয়ে কাজ করে। অতএব, এই কার্যপ্রণালীর ম্যালাথিয়ন এবং ভিন্ন কার্যপ্রণালীর টারপিনের সংমিশ্রণ মশার উপর সামগ্রিক প্রাণঘাতী প্রভাব বাড়াতে পারে।
অন্যদিকে, অ্যান্টাগোনিজম নির্দেশ করে যে নির্বাচিত যৌগগুলি একত্রে প্রতিটি যৌগের একার তুলনায় কম সক্রিয়। কিছু সংমিশ্রণে অ্যান্টাগোনিজমের কারণ হতে পারে যে একটি যৌগ শোষণ, বিতরণ, বিপাক বা নির্গমনের হার পরিবর্তন করে অন্য যৌগটির আচরণকে পরিবর্তন করে। পূর্ববর্তী গবেষকরা ওষুধের সংমিশ্রণে অ্যান্টাগোনিজমের কারণ হিসেবে এটিকে বিবেচনা করতেন। অণুসমূহ সম্ভাব্য কার্যপ্রণালী ৬৫। একইভাবে, অ্যান্টাগোনিজমের সম্ভাব্য কারণগুলি একই রকম কার্যপ্রণালী, একই রিসেপ্টর বা টার্গেট সাইটের জন্য উপাদান যৌগগুলির মধ্যে প্রতিযোগিতার সাথে সম্পর্কিত হতে পারে। কিছু ক্ষেত্রে, টার্গেট প্রোটিনের নন-কম্পিটিটিভ ইনহিবিশনও ঘটতে পারে। এই গবেষণায়, দুটি অর্গানোসালফার যৌগ, ডায়ালিল ডাইসালফাইড এবং ডায়ালিল ট্রাইসালফাইড, অ্যান্টাগোনিস্টিক প্রভাব দেখিয়েছে, সম্ভবত একই টার্গেট সাইটের জন্য প্রতিযোগিতার কারণে। একইভাবে, এই দুটি সালফার যৌগ অ্যান্টাগোনিস্টিক প্রভাব দেখিয়েছে এবং ইউডেস্মল এবং α-পিনেনের সাথে মিলিত হলে কোনো প্রভাব ফেলেনি। ইউডেসমল এবং আলফা-পিনিন প্রকৃতিতে চক্রাকার, যেখানে ডাইঅ্যালিল ডাইসালফাইড এবং ডাইঅ্যালিল ট্রাইসালফাইড প্রকৃতিতে অ্যালিফ্যাটিক। রাসায়নিক কাঠামোর উপর ভিত্তি করে, এই যৌগগুলির সংমিশ্রণ সামগ্রিক প্রাণঘাতী ক্রিয়াকলাপ বৃদ্ধি করবে কারণ তাদের লক্ষ্যস্থলগুলি সাধারণত ভিন্ন হয়³⁴,⁴⁷, কিন্তু পরীক্ষামূলকভাবে আমরা বৈপরীত্য খুঁজে পেয়েছি, যা কিছু অজানা জীবের দেহে মিথস্ক্রিয়ার ফলে এই যৌগগুলির ভূমিকার কারণে হতে পারে। একইভাবে, সিনিওল এবং α-পিনিনের সংমিশ্রণ বৈপরীত্যমূলক প্রতিক্রিয়া তৈরি করেছে, যদিও গবেষকরা পূর্বে জানিয়েছিলেন যে দুটি যৌগের ক্রিয়ার লক্ষ্যস্থল ভিন্ন⁴⁷,⁶⁰। যেহেতু উভয় যৌগই চক্রাকার মনোটারপিন, তাই কিছু সাধারণ লক্ষ্যস্থল থাকতে পারে যা বন্ধনের জন্য প্রতিযোগিতা করতে পারে এবং অধ্যয়নকৃত সংমিশ্রণ জোড়াগুলির সামগ্রিক বিষাক্ততাকে প্রভাবিত করতে পারে।
LC50 মান এবং পর্যবেক্ষণকৃত মৃত্যুহারের উপর ভিত্তি করে, দুটি সেরা সিনারজিস্টিক টারপিন সংমিশ্রণ নির্বাচন করা হয়েছিল, যথা কারভোন + লিমোনিন এবং ইউক্যালিপটল + ইউডেস্মল-এর জোড়া, সেইসাথে টারপিনের সাথে সিন্থেটিক অর্গানোফসফরাস ম্যালাথিয়ন। ম্যালাথিয়ন + ইউডেস্মল যৌগের সর্বোত্তম সিনারজিস্টিক সংমিশ্রণটি একটি পূর্ণাঙ্গ পতঙ্গের কীটনাশক বায়োঅ্যাসে-তে পরীক্ষা করা হয়েছিল। এই কার্যকর সংমিশ্রণগুলি তুলনামূলকভাবে বড় পরিসরে বিপুল সংখ্যক পতঙ্গের বিরুদ্ধে কাজ করতে পারে কিনা তা নিশ্চিত করার জন্য বড় পতঙ্গ কলোনিকে লক্ষ্যবস্তু করা হয়েছিল। এই সমস্ত সংমিশ্রণই পতঙ্গের বড় ঝাঁকের বিরুদ্ধে একটি সিনারজিস্টিক প্রভাব প্রদর্শন করে। এডিস ইজিপ্টি লার্ভার বৃহৎ জনগোষ্ঠীর বিরুদ্ধে পরীক্ষিত একটি সর্বোত্তম সিনারজিস্টিক লার্ভিসাইডাল সংমিশ্রণের ক্ষেত্রেও অনুরূপ ফলাফল পাওয়া গেছে। সুতরাং, বলা যেতে পারে যে উদ্ভিদের এসেনশিয়াল অয়েল (EO) যৌগের কার্যকর সিনারজিস্টিক লার্ভিসাইডাল এবং পূর্ণাঙ্গ পতঙ্গনাশক সংমিশ্রণটি বিদ্যমান সিন্থেটিক রাসায়নিকের বিরুদ্ধে একটি শক্তিশালী বিকল্প এবং এডিস ইজিপ্টি-র জনসংখ্যা নিয়ন্ত্রণে এটি আরও ব্যবহার করা যেতে পারে। একইভাবে, মশাদের দেওয়া থাইমেটফস বা ম্যালাথিয়নের মাত্রা কমানোর জন্য সিন্থেটিক লার্ভিসাইড বা অ্যাডাল্টিসাইডের সাথে টারপিনের কার্যকর সংমিশ্রণও ব্যবহার করা যেতে পারে। এই শক্তিশালী সিনারজিস্টিক সংমিশ্রণগুলো এডিস মশার মধ্যে ওষুধ প্রতিরোধের বিবর্তন সম্পর্কিত ভবিষ্যৎ গবেষণার জন্য সমাধান দিতে পারে।
ইন্ডিয়ান কাউন্সিল অফ মেডিকেল রিসার্চ-এর অধীনস্থ ডিব্রুগড়ের রিজিওনাল মেডিকেল রিসার্চ সেন্টার থেকে এডিস ইজিপ্টি মশার ডিম সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং গৌহাটি বিশ্ববিদ্যালয়ের প্রাণিবিদ্যা বিভাগে নিয়ন্ত্রিত তাপমাত্রা (২৮ ± ১ °সে.) এবং আর্দ্রতায় (৮৫ ± ৫%) নিম্নলিখিত শর্তে রাখা হয়েছিল: আরিভোলি প্রমুখের বর্ণনা অনুযায়ী। ডিম ফোটার পর, লার্ভাদের লার্ভার খাবার (৩:১ অনুপাতে কুকুরের বিস্কুটের গুঁড়ো এবং ইস্ট) এবং পূর্ণাঙ্গ মশাদের ১০% গ্লুকোজ দ্রবণ খাওয়ানো হয়েছিল। পূর্ণাঙ্গ মশা বের হওয়ার ৩য় দিন থেকে, স্ত্রী মশাদের অ্যালবিনো ইঁদুরের রক্ত ​​চুষতে দেওয়া হয়েছিল। একটি গ্লাসে ফিল্টার পেপার জলে ভিজিয়ে ডিম পাড়ার খাঁচায় রাখুন।
নির্বাচিত উদ্ভিদের নমুনাগুলো হলো ইউক্যালিপটাস পাতা (Myrtaceae), তুলসী (Lamiaceae), পুদিনা (Lamiaceae), মেলালিউকা (Myrtaceae) এবং অ্যালিয়াম কন্দ (Amaryllidaceae)। এগুলো গুয়াহাটি থেকে সংগ্রহ করা হয়েছে এবং গৌহাটি বিশ্ববিদ্যালয়ের উদ্ভিদবিদ্যা বিভাগ দ্বারা শনাক্ত করা হয়েছে। সংগৃহীত উদ্ভিদের নমুনাগুলো (৫০০ গ্রাম) একটি ক্লেভেঞ্জার যন্ত্র ব্যবহার করে ৬ ঘণ্টা ধরে হাইড্রোডিস্টিলেশন করা হয়েছিল। নিষ্কাশিত অপরিহার্য তেল (EO) পরিষ্কার কাচের শিশিতে সংগ্রহ করে পরবর্তী গবেষণার জন্য ৪° সেলসিয়াস তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয়েছিল।
বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থার ৬৭ নম্বর আদর্শ পদ্ধতির সামান্য পরিবর্তিত রূপ ব্যবহার করে লার্ভানাশক বিষাক্ততা নিয়ে গবেষণা করা হয়েছিল। ইমালসিফায়ার হিসেবে ডিএমএসও (DMSO) ব্যবহার করা হয়। প্রতিটি ইও (EO) ঘনত্ব প্রাথমিকভাবে ১০০ এবং ১০০০ পিপিএম-এ পরীক্ষা করা হয়েছিল, প্রতিটি রেপ্লিকেটে ২০টি লার্ভাকে উন্মুক্ত করে। ফলাফলের উপর ভিত্তি করে, একটি ঘনত্বের পরিসর প্রয়োগ করা হয়েছিল এবং চিকিৎসার ১ ঘন্টা থেকে ৬ ঘন্টা (১ ঘন্টার ব্যবধানে), এবং ২৪ ঘন্টা, ৪৮ ঘন্টা এবং ৭২ ঘন্টা পরে মৃত্যুহার রেকর্ড করা হয়েছিল। ২৪, ৪৮ এবং ৭২ ঘন্টা উন্মুক্ত থাকার পর সাবলেথাল ঘনত্ব (LC50) নির্ধারণ করা হয়েছিল। প্রতিটি ঘনত্ব একটি নেগেটিভ কন্ট্রোল (শুধুমাত্র জল) এবং একটি পজিটিভ কন্ট্রোল (ডিএমএসও-মিশ্রিত জল) সহ ট্রিপ্লিকেট পরীক্ষা করা হয়েছিল। যদি পিউপেশন ঘটে এবং কন্ট্রোল গ্রুপের ১০% এর বেশি লার্ভা মারা যায়, তবে পরীক্ষাটি পুনরাবৃত্তি করা হয়। যদি কন্ট্রোল গ্রুপে মৃত্যুহার ৫-১০% এর মধ্যে থাকে, তবে অ্যাবট সংশোধন সূত্র ৬৮ ব্যবহার করা হয়।
রামর এট আল. ৬৯ দ্বারা বর্ণিত পদ্ধতিটি অ্যাসিটোনকে দ্রাবক হিসেবে ব্যবহার করে এডিস ইজিপ্টি মশার বিরুদ্ধে একটি পূর্ণাঙ্গ বায়োঅ্যাসে করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। প্রতিটি ইও (EO) প্রাথমিকভাবে ১০০ এবং ১০০০ পিপিএম ঘনত্বে পূর্ণাঙ্গ এডিস ইজিপ্টি মশার বিরুদ্ধে পরীক্ষা করা হয়েছিল। প্রতিটি প্রস্তুতকৃত দ্রবণের ২ মিলি একটি হোয়াটম্যান নম্বর ফিল্টার পেপারে (আকার ১২ x ১৫ সেমি²) প্রয়োগ করুন এবং অ্যাসিটোনকে ১০ মিনিটের জন্য বাষ্পীভূত হতে দিন। শুধুমাত্র ২ মিলি অ্যাসিটোন দিয়ে শোধিত ফিল্টার পেপারকে কন্ট্রোল হিসেবে ব্যবহার করা হয়েছিল। অ্যাসিটোন বাষ্পীভূত হয়ে যাওয়ার পর, শোধিত ফিল্টার পেপার এবং কন্ট্রোল ফিল্টার পেপার একটি নলাকার টিউবে (১০ সেমি গভীর) রাখা হয়। প্রতিটি ঘনত্বের তিনটি প্রতিলিপিতে দশটি ৩ থেকে ৪ দিন বয়সী রক্তপান না করা মশা স্থানান্তর করা হয়েছিল। প্রাথমিক পরীক্ষার ফলাফলের উপর ভিত্তি করে, নির্বাচিত তেলগুলির বিভিন্ন ঘনত্ব পরীক্ষা করা হয়েছিল। মশা ছাড়ার ১ ঘন্টা, ২ ঘন্টা, ৩ ঘন্টা, ৪ ঘন্টা, ৫ ঘন্টা, ৬ ঘন্টা, ২৪ ঘন্টা, ৪৮ ঘন্টা এবং ৭২ ঘন্টা পরে মৃত্যুহার রেকর্ড করা হয়েছিল। ২৪ ঘন্টা, ৪৮ ঘন্টা এবং ৭২ ঘন্টার সংস্পর্শের সময়ের জন্য LC50 মান গণনা করুন। যদি কন্ট্রোল লটের মৃত্যুহার ২০% এর বেশি হয়, তবে সম্পূর্ণ পরীক্ষাটি পুনরায় করুন। একইভাবে, যদি কন্ট্রোল গ্রুপে মৃত্যুহার ৫% এর বেশি হয়, তবে অ্যাবটের সূত্র৬৮ ব্যবহার করে ট্রিটেড নমুনাগুলির ফলাফল সমন্বয় করুন।
নির্বাচিত এসেনশিয়াল অয়েলগুলোর উপাদান যৌগ বিশ্লেষণ করার জন্য গ্যাস ক্রোমাটোগ্রাফি (Agilent 7890A) এবং মাস স্পেকট্রোমেট্রি (Accu TOF GCv, Jeol) ব্যবহার করা হয়েছিল। GC-টি একটি FID ডিটেক্টর এবং একটি ক্যাপিলারি কলাম (HP5-MS) দ্বারা সজ্জিত ছিল। বাহক গ্যাস ছিল হিলিয়াম এবং প্রবাহের হার ছিল ১ মিলি/মিনিট। GC প্রোগ্রামটি Allium sativum-কে 10:80-1M-8-220-5M-8-270-9M এবং Ocimum Sainttum-কে 10:80-3M-8-200-3M-10-275-1M-5 – 280, পুদিনার জন্য 10:80-1M-8-200-5M-8-275-1M-5-280, ইউক্যালিপটাসের জন্য 20.60-1M-10-200-3M-30-280, এবং লালের জন্য For a thousand layers they are them 10: 60-1M-8-220-5M-8-270-3M হিসেবে সেট করে।
GC ক্রোমাটোগ্রাম এবং ভর বর্ণালিবীক্ষণ (mass spectrometry) ফলাফল থেকে গণনা করা ক্ষেত্রফল শতাংশের ভিত্তিতে প্রতিটি EO-এর প্রধান যৌগগুলি শনাক্ত করা হয়েছিল (NIST 70 স্ট্যান্ডার্ড ডেটাবেসের সাপেক্ষে)।
প্রতিটি ইও (EO)-এর দুটি প্রধান যৌগ জিসি-এমএস (GC-MS) ফলাফলের ভিত্তিতে নির্বাচন করা হয়েছিল এবং পরবর্তী বায়োঅ্যাসে-এর জন্য সিগমা-অলড্রিচ থেকে ৯৮-৯৯% বিশুদ্ধতায় ক্রয় করা হয়েছিল। উপরে বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে, এডিস ইজিপ্টি মশার লার্ভা ও পূর্ণাঙ্গ মশার বিরুদ্ধে যৌগগুলোর কার্যকারিতা পরীক্ষা করা হয়েছিল। একই পদ্ধতি অনুসরণ করে, নির্বাচিত ইও (EO) যৌগগুলোর সাথে তাদের কার্যকারিতা তুলনা করার জন্য সর্বাধিক ব্যবহৃত সিন্থেটিক লার্ভানাশক ট্যামেফোসেট (সিগমা অলড্রিচ) এবং পূর্ণাঙ্গ মশার ওষুধ ম্যালাথিয়ন (সিগমা অলড্রিচ) বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।
নির্বাচিত টারপিন যৌগসমূহ এবং টারপিন যৌগ ও বাণিজ্যিক অর্গানোফসফেট (টাইলেফস এবং ম্যালাথিয়ন)-এর বাইনারি মিশ্রণ প্রতিটি সম্ভাব্য যৌগের LC50 মাত্রা ১:১ অনুপাতে মিশিয়ে প্রস্তুত করা হয়েছিল। প্রস্তুতকৃত মিশ্রণগুলো উপরে বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে এডিস ইজিপ্টি মশার লার্ভা এবং পূর্ণাঙ্গ দশার উপর পরীক্ষা করা হয়েছিল। প্রতিটি বায়োঅ্যাসে প্রতিটি মিশ্রণের জন্য তিনবার এবং প্রতিটি মিশ্রণে উপস্থিত পৃথক যৌগগুলোর জন্য তিনবার করে করা হয়েছিল। ২৪ ঘণ্টা পর লক্ষ্যবস্তু পতঙ্গের মৃত্যু রেকর্ড করা হয়েছিল। নিম্নলিখিত সূত্র ব্যবহার করে একটি বাইনারি মিশ্রণের জন্য প্রত্যাশিত মৃত্যুহার গণনা করুন।
যেখানে E = একটি দ্বিমুখী সংমিশ্রণ, অর্থাৎ (A + B) সংযোগের প্রতিক্রিয়ায় এডিস ইজিপ্টি মশার প্রত্যাশিত মৃত্যুহার।
Pavla52 বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে গণনা করা χ2 মানের উপর ভিত্তি করে প্রতিটি বাইনারি মিশ্রণের প্রভাবকে সিনারজিস্টিক, অ্যান্টাগনিস্টিক বা প্রভাবহীন হিসেবে চিহ্নিত করা হয়েছিল। নিম্নলিখিত সূত্র ব্যবহার করে প্রতিটি সংমিশ্রণের জন্য χ2 মান গণনা করুন।
একটি সংমিশ্রণের প্রভাবকে সিনারজিস্টিক (synergistic) হিসাবে সংজ্ঞায়িত করা হয়েছিল যখন গণনাকৃত χ2 মানটি সংশ্লিষ্ট ডিগ্রি অফ ফ্রিডম (৯৫% কনফিডেন্স ইন্টারভাল)-এর জন্য সারণি মানের চেয়ে বেশি ছিল এবং যদি পর্যবেক্ষণকৃত মৃত্যুহার প্রত্যাশিত মৃত্যুহারকে অতিক্রম করতে দেখা যায়। একইভাবে, যদি কোনো সংমিশ্রণের জন্য গণনাকৃত χ2 মানটি কিছু ডিগ্রি অফ ফ্রিডম সহ সারণি মানকে অতিক্রম করে, কিন্তু পর্যবেক্ষণকৃত মৃত্যুহার প্রত্যাশিত মৃত্যুহারের চেয়ে কম হয়, তবে চিকিৎসাটিকে অ্যান্টাগনিস্টিক (antagonistic) হিসাবে বিবেচনা করা হয়। এবং যদি কোনো সংমিশ্রণে গণনাকৃত χ2 মানটি সংশ্লিষ্ট ডিগ্রি অফ ফ্রিডম-এ সারণি মানের চেয়ে কম হয়, তবে সংমিশ্রণটির কোনো প্রভাব নেই বলে বিবেচনা করা হয়।
বিপুল সংখ্যক পোকামাকড়ের উপর পরীক্ষার জন্য তিন থেকে চারটি সম্ভাব্য সিনারজিস্টিক সংমিশ্রণ (১০০টি লার্ভা এবং ৫০টি লার্ভানাশক ও পূর্ণাঙ্গ পোকামাকড়ের কার্যকারিতা) নির্বাচন করা হয়েছিল। পূর্ণাঙ্গ পোকামাকড়ের ক্ষেত্রে পূর্বের ন্যায় পরীক্ষা করা হয়। মিশ্রণগুলোর পাশাপাশি, নির্বাচিত মিশ্রণগুলোতে উপস্থিত পৃথক যৌগগুলোকেও সমান সংখ্যক এডিস ইজিপ্টি লার্ভা এবং পূর্ণাঙ্গ পোকামাকড়ের উপর পরীক্ষা করা হয়েছিল। সংমিশ্রণের অনুপাতটি হলো একটি সম্ভাব্য যৌগের LC50 ডোজের এক ভাগ এবং অন্য উপাদান যৌগের LC50 ডোজের এক ভাগ। পূর্ণাঙ্গ পোকামাকড়ের উপর কার্যকারিতা পরীক্ষার বায়োঅ্যাসে-তে, নির্বাচিত যৌগগুলোকে অ্যাসিটোন দ্রাবকে দ্রবীভূত করে একটি ১৩০০ ঘন সেন্টিমিটারের নলাকার প্লাস্টিকের পাত্রে মোড়ানো ফিল্টার পেপারের উপর প্রয়োগ করা হয়েছিল। অ্যাসিটোনটি ১০ মিনিটের জন্য বাষ্পীভূত করা হয় এবং পূর্ণাঙ্গ পোকামাকড়গুলোকে ছেড়ে দেওয়া হয়। একইভাবে, লার্ভানাশক বায়োঅ্যাসে-তে, সম্ভাব্য যৌগগুলোর LC50 ডোজ প্রথমে সমপরিমাণ DMSO-তে দ্রবীভূত করা হয় এবং তারপর ১৩০০ ঘন সেন্টিমিটারের প্লাস্টিকের পাত্রে রাখা ১ লিটার জলের সাথে মেশানো হয়, এবং লার্ভাগুলোকে ছেড়ে দেওয়া হয়।
LC50 মান গণনা করার জন্য SPSS (সংস্করণ 16) এবং Minitab সফটওয়্যার ব্যবহার করে ৭১টি নথিভুক্ত মৃত্যুহার তথ্যের সম্ভাব্যতা বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।