উদ্ভিজ্জ মাইক্রোটিউবুলকে প্রভাবিত করে এমন অভিনব উদ্ভিদ বৃদ্ধির প্রতিষেধক হিসাবে উর্সা মনোয়ামাইডের আবিষ্কার, বৈশিষ্ট্য এবং কার্যকরী উন্নতি।

Nature.com পরিদর্শন করার জন্য আপনাকে ধন্যবাদ.আপনি যে ব্রাউজারের সংস্করণ ব্যবহার করছেন সেটি সীমিত সিএসএস সমর্থন করে।সেরা ফলাফলের জন্য, আমরা আপনাকে আপনার ব্রাউজারের একটি নতুন সংস্করণ ব্যবহার করার পরামর্শ দিই (বা ইন্টারনেট এক্সপ্লোরারে সামঞ্জস্য মোড অক্ষম করুন)।ইতিমধ্যে, চলমান সমর্থন নিশ্চিত করতে, আমরা স্টাইলিং বা জাভাস্ক্রিপ্ট ছাড়াই সাইটটি দেখাচ্ছি।
প্রাকৃতিক পণ্যের আবিষ্কার এবং উপকারী ব্যবহার মানুষের জীবনকে উন্নত করতে সাহায্য করতে পারে।আগাছা নিয়ন্ত্রণে উদ্ভিদের বৃদ্ধি প্রতিরোধক রাসায়নিক ব্যাপকভাবে হার্বিসাইড হিসেবে ব্যবহৃত হয়।বিভিন্ন ধরনের ভেষজনাশক ব্যবহার করার প্রয়োজনের কারণে, কর্মের নতুন প্রক্রিয়া সহ যৌগগুলি সনাক্ত করার প্রয়োজন রয়েছে।এই গবেষণায়, আমরা Streptomyces werraensis MK493-CF1 থেকে একটি উপন্যাস N -alkoxypyrrole যৌগ, coumamonamide আবিষ্কার করেছি এবং সম্পূর্ণ সংশ্লেষণ প্রক্রিয়া প্রতিষ্ঠা করেছি।জৈবিক ক্রিয়াকলাপ পরীক্ষাগুলির মাধ্যমে, আমরা আবিষ্কার করেছি যে urs-monoamic অ্যাসিড হল urs-monoamide এর একটি কৃত্রিম মধ্যবর্তী এবং একটি সম্ভাব্যউদ্ভিদ বৃদ্ধির প্রতিবন্ধক.উপরন্তু, আমরা urbenyloxy ডেরিভেটিভ (UDA) সহ বিভিন্ন urbenonic অ্যাসিড ডেরিভেটিভস তৈরি করেছি, যার উচ্চ হার্বিসাইডাল কার্যকলাপ রয়েছে যা HeLa কোষের বৃদ্ধিকে নেতিবাচকভাবে প্রভাবিত করে না।আমরা আরও দেখতে পেয়েছি যে urmotonic অ্যাসিড ডেরিভেটিভগুলি উদ্ভিদের মাইক্রোটিউবুলগুলিকে ব্যাহত করে;উপরন্তু, KAND অ্যাক্টিন ফিলামেন্টকে প্রভাবিত করে এবং কোষের মৃত্যু ঘটায়;এই বহুমুখী প্রভাবগুলি পরিচিত মাইক্রোটিউবিউল ইনহিবিটরগুলির থেকে আলাদা এবং ইউরসনিক অ্যাসিডের জন্য একটি নতুন ক্রিয়াকলাপের পরামর্শ দেয়, যা নতুন হার্বিসাইডের বিকাশে একটি গুরুত্বপূর্ণ সুবিধার প্রতিনিধিত্ব করে।
উপকারী প্রাকৃতিক পণ্য এবং তাদের ডেরিভেটিভের আবিষ্কার এবং ব্যবহারিক প্রয়োগ মানব জীবনের মান উন্নত করার একটি উপায়।অণুজীব, উদ্ভিদ এবং কীটপতঙ্গ দ্বারা উত্পাদিত মাধ্যমিক বিপাক ওষুধ এবং কৃষিতে বড় অগ্রগতির দিকে পরিচালিত করেছে।প্রাকৃতিক পণ্য থেকে অনেক অ্যান্টিবায়োটিক এবং অ্যান্টি-লিউকেমিয়া ওষুধ তৈরি করা হয়েছে।এছাড়াও, বিভিন্ন ধরনেরকীটনাশক, ছত্রাকনাশক এবং হার্বিসাইডগুলি কৃষিতে ব্যবহারের জন্য এই প্রাকৃতিক পণ্যগুলি থেকে আহরণ করা হয়।বিশেষ করে, আগাছা নিয়ন্ত্রণ হার্বিসাইডগুলি আধুনিক কৃষিতে ফসলের ফলন বৃদ্ধির জন্য গুরুত্বপূর্ণ হাতিয়ার, এবং বিভিন্ন ধরনের যৌগ ইতিমধ্যেই বাণিজ্যিকভাবে ব্যবহার করা হয়।উদ্ভিদের বিভিন্ন সেলুলার প্রক্রিয়া, যেমন সালোকসংশ্লেষণ, অ্যামিনো অ্যাসিড বিপাক, কোষ প্রাচীর সংশ্লেষণ, মাইটোসিস নিয়ন্ত্রণ, ফাইটোহরমোন সংকেত বা প্রোটিন সংশ্লেষণকে হার্বিসাইডের সাধারণ লক্ষ্য হিসাবে বিবেচনা করা হয়।যে যৌগগুলি মাইক্রোটিউবিউল ফাংশনকে বাধা দেয় সেগুলি হল একটি সাধারণ শ্রেণীর হার্বিসাইড যা মাইটোটিক রেগুলেশন2কে প্রভাবিত করে উদ্ভিদের বৃদ্ধিকে প্রভাবিত করে।
মাইক্রোটিউবুলগুলি সাইটোস্কেলটনের উপাদান এবং ইউক্যারিওটিক কোষে ব্যাপকভাবে সংরক্ষিত।টিউবুলিন হেটেরোডাইমারে α-টিউবুলিন এবং β-টিউবুলিন গঠিত রৈখিক মাইক্রোটিউবুল প্রোটোফিলামেন্ট রয়েছে, 13টি প্রোটোফিলামেন্ট একটি নলাকার গঠন তৈরি করে।মাইক্রোটিউবুলগুলি উদ্ভিদ কোষে একাধিক ভূমিকা পালন করে, যার মধ্যে কোষের আকার, কোষ বিভাজন এবং অন্তঃকোষীয় পরিবহন 3,4 নির্ধারণ করা হয়।উদ্ভিদ কোষে ইন্টারফেজ প্লাজমা মেমব্রেনের নিচে মাইক্রোটিউবিউল থাকে এবং এই তথাকথিত কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুলগুলি সেলুলোজ সিন্থেস কমপ্লেক্সের নিয়ন্ত্রণের মাধ্যমে সেলুলোজ মাইক্রোফাইব্রিলগুলির সংগঠনকে নিয়ন্ত্রণ করে বলে মনে করা হয়।মূল এপিডার্মাল কোষের কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুলস, মূলের অগ্রভাগের দ্রুত প্রসারণের অঞ্চলে উপস্থিত, পার্শ্বীয়ভাবে অবস্থিত, এবং সেলুলোজ মাইক্রোফাইবারগুলি এই মাইক্রোটিউবুলগুলিকে অনুসরণ করে এবং কোষের প্রসারণের দিক সীমিত করে, যার ফলে অ্যানিসোট্রপিক কোষের প্রসারণকে উন্নীত করে।অতএব, মাইক্রোটিউবুল ফাংশন উদ্ভিদের অঙ্গসংস্থানবিদ্যার সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত।জিনের এনকোডিং টিউবুলিনে অ্যামিনো অ্যাসিড প্রতিস্থাপনের কারণে কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুল অ্যারে এবং অ্যারাবিডোপসিস 6,7-এ বাম-বা ডান-পার্শ্বের বৃদ্ধি ঘটে।একইভাবে, মাইক্রোটিউবুল-সম্পর্কিত প্রোটিনগুলির মিউটেশন যা মাইক্রোটিউবুলের গতিবিদ্যাকে নিয়ন্ত্রণ করে তাও বিকৃত মূল বৃদ্ধির দিকে নিয়ে যেতে পারে8,9,10,11,12,13।উপরন্তু, ডিসোপাইরামাইডের মতো মাইক্রোটিউবিউল-বিঘ্নিত হারবিসাইডের সাথে চিকিত্সা, যা প্রিটিলাক্লোর নামেও পরিচিত, এছাড়াও বাম দিকের তির্যক মূলের বৃদ্ধি ঘটায়।এই তথ্যগুলি নির্দেশ করে যে মাইক্রোটিউবুল ফাংশনের সুনির্দিষ্ট নিয়ন্ত্রণ উদ্ভিদের বৃদ্ধির দিক নির্ধারণের জন্য গুরুত্বপূর্ণ।
বিভিন্ন ধরনের মাইক্রোটিউবিউল ইনহিবিটর আবিষ্কৃত হয়েছে, এবং এই ওষুধগুলি সাইটোস্কেলেটাল গবেষণার পাশাপাশি কৃষি ও ওষুধে উল্লেখযোগ্য অবদান রেখেছে।বিশেষ করে, ওরিজালিন, ডাইনিট্রোঅ্যানিলাইন যৌগ, ডিসোপাইরামাইড, বেনজামাইড-সম্পর্কিত যৌগ এবং তাদের অ্যানালগগুলি মাইক্রোটিউবুলের কার্যকারিতাকে বাধা দিতে পারে এবং এর ফলে উদ্ভিদের বৃদ্ধিকে বাধা দেয়।অতএব, তারা ব্যাপকভাবে হার্বিসাইড হিসাবে ব্যবহৃত হয়।যাইহোক, যেহেতু মাইক্রোটিউবুলগুলি উদ্ভিদ এবং প্রাণী কোষের একটি গুরুত্বপূর্ণ উপাদান, তাই বেশিরভাগ মাইক্রোটিউবুল ইনহিবিটর উভয় কোষের জন্য সাইটোটক্সিক।অতএব, হার্বিসাইড হিসাবে তাদের স্বীকৃত উপযোগিতা সত্ত্বেও, ব্যবহারিক উদ্দেশ্যে সীমিত সংখ্যক অ্যান্টিমাইক্রোটুবুল এজেন্ট ব্যবহার করা হয়।
স্ট্রেপ্টোমাইসিস হল স্ট্রেপ্টোমাইসিস পরিবারের একটি প্রজাতি, যার মধ্যে বায়বীয়, গ্রাম-পজিটিভ, ফিলামেন্টাস ব্যাকটেরিয়া রয়েছে এবং বিস্তৃত মাধ্যমিক বিপাক তৈরি করার ক্ষমতার জন্য ব্যাপকভাবে পরিচিত।অতএব, এটি নতুন জৈবিকভাবে সক্রিয় প্রাকৃতিক পণ্যগুলির অন্যতম গুরুত্বপূর্ণ উত্স হিসাবে বিবেচিত হয়।বর্তমান গবেষণায়, আমরা coumamonamide নামে একটি নতুন যৌগ আবিষ্কার করেছি, যা Streptomyces werraensis MK493-CF1 এবং S. werraensis ISP 5486 থেকে বিচ্ছিন্ন ছিল। বর্ণালী বিশ্লেষণ এবং সম্পূর্ণ বর্ণালী বিশ্লেষণ ব্যবহার করে, coumamonamide এর গঠন বৈশিষ্ট্যযুক্ত ছিল এবং এর অনন্য এন-অ্যালাইসিস ওয়েরেনসিস। নির্ধারিত ছিল।সংশ্লেষণUrsmonic acid, ursmonoamide এবং এর ডেরিভেটিভগুলির একটি কৃত্রিম মধ্যবর্তী, জনপ্রিয় মডেল উদ্ভিদ Arabidopsis thaliana এর বৃদ্ধি এবং অঙ্কুরোদগমকে বাধা দেয়।একটি গঠন-ক্রিয়াকলাপ সম্পর্ক গবেষণায়, আমরা দেখতে পেয়েছি যে C9 এর সাথে একটি যৌগ যাকে ursonic অ্যাসিডে পরিবর্তিত করা হয়েছে, যাকে বলা হয় nonyloxy derivative of ursonic acid (KAND), উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি এবং অঙ্কুরোদগমের উপর প্রতিরোধমূলক প্রভাবকে বাড়িয়ে তোলে।উল্লেখযোগ্যভাবে, নতুন আবিষ্কৃত উদ্ভিদ বৃদ্ধির প্রতিরোধক তামাক এবং লিভারওয়ার্টের বৃদ্ধিকেও প্রভাবিত করে এবং এটি ব্যাকটেরিয়া বা হেলা কোষের জন্য সাইটোটক্সিক ছিল না।তদুপরি, কিছু urmotonic অ্যাসিড ডেরিভেটিভগুলি একটি বিকৃত রুট ফেনোটাইপকে প্ররোচিত করে, যা বোঝায় যে এই ডেরিভেটিভগুলি প্রত্যক্ষ বা পরোক্ষভাবে মাইক্রোটিউবিউলগুলিকে প্রভাবিত করে।এই ধারণার সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যালভাবে বা ফ্লুরোসেন্ট প্রোটিন সহ লেবেলযুক্ত মাইক্রোটিউবুলগুলির আমাদের পর্যবেক্ষণগুলি ইঙ্গিত দেয় যে KAND চিকিত্সা মাইক্রোটিউবুলগুলিকে ডিপোলিমারাইজ করে।উপরন্তু, কুমামোটোনিক অ্যাসিড ডেরিভেটিভস দিয়ে চিকিত্সা অ্যাক্টিন মাইক্রোফিলামেন্টগুলিকে ব্যাহত করে।এইভাবে, আমরা একটি নতুন উদ্ভিদ বৃদ্ধি প্রতিরোধক আবিষ্কার করেছি যার কর্মের অনন্য প্রক্রিয়া সাইটোস্কেলটনের ধ্বংস জড়িত।
স্ট্রেন MK493-CF1 শিনাগাওয়া-কু, টোকিওতে মাটি থেকে বিচ্ছিন্ন ছিল।স্ট্রেন MK493-CF1 ভাল-শাখাযুক্ত স্ট্রোমাল মাইসেলিয়াম গঠন করে।16S রাইবোসোমাল আরএনএ জিনের আংশিক ক্রম (1422 bp) নির্ধারিত হয়েছিল।এই স্ট্রেনটি S. werraensis (NBRC 13404T = ISP 5486, 1421/1422 bp, T: টিপিক্যাল স্ট্রেন, 99.93%) এর মতো।এই ফলাফলের উপর ভিত্তি করে, এটি নির্ধারণ করা হয়েছিল যে এই স্ট্রেনটি S. werraensis-এর ধরণের স্ট্রেনের সাথে ঘনিষ্ঠভাবে সম্পর্কিত ছিল।তাই, আমরা অস্থায়ীভাবে এই স্ট্রেনটির নাম দিয়েছি S. werraensis MK493-CF1।S. werraensis ISP 5486T একই বায়োঅ্যাকটিভ যৌগ তৈরি করে।যেহেতু এই অণুজীব থেকে প্রাকৃতিক পণ্য প্রাপ্তির প্রাথমিক গবেষণা ছিল না, তাই আরও রাসায়নিক গবেষণা করা হয়েছিল।S. werraensis MK493-CF1 বার্লি মিডিয়ামে 30°C তাপমাত্রায় 14 দিনের জন্য সলিড-স্টেট ফার্মেন্টেশনের মাধ্যমে চাষ করার পর, 50% EtOH দিয়ে মাধ্যমটি বের করা হয়েছিল।59.5 মিলিগ্রাম অশোধিত নির্যাস পাওয়ার জন্য 60 মিলি নমুনা শুকানো হয়েছিল।অপরিশোধিত নির্যাস N-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxamide (1, coumamonamide নামে, 36.0 mg) দিতে বিপরীত ফেজ HPLC-এর অধীন ছিল।1 এর মোট পরিমাণ অশোধিত নির্যাসের প্রায় 60%।অতএব, আমরা কুমামোটোমাইড 1 এর বৈশিষ্ট্যগুলি বিস্তারিতভাবে অধ্যয়ন করার সিদ্ধান্ত নিয়েছি।
Coumamonamide 1 একটি সাদা নিরাকার পাউডার এবং উচ্চ রেজোলিউশন ভর স্পেকট্রোমেট্রি (HRESIMS) C6H8N2O2 (চিত্র 1) নিশ্চিত করে।এই যৌগের C2-প্রতিস্থাপিত পাইরোল খণ্ডটি δH 6.94 (1H, t, J = 2.8, 4.8 Hz, H-4), δH 6.78 (1H, d, J = 2.5, δH 1H NMR স্পেকট্রামে: 4.5 Hz দ্বারা চিহ্নিত করা হয়েছে) , H-5) এবং δH 6.78 (1H, d, J = 2.5 Hz, H-6), এবং 13C NMR বর্ণালী চারটি sp2 কার্বন পরমাণুর উপস্থিতি দেখায়।C2 অবস্থানে একটি অ্যামাইড গ্রুপের উপস্থিতি δC 161.1 এ C-3 প্রোটন থেকে অ্যামাইড কার্বনিল কার্বনের সাথে HMBC পারস্পরিক সম্পর্ক দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল।উপরন্তু, δH 4.10 (3H, S) এবং δC 68.3-এ 1 H এবং 13 C NMR পিক অণুতে N-methoxy গ্রুপের উপস্থিতি নির্দেশ করে।যদিও বর্ধিত পার্থক্য স্পেকট্রোস্কোপি এবং নিউক্লিয়ার ওভারহাউসারের সংক্ষিপ্তকরণ (NOEDF) এর মতো বর্ণালী বিশ্লেষণ ব্যবহার করে মেথক্সি গ্রুপের সঠিক অবস্থান এখনও নির্ধারণ করা হয়নি, N-methoxy-1H-pyrrole-2-carboxamide প্রথম প্রার্থী যৌগ হয়ে ওঠে।
1 এর সঠিক গঠন নির্ধারণ করতে, একটি মোট সংশ্লেষণ করা হয়েছিল (চিত্র 2a)।এম-সিপিবিএ-র সাথে বাণিজ্যিকভাবে উপলব্ধ 2-অ্যামিনোপাইরিডিন 2-এর চিকিত্সার ফলে পরিমাণগত ফলনে অনুরূপ এন-অক্সাইড 3 পাওয়া যায়।2-এর 2-অ্যামিনোজিডেশনের পর, আব্রামোভিচ বর্ণিত সাইক্লোকনডেনসেশন বিক্রিয়াটি 90 ডিগ্রি সেলসিয়াসে বেনজিনে বাহিত হয়েছিল কাঙ্খিত 1-হাইড্রক্সি-1এইচ-পাইরোল-2-কার্বনিট্রিল 5 গ্রামে।গতি 60% (দুই ধাপ)।15,16।4 এর মিথিলেশন এবং হাইড্রোলাইসিস তারপরে 1-মেথক্সি-1এইচ-পাইরোল-2-কারবক্সিলিক অ্যাসিড (যাকে "কিউমোটোনিক অ্যাসিড" বলা হয়, 6) ভাল ফলন দেয় (70%, দুটি ধাপ)।অবশেষে, জলীয় অ্যামোনিয়া ব্যবহার করে অ্যাসিড ক্লোরাইড মধ্যবর্তী 6 এর মাধ্যমে অ্যামিডেশন কুমামোটো অ্যামাইড 1-এর মধ্যে 98% ফলন দেয়।সংশ্লেষিত 1 এর সমস্ত বর্ণালী ডেটা বিচ্ছিন্ন 1 এর মতো ছিল, তাই 1 এর গঠন নির্ধারণ করা হয়েছিল;
urbenamide এবং urbenic অ্যাসিডের জৈবিক কার্যকলাপের সাধারণ সংশ্লেষণ এবং বিশ্লেষণ।(a) কুমামোটো অ্যামাইডের মোট সংশ্লেষণ।(খ) সাত দিন বয়সী বন্য-প্রকার অ্যারাবিডোপসিস কলম্বিয়া (কল) চারা মুরাশিগে এবং স্কুগ (এমএস) প্লেটে কিউমামোনামাইড 6 বা কিউমামোনামাইড 1 নির্দেশিত ঘনত্বে জন্মানো হয়েছিল।স্কেল বার = 1 সেমি।
প্রথমত, আমরা উদ্ভিদের বৃদ্ধি মডিউল করার ক্ষমতার জন্য urbenamide এবং এর মধ্যবর্তীদের জৈবিক ক্রিয়াকলাপগুলি মূল্যায়ন করেছি।আমরা এমএস আগর মিডিয়ামে উরসমোনামাইড 1 বা উরসমোনিক অ্যাসিড 6 এর বিভিন্ন ঘনত্ব যুক্ত করেছি এবং এই মাধ্যমের উপর কালচারড অ্যারাবিডোপসিস থালিয়ানা চারা।এই পরীক্ষাগুলি দেখিয়েছে যে 6টির উচ্চ ঘনত্ব (500 μM) রুট বৃদ্ধিতে বাধা দেয় (চিত্র 2b)।এর পরে, আমরা 6-এর N1 অবস্থান প্রতিস্থাপন করে বিভিন্ন ডেরিভেটিভ তৈরি করেছি এবং তাদের উপর গঠন-ক্রিয়াকলাপ সম্পর্ক অধ্যয়ন করেছি (অ্যানালগ সংশ্লেষণ প্রক্রিয়াটি সহায়ক তথ্য (এসআই) এ বর্ণিত হয়েছে)।Arabidopsis চারা 50 μM ursonic অ্যাসিড ডেরাইভেটিভস ধারণকারী একটি মাধ্যমে জন্মানো হয়েছিল, এবং মূল দৈর্ঘ্য পরিমাপ করা হয়েছিল।যেমনটি ছবিতে দেখানো হয়েছে।চিত্র 3a, b, এবং S1 তে দেখানো হয়েছে, কিউমামো অ্যাসিডের N1 অবস্থানে বিভিন্ন দৈর্ঘ্যের রৈখিক অ্যালকক্সি চেইন (9, 10, 11, 12, এবং 13) বা বড় অ্যালকক্সি চেইন (15, 16, এবং 17) রয়েছে।ডেরিভেটিভগুলি মূল বৃদ্ধিতে উল্লেখযোগ্য বাধা দেখিয়েছে।উপরন্তু, আমরা 200 μM 10, 11, বা 17 অঙ্কুরোদগম বাধা (ডুমুর। 3c এবং S2) এর প্রয়োগ পেয়েছি।
কুমামোটো অ্যামাইড এবং সম্পর্কিত যৌগগুলির গঠন-ক্রিয়াকলাপ সম্পর্কের অধ্যয়ন।(a) analogues এর গঠন এবং সংশ্লেষণ স্কিম।(b) 50 μM কিউমামোনামাইড ডেরিভেটিভস সহ বা ছাড়াই এমএস মিডিয়ামে জন্মানো 7-দিন-বয়সী চারাগুলির মূল দৈর্ঘ্যের পরিমাপ।নক্ষত্রগুলি শ্যাম চিকিত্সার সাথে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে (টি পরীক্ষা, পি<0.05)।n>18. ডেটা গড় ± SD হিসাবে দেখানো হয়।nt মানে "পরীক্ষিত নয়" কারণ 50% এর বেশি বীজ অঙ্কুরিত হয়নি।(c) 200 μM কিউমামোনামাইড এবং সংশ্লিষ্ট যৌগগুলি সহ বা ছাড়া MS মাধ্যমে 7 দিনের জন্য সিদ্ধ করা বীজের অঙ্কুরোদগমের হারের পরিমাণ নির্ধারণ।নক্ষত্রগুলি শ্যাম চিকিত্সার সাথে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে (চি-স্কোয়ার পরীক্ষা)।n=96।
মজার বিষয় হল, C9 এর চেয়ে দীর্ঘ অ্যালকাইল সাইড চেইন সংযোজন প্রতিরোধমূলক কার্যকলাপকে হ্রাস করে, পরামর্শ দেয় যে কুমামোটোয়িক অ্যাসিড-সম্পর্কিত যৌগগুলির জৈবিক কার্যকলাপ প্রদর্শনের জন্য একটি নির্দিষ্ট আকারের সাইড চেইন প্রয়োজন।
যেহেতু গঠন-ক্রিয়াকলাপ সম্পর্ক বিশ্লেষণে দেখা গেছে যে C9 কে ursonic অ্যাসিডে পরিবর্তন করা হয়েছে এবং ursonic acid এর nonyloxy ডেরিভেটিভ (এরপরে KAND 11 হিসাবে উল্লেখ করা হয়েছে) হল সবচেয়ে কার্যকরী উদ্ভিদ বৃদ্ধি প্রতিরোধক, আমরা KAND 11-এর আরও বিস্তারিত বৈশিষ্ট্য পরিচালনা করেছি। আরবিডোপসিসের চিকিত্সা 50 μM KAND 11 প্রায় সম্পূর্ণরূপে অঙ্কুরোদগম প্রতিরোধ করে, যেখানে KAND 11-এর নিম্ন ঘনত্ব (40, 30, 20, বা 10 μM) ডোজ-নির্ভর পদ্ধতিতে মূলের বৃদ্ধিকে বাধা দেয় (চিত্র 4a, b)।KAND 11 রুট মেরিস্টেমের কার্যক্ষমতাকে প্রভাবিত করে কিনা তা পরীক্ষা করার জন্য, আমরা প্রোপিডিয়াম আয়োডাইড (PI) দিয়ে দাগযুক্ত রুট মেরিস্টেমগুলি পরীক্ষা করেছি এবং মেরিস্টেম এলাকার আকার পরিমাপ করেছি।25 μM KAND-11 ধারণকারী একটি মাঝারিতে জন্মানো চারাগুলির মেরিস্টেমের আকার ছিল 151.1 ± 32.5 μm, যেখানে DMSO ধারণকারী একটি নিয়ন্ত্রণ মাধ্যমের উপর জন্মানো চারাগুলির মেরিস্টেমের আকার ছিল 264.7 ± 30.8 μc (Figdm) , যা নির্দেশ করে যে KAND-11 সেলুলার কার্যকলাপ পুনরুদ্ধার করে।পাতন।রুট মেরিস্টেম।এর সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, KAND 11 চিকিত্সা রুট মেরিস্টেম (চিত্র 4e) 17-এ কোষ বিভাজন চিহ্নিতকারী CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS সংকেতের পরিমাণ হ্রাস করেছে।এই ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে KAND 11 কোষের বিস্তারের কার্যকলাপ হ্রাস করে মূলের বৃদ্ধিকে বাধা দেয়।
বৃদ্ধির উপর urbenonic অ্যাসিড ডেরিভেটিভস (urbenyloxy ডেরিভেটিভস) এর প্রতিরোধমূলক প্রভাবের বিশ্লেষণ।(a) 7 দিন বয়সী বন্য ধরনের কোল চারা MS প্লেটে জন্মানো KAND 11 এর নির্দেশিত ঘনত্বের সাথে। স্কেল বার = 1 সেমি।(b) মূলের দৈর্ঘ্যের পরিমাপ।চিঠিগুলি উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে (টুকি এইচএসডি পরীক্ষা, পি<0.05)।n>16. ডেটা গড় ± SD হিসাবে দেখানো হয়।(c) 25 μM KAND 11 সহ বা ছাড়া MS প্লেটে জন্মানো প্রোপিডিয়াম আয়োডাইড-দাগযুক্ত বন্য-টাইপ কোল শিকড়ের কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি। সাদা বন্ধনী মূল মেরিস্টেম নির্দেশ করে।স্কেল বার = 100 µm।(d) মূল মেরিস্টেম আকারের পরিমাপ (n = 10 থেকে 11)।টি-টেস্ট ব্যবহার করে পরিসংখ্যানগত পার্থক্য নির্ধারণ করা হয়েছিল (পি<0.05)।বারগুলি গড় মেরিস্টেম আকারের প্রতিনিধিত্ব করে।(e) ডিফারেনশিয়াল ইন্টারফারেন্স কন্ট্রাস্ট (DIC) একটি রুট মেরিস্টেমের মাইক্রোস্কোপি যাতে CDKB2 কনস্ট্রাক্ট থাকে;1pro: CDKB2;25 µM KAND অ্যাস সহ বা ছাড়া এমএস প্লেটে জন্মানো 5 দিন বয়সী চারাগুলিতে 1-GUS দাগযুক্ত এবং দাগযুক্ত।
KAND 11-এর ফাইটোটক্সিসিটি আরও একটি ডাইকোটাইলেডোনাস উদ্ভিদ, তামাক (নিকোটিয়ানা ট্যাবাকাম), এবং একটি প্রধান ভূমি উদ্ভিদ মডেল জীব, লিভারওয়ার্ট (মার্চান্টিয়া পলিমর্ফা) ব্যবহার করে পরীক্ষা করা হয়েছিল।অ্যারাবিডোপসিসের ক্ষেত্রে, তামাক SR-1 চারা 25 μM KAND 11 যুক্ত মাঝারি আকারে জন্মায়, ছোট শিকড় তৈরি করে (চিত্র 5a)।অতিরিক্তভাবে, 48টি বীজের মধ্যে 40টি 200 μM KAND 11 সমন্বিত প্লেটে অঙ্কুরিত হয়েছে, যেখানে সমস্ত 48টি বীজ মক-ট্রিটেড মিডিয়াতে অঙ্কুরিত হয়েছে, যা নির্দেশ করে যে KAND-এর উচ্চ ঘনত্ব উল্লেখযোগ্য ছিল (p<0.05;chi test -square) তামাকের অঙ্কুরোদগমকে বাধা দেয়।(চিত্র 5 খ)।এছাড়াও, KAND 11 এর ঘনত্ব যা লিভারওয়ার্টে ব্যাকটেরিয়া বৃদ্ধিতে বাধা দেয় তা অ্যারাবিডোপসিসের কার্যকর ঘনত্বের অনুরূপ ছিল (চিত্র 5c)।এই ফলাফলগুলি নির্দেশ করে যে KAND 11 বিভিন্ন ধরণের গাছের বৃদ্ধিকে বাধা দিতে পারে।তারপরে আমরা উচ্চতর প্রাণী এবং ব্যাকটেরিয়া কোষের প্রতিনিধি হিসাবে যথাক্রমে মানব হেলা কোষ এবং এসচেরিচিয়া কোলি স্ট্রেন DH5α অন্যান্য জীবের ভালুক মনোমাইড-সম্পর্কিত যৌগের সম্ভাব্য সাইটোটক্সিসিটি তদন্ত করেছি।কোষের বিস্তারের পরীক্ষাগুলির একটি সিরিজে, আমরা লক্ষ্য করেছি যে কিউমামোনামাইড 1, কিউমামোনামিডিক অ্যাসিড 6, এবং কেএএনডি 11 100 μM (চিত্র 5d,e) ঘনত্বে HeLa বা E. কোলি কোষের বৃদ্ধিকে প্রভাবিত করেনি।
নন-অ্যারাবিডোপসিস জীবের মধ্যে KAND 11-এর বৃদ্ধি বাধা।(a) দুই-সপ্তাহ-বয়সী বন্য-টাইপ SR-1 তামাকের চারাগুলি উল্লম্বভাবে অবস্থান করা এমএস প্লেটে জন্মানো হয়েছিল যাতে 25 μM KAND 11 রয়েছে। (b) দুই-সপ্তাহ-বয়সী বন্য-টাইপ SR-1 তামাকের চারাগুলি অনুভূমিক অবস্থানে জন্মায় 200 μM KAND 11 সমন্বিত MS প্লেট। (c) দুই সপ্তাহের পুরনো বন্য-টাইপ Tak-1 লিভারওয়ার্ট কুঁড়ি যা গামবোর্গ বি 5 প্লেটে কান্ড 11-এর নির্দেশিত ঘনত্বের সাথে জন্মায়। লাল তীরগুলি স্পোরগুলিকে নির্দেশ করে যা দুই সপ্তাহের ইনকিউবেশনের মধ্যে বৃদ্ধি বন্ধ করে দেয় সময়কাল(d) HeLa কোষের কোষ প্রসারণ অ্যাস।একটি কোষ গণনা কিট 8 (ডোজিন্ডো) ব্যবহার করে নির্দিষ্ট সময়ের ব্যবধানে কার্যকর কোষের সংখ্যা পরিমাপ করা হয়েছিল।নিয়ন্ত্রণ হিসাবে, হেলা কোষগুলিকে 5 μg/ml অ্যাক্টিনোমাইসিন ডি (অ্যাক্ট ডি) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল, যা RNA পলিমারেজ ট্রান্সক্রিপশনকে বাধা দেয় এবং কোষের মৃত্যুর কারণ হয়।বিশ্লেষণ তিন প্রতিলিপি সঞ্চালিত হয়.(e) ই. কোলাই কোষের বিস্তার পরীক্ষা।ই. কোলি বৃদ্ধি OD600 পরিমাপ করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।নিয়ন্ত্রণ হিসাবে, কোষগুলিকে 50 μg/ml অ্যাম্পিসিলিন (Amp) দিয়ে চিকিত্সা করা হয়েছিল, যা ব্যাকটেরিয়া কোষ প্রাচীর সংশ্লেষণকে বাধা দেয়।বিশ্লেষণ তিন প্রতিলিপি সঞ্চালিত হয়.
ইউরামাইড-সম্পর্কিত যৌগগুলির দ্বারা সৃষ্ট সাইটোটক্সিসিটির ক্রিয়াকলাপের প্রক্রিয়াটি বোঝার জন্য, আমরা মাঝারি প্রতিরোধক প্রভাব সহ আরবেনিক অ্যাসিড ডেরিভেটিভগুলিকে পুনরায় বিশ্লেষণ করেছি।যেমনটি ছবিতে দেখানো হয়েছে।চিত্র 2b, 6a তে দেখানো হয়েছে, urmotonic অ্যাসিড 6 এর উচ্চ ঘনত্ব (200 μM) ধারণকারী আগর প্লেটে জন্মানো চারাগুলি খাটো এবং বাম-বাঁকা শিকড় (θ = – 23.7 ± 6.1) উৎপন্ন করে, যেখানে নিয়ন্ত্রণ মাধ্যমের উপর জন্মানো চারাগুলি চারা প্রায় সরল শিকড় উৎপন্ন করে (θ = – 3.8 ± 7.1)।এই চরিত্রগত তির্যক বৃদ্ধি কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুলস 14,18 এর কর্মহীনতার ফলে পরিচিত।এই অনুসন্ধানের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, মাইক্রোটিউবুল-অস্থিরকারী ওষুধ ডিসোপাইরামাইড এবং ওরিজালিন আমাদের বৃদ্ধির অবস্থার অধীনে অনুরূপ শিকড় কাত করে দেয় (ডুমুর। 2b, 6a)।একই সময়ে, আমরা urmotonic অ্যাসিড ডেরিভেটিভস পরীক্ষা করেছি এবং তাদের মধ্যে বেশ কয়েকটি নির্বাচন করেছি যা নির্দিষ্ট ঘনত্বে, তির্যক মূলের বৃদ্ধিকে প্ররোচিত করে।যৌগ 8, 9, এবং 15 যথাক্রমে 75 μM, 50 μM, এবং 40 μM এ মূল বৃদ্ধির দিক পরিবর্তন করেছে, যা নির্দেশ করে যে এই যৌগগুলি কার্যকরভাবে মাইক্রোটিউবুলগুলিকে অস্থিতিশীল করতে পারে (চিত্র 2b, 6a)।আমরা কম ঘনত্বে (15 µM) সবচেয়ে শক্তিশালী ursolic অ্যাসিড ডেরিভেটিভ, KAND 11 পরীক্ষা করেছি এবং দেখতে পেয়েছি যে KAND 11 প্রয়োগ মূলের বৃদ্ধিকে বাধা দেয় এবং মূলের বৃদ্ধির দিকটি অসম ছিল, যদিও তারা বাম দিকে ঢালু ছিল ( চিত্র C3)।.কারণ মাইক্রোটিউবুল-অস্থিতিশীল ওষুধের উচ্চ ঘনত্ব কখনও কখনও শিকড় কাত হওয়ার পরিবর্তে উদ্ভিদের বৃদ্ধিকে বাধা দেয়, আমরা পরবর্তীতে মূল এপিডার্মাল কোষে কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুলগুলি পর্যবেক্ষণ করে KAND 11 মাইক্রোটিউবুলগুলিকে প্রভাবিত করে এমন সম্ভাবনা মূল্যায়ন করেছি।25 μM KAND 11 দিয়ে চিকিত্সা করা চারা শিকড়ের এপিডার্মাল কোষে অ্যান্টি-β-টিউবুলিন অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে ইমিউনোহিস্টোকেমিস্ট্রি প্রসারিত অঞ্চলে (চিত্র 6বি) এপিডার্মাল কোষে প্রায় সমস্ত কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুলের অন্তর্ধান দেখিয়েছে।এই ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে কুমামোটোনিক অ্যাসিড এবং এর ডেরিভেটিভগুলি মাইক্রোটিউবুলের উপর প্রত্যক্ষ বা পরোক্ষভাবে কাজ করে তাদের ব্যাহত করতে এবং এই যৌগগুলি নতুন মাইক্রোটিউবুল ইনহিবিটর।
উরসোনিক অ্যাসিড এবং এর ডেরিভেটিভগুলি অ্যারাবিডোপসিস থালিয়ানায় কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুলকে পরিবর্তন করে।(a) নির্দেশিত ঘনত্বে বিভিন্ন urmotonic অ্যাসিড ডেরিভেটিভের উপস্থিতিতে মূল প্রবণতা কোণ পরিমাপ করা হয়।মাইক্রোটিউবুলসকে বাধা দেওয়ার জন্য পরিচিত দুটি যৌগের প্রভাব: ডিসোপাইরামাইড এবং ওরিজালিনও বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।ইনসেটটি মূল বৃদ্ধির কোণ পরিমাপের জন্য ব্যবহৃত মান দেখায়।নক্ষত্রগুলি শ্যাম চিকিত্সার সাথে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে (টি পরীক্ষা, পি<0.05)।n>19. স্কেল বার = 1 সেমি।(b) প্রসারিত অঞ্চলে এপিডার্মাল কোষে কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুলস।25 μM KAND 11 সহ বা ছাড়া MS প্লেটে জন্মানো বন্য-প্রকার অ্যারাবিডোপসিস কোল শিকড়ের মাইক্রোটিউবুলগুলি β-টিউবুলিন প্রাথমিক অ্যান্টিবডি এবং অ্যালেক্সা ফ্লুর-সংযুক্ত সেকেন্ডারি অ্যান্টিবডি ব্যবহার করে ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল স্টেনিং দ্বারা কল্পনা করা হয়েছিল।স্কেল বার = 10 µm।(c) মূল মেরিস্টেমে মাইক্রোটিউবুলের মাইটোটিক গঠন।মাইক্রোটিউবুলগুলি ইমিউনোহিস্টোকেমিক্যাল স্টেনিং ব্যবহার করে কল্পনা করা হয়েছিল।প্রফেস জোন, স্পিন্ডেল এবং ফ্রাগমোপ্লাস্ট সহ মাইটোটিক কাঠামোগুলি কনফোকাল চিত্রগুলি থেকে গণনা করা হয়েছিল।তীরগুলি মাইটোটিক মাইক্রোটিউবুলের কাঠামো নির্দেশ করে।নক্ষত্রগুলি শ্যাম চিকিত্সার সাথে উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে (টি পরীক্ষা, পি<0.05)।n>9. স্কেল বার = 50 µm।
যদিও উরসার মাইক্রোটিউবুলের কার্যকারিতা ব্যাহত করার ক্ষমতা রয়েছে, তবে এর ক্রিয়া করার পদ্ধতিটি সাধারণ মাইক্রোটিউবুল ডিপোলিমারাইজিং এজেন্ট থেকে আলাদা হবে বলে আশা করা হচ্ছে।উদাহরণস্বরূপ, ডিসোপাইরামাইড এবং ওরিজালিনের মতো মাইক্রোটিউবুল ডিপোলিমারাইজিং এজেন্টগুলির উচ্চতর ঘনত্ব এপিডার্মাল কোষগুলির অ্যানিসোট্রপিক প্রসারণকে প্ররোচিত করে, যেখানে KAND 11 তা করে না।উপরন্তু, KAND 11 এবং ডিসোপাইরামাইডের সহ-প্রয়োগের ফলে একটি সম্মিলিত ডিসোপাইরামাইড-প্ররোচিত মূল বৃদ্ধির প্রতিক্রিয়া দেখা গেছে এবং KAND 11-প্ররোচিত বৃদ্ধির বাধা পরিলক্ষিত হয়েছে (চিত্র S4)।আমরা হাইপারসেনসিটিভ ডিসোপাইরামাইড 1-1 (phs1-1) মিউট্যান্টের KAND 11-এর প্রতিক্রিয়াও বিশ্লেষণ করেছি। phs1-1-এর একটি নন-ক্যানোনিকাল টিউবুলিন কাইনেস পয়েন্ট মিউটেশন রয়েছে এবং ডিসোপাইরামাইড 9,20 দিয়ে চিকিত্সা করা হলে ছোট শিকড় তৈরি করে।phs1-1 মিউট্যান্ট চারা আগর মিডিয়ামে জন্মায় যার মধ্যে KAND 11 আছে ডিসোপিরামিড (চিত্র S5) এর মতই খাটো শিকড়।
উপরন্তু, আমরা KAND 11 দিয়ে চিকিত্সা করা চারাগুলির মূল মেরিস্টেমে প্রোফেস জোন, স্পিন্ডেল এবং ফ্রাগমোপ্লাস্টের মতো মাইটোটিক মাইক্রোটিউবুলের গঠন পর্যবেক্ষণ করেছি। CDKB2;1p::CDKB2;1-GUS-এর পর্যবেক্ষণের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ, উল্লেখযোগ্য হ্রাস মাইটোটিক মাইক্রোটিউবুলের সংখ্যা পরিলক্ষিত হয়েছে (চিত্র .6c)।
সাবসেলুলার রেজোলিউশনে KAND 11-এর সাইটোটক্সিসিটি চিহ্নিত করার জন্য, আমরা KAND 11 দিয়ে তামাক BY-2 সাসপেনশন কোষগুলিকে চিকিত্সা করেছি এবং তাদের প্রতিক্রিয়া পর্যবেক্ষণ করেছি।আমরা প্রথমে KAND 11 যুক্ত করেছি BY-2 কোষে TagRFP-TUA6 প্রকাশ করে, যা ফ্লুরোসেন্টলি মাইক্রোটিউবুলকে লেবেল করে, কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুলে KAND 11-এর প্রভাব মূল্যায়ন করতে।কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুলের ঘনত্ব চিত্র বিশ্লেষণ ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল, যা সাইটোপ্লাজমিক পিক্সেলের মধ্যে সাইটোস্কেলিটাল পিক্সেলের শতাংশের পরিমাণ নির্ধারণ করে।পরীক্ষার ফলাফলে দেখা গেছে যে 50 μM বা 100 μM KAND 11 দিয়ে 1 ঘন্টার জন্য চিকিত্সা করার পরে, ঘনত্ব উল্লেখযোগ্যভাবে হ্রাস পেয়েছে যথাক্রমে 0.94 ± 0.74% বা 0.23 ± 0.28%, যখন DMSO দিয়ে চিকিত্সা করা কোষের ঘনত্ব , 1.4±1 ± 6.4। % (চিত্র 7a)।এই ফলাফলগুলি অ্যারাবিডোপসিসের পর্যবেক্ষণের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ যে KAND 11 চিকিত্সা কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুলসের ডিপোলিমারাইজেশনকে প্ররোচিত করে (চিত্র 6বি)।আমরা KAND 11 এর একই ঘনত্বের সাথে চিকিত্সার পরে GFP-ABD-লেবেলযুক্ত অ্যাক্টিন ফিলামেন্টগুলির সাথে BY-2 লাইনটিও পরীক্ষা করেছি এবং পর্যবেক্ষণ করেছি যে KAND 11 চিকিত্সা অ্যাক্টিন ফিলামেন্টগুলিকে ব্যাহত করেছে।1 ঘন্টার জন্য 50 μM বা 100 μM KAND 11 দিয়ে চিকিত্সা উল্লেখযোগ্যভাবে অ্যাক্টিন ফিলামেন্টের ঘনত্বকে যথাক্রমে 1.20 ± 0.62% বা 0.61 ± 0.26%-এ হ্রাস করেছে, যেখানে DMSO-চিকিত্সা করা কোষগুলির ঘনত্ব ছিল 1.69%.02 %F ± (0.26%)।7 খ)।এই ফলাফলগুলি প্রোপাইজামাইডের প্রভাবগুলির সাথে বিপরীত, যা অ্যাক্টিন ফিলামেন্টগুলিকে প্রভাবিত করে না এবং ল্যাট্রুনকুলিন বি, একটি অ্যাক্টিন ডিপোলিমারাইজার যা মাইক্রোটিউবুলসকে প্রভাবিত করে না ( SI চিত্র S6)৷উপরন্তু, coumamonamide 1, coumamonamide acid 6, বা KAND 11 দিয়ে চিকিত্সা HeLa কোষে মাইক্রোটিউবুলকে প্রভাবিত করেনি (SI চিত্র S7)।এইভাবে, KAND 11-এর কর্মের পদ্ধতিটি পরিচিত সাইটোস্কেলটন বিঘ্নকারীদের থেকে আলাদা বলে মনে করা হয়।এছাড়াও, KAND 11 এর সাথে চিকিত্সা করা BY-2 কোষগুলির আমাদের মাইক্রোস্কোপিক পর্যবেক্ষণ KAND 11 চিকিত্সার সময় কোষের মৃত্যুর সূত্রপাত প্রকাশ করেছে এবং দেখিয়েছে যে KAND 11 চিকিত্সার 30 মিনিটের পরে ইভান্সের নীল-দাগযুক্ত মৃত কোষগুলির অনুপাত উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পায়নি, যেখানে 50 μM বা 100 μM KAND দিয়ে চিকিত্সার 90 মিনিটের পরে, মৃত কোষের সংখ্যা যথাক্রমে 43.7% বা 80.1% বৃদ্ধি পায় (চিত্র 7c)।একত্রে নেওয়া, এই তথ্যগুলি ইঙ্গিত করে যে উপন্যাস ursolic অ্যাসিড ডেরিভেটিভ KAND 11 হল একটি উদ্ভিদ-নির্দিষ্ট সাইটোস্কেলিটাল ইনহিবিটর যার কর্মের পূর্বে অজানা প্রক্রিয়া রয়েছে।
KAND কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুলস, অ্যাক্টিন ফিলামেন্ট এবং তামাকের BY-2 কোষের কার্যকারিতাকে প্রভাবিত করে।(a) TagRFP-TUA6 এর উপস্থিতিতে BY-2 কোষে কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুলের ভিজ্যুয়ালাইজেশন।KAND 11 (50 μM বা 100 μM) বা DMSO দিয়ে চিকিত্সা করা BY-2 কোষগুলি কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল।কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুলের ঘনত্ব 25টি স্বাধীন কোষের মাইক্রোগ্রাফ থেকে গণনা করা হয়েছিল।চিঠিগুলি উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে (টুকি এইচএসডি পরীক্ষা, পি<0.05)।স্কেল বার = 10 µm।(b) BY-2 কোষে কর্টিকাল অ্যাক্টিন ফিলামেন্ট GFP-ABD2 এর উপস্থিতিতে কল্পনা করা হয়েছে।KAND 11 (50 μM বা 100 μM) বা DMSO দিয়ে চিকিত্সা করা BY-2 কোষগুলি কনফোকাল মাইক্রোস্কোপি দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল।কর্টিকাল অ্যাক্টিন ফিলামেন্টের ঘনত্ব 25টি স্বাধীন কোষের মাইক্রোগ্রাফ থেকে গণনা করা হয়েছিল।চিঠিগুলি উল্লেখযোগ্য পার্থক্য নির্দেশ করে (টুকি এইচএসডি পরীক্ষা, পি<0.05)।স্কেল বার = 10 µm।(c) ইভান্স ব্লু স্টেনিং দ্বারা মৃত BY-2 কোষের পর্যবেক্ষণ।KAND 11 (50 μM বা 100 μM) বা DMSO দিয়ে চিকিত্সা করা BY-2 কোষগুলি উজ্জ্বল-ক্ষেত্র মাইক্রোস্কোপি দ্বারা পরীক্ষা করা হয়েছিল।n=3।স্কেল বার = 100 µm।
নতুন প্রাকৃতিক পণ্যের আবিষ্কার এবং প্রয়োগ ওষুধ এবং কৃষি সহ মানব জীবনের বিভিন্ন ক্ষেত্রে উল্লেখযোগ্য অগ্রগতির দিকে পরিচালিত করেছে।প্রাকৃতিক সম্পদ থেকে দরকারী যৌগ প্রাপ্ত করার জন্য ঐতিহাসিক গবেষণা করা হয়েছে।বিশেষ করে, অ্যাক্টিনোমাইসিটগুলি নেমাটোডের জন্য অ্যান্টিপ্যারাসাইটিক অ্যান্টিবায়োটিক হিসাবে উপযোগী বলে পরিচিত কারণ তাদের বিভিন্ন গৌণ মেটাবোলাইট যেমন অ্যাভারমেকটিন, আইভারমেকটিন এবং ব্লোমাইসিনের সীসা যৌগ এবং এর ডেরিভেটিভস তৈরি করার ক্ষমতার কারণে, যা ওষুধে একটি অ্যান্টিক্যান্সার এজেন্ট হিসাবে ব্যবহৃত হয় 21,22।একইভাবে, অ্যাক্টিনোমাইসিটিস থেকে বিভিন্ন প্রকার ভেষজনাশক যৌগ আবিষ্কৃত হয়েছে, যার মধ্যে কয়েকটি ইতিমধ্যে বাণিজ্যিকভাবে 1,23 ব্যবহার করা হয়েছে।অতএব, কাঙ্ক্ষিত জৈবিক ক্রিয়াকলাপের সাথে প্রাকৃতিক পণ্যগুলিকে বিচ্ছিন্ন করার জন্য অ্যাক্টিনোমাইসিট বিপাকগুলির বিশ্লেষণ একটি কার্যকর কৌশল হিসাবে বিবেচিত হয়।এই গবেষণায়, আমরা S. werraensis থেকে একটি নতুন যৌগ, coumamonamide আবিষ্কার করেছি এবং সফলভাবে এটি সংশ্লেষিত করেছি।Ursonic অ্যাসিড হল urbenamide এবং এর ডেরিভেটিভের একটি কৃত্রিম মধ্যবর্তী।এটি বৈশিষ্ট্যযুক্ত মূল কুঁচকে যেতে পারে, মাঝারি থেকে শক্তিশালী হার্বিসাইডাল কার্যকলাপ প্রদর্শন করতে পারে এবং প্রত্যক্ষ বা পরোক্ষভাবে উদ্ভিদের মাইক্রোটিউবুলের ক্ষতি করতে পারে।যাইহোক, urmotonic অ্যাসিডের ক্রিয়া করার পদ্ধতি বিদ্যমান মাইক্রোটিউবুল ইনহিবিটরগুলির থেকে আলাদা হতে পারে, যেহেতু KAND 11 অ্যাক্টিন ফিলামেন্টগুলিকেও ব্যাহত করে এবং কোষের মৃত্যু ঘটায়, এটি একটি নিয়ন্ত্রক পদ্ধতির পরামর্শ দেয় যার দ্বারা urmotonic অ্যাসিড এবং এর ডেরিভেটিভগুলি বিস্তৃত সাইটোস্কেলিটাল কাঠামোকে প্রভাবিত করে।.
আরবেনোনিক অ্যাসিডের আরও বিশদ বৈশিষ্ট্য urbenonic অ্যাসিডের ক্রিয়াকলাপের প্রক্রিয়াটি আরও ভালভাবে বুঝতে সাহায্য করবে।বিশেষ করে, পরবর্তী লক্ষ্য হল ursonic অ্যাসিড এবং এর ডেরিভেটিভগুলি মাইক্রোটিউবুলের উপর সরাসরি কাজ করে এবং তাদের ডিপোলিমারাইজ করে কিনা, বা তাদের ক্রিয়া মাইক্রোটিউবুলে অস্থিতিশীলতা সৃষ্টি করে কিনা তা নির্ধারণ করতে কম মাইক্রোটিউবুলের সাথে আবদ্ধ হওয়ার জন্য ursonic অ্যাসিডের ক্ষমতা মূল্যায়ন করা।উপরন্তু, যে ক্ষেত্রে মাইক্রোটিউবুলগুলি সরাসরি লক্ষ্য নয়, উদ্ভিদ কোষে ইউরসনিক অ্যাসিডের কর্মস্থল এবং আণবিক লক্ষ্যগুলি সনাক্ত করা সংশ্লিষ্ট যৌগের বৈশিষ্ট্যগুলি এবং হার্বিসাইডাল কার্যকলাপ উন্নত করার সম্ভাব্য উপায়গুলিকে আরও বুঝতে সাহায্য করবে।আমাদের বায়োঅ্যাকটিভিটি অ্যাস অ্যারাবিডোপসিস থালিয়ানা, তামাক এবং লিভারওয়ার্টের মতো উদ্ভিদের বৃদ্ধিতে ursonic অ্যাসিডের অনন্য সাইটোটক্সিক ক্ষমতা প্রকাশ করেছে, যখন E. coli বা HeLa কোষগুলি প্রভাবিত হয়নি।পশু কোষে সামান্য বা কোন বিষাক্ততা ursonic অ্যাসিড ডেরাইভেটিভের একটি সুবিধা যদি তারা খোলা কৃষিক্ষেত্রে ব্যবহারের জন্য হার্বিসাইড হিসাবে উন্নত করা হয়।প্রকৃতপক্ষে, যেহেতু মাইক্রোটিউবিউলগুলি ইউক্যারিওটে সাধারণ কাঠামো, তাই উদ্ভিদে তাদের নির্বাচনী বাধা হর্বিনাশকের জন্য একটি মূল প্রয়োজন।উদাহরণস্বরূপ, প্রোপাইজামাইড, একটি মাইক্রোটিউবুল ডিপোলিমারাইজিং এজেন্ট যা সরাসরি টিউবুলিনের সাথে আবদ্ধ হয় এবং পলিমারাইজেশনকে বাধা দেয়, এটি প্রাণীর কোষে কম বিষাক্ততার কারণে ভেষজনাশক হিসাবে ব্যবহৃত হয়24।ডিসোপাইরামাইডের বিপরীতে, সম্পর্কিত বেনজামাইডের বিভিন্ন লক্ষ্যমাত্রা রয়েছে।উদ্ভিদের মাইক্রোটিউবুলস ছাড়াও, RH-4032 বা বেনজক্সামাইড যথাক্রমে প্রাণী কোষ বা oomycetes-এর মাইক্রোটিউবিউলগুলিকেও বাধা দেয় এবং ফাইটোটক্সিসিটি 25,26,27 কম হওয়ার কারণে জালিলামাইড একটি ছত্রাকনাশক হিসাবে ব্যবহৃত হয়।নতুন আবিষ্কৃত ভালুক এবং এর ডেরিভেটিভগুলি উদ্ভিদের বিরুদ্ধে নির্বাচনী সাইটোটক্সিসিটি প্রদর্শন করে, তবে এটি লক্ষণীয় যে আরও পরিবর্তনগুলি তাদের লক্ষ্য নির্দিষ্টতাকে পরিবর্তন করতে পারে, সম্ভাব্যভাবে প্যাথোজেনিক ছত্রাক বা ওমিসিটিস নিয়ন্ত্রণের জন্য অতিরিক্ত ডেরিভেটিভ প্রদান করে।
আরবেনোনিক অ্যাসিডের অনন্য বৈশিষ্ট্য এবং এর ডেরিভেটিভগুলি ভেষজনাশক হিসাবে তাদের বিকাশের জন্য এবং গবেষণার সরঞ্জাম হিসাবে ব্যবহারের জন্য দরকারী।উদ্ভিদ কোষের আকৃতি নিয়ন্ত্রণে সাইটোস্কেলটনের গুরুত্ব ব্যাপকভাবে স্বীকৃত।পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে উদ্ভিদগুলি সঠিকভাবে মরফোজেনেসিস নিয়ন্ত্রণ করতে মাইক্রোটিউবিউল গতিবিদ্যা নিয়ন্ত্রণ করে কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুল সংগঠনের জটিল প্রক্রিয়া তৈরি করেছে।মাইক্রোটিউবুল ক্রিয়াকলাপ নিয়ন্ত্রণের জন্য দায়ী বিপুল সংখ্যক অণু চিহ্নিত করা হয়েছে এবং সম্পর্কিত গবেষণা এখনও চলছে 3,4,28।উদ্ভিদ কোষে মাইক্রোটিউবুলের গতিবিদ্যা সম্পর্কে আমাদের বর্তমান উপলব্ধি কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুল সংগঠনের প্রক্রিয়া সম্পূর্ণরূপে ব্যাখ্যা করে না।উদাহরণস্বরূপ, যদিও ডিসোপাইরামাইড এবং ওরিজালিন উভয়ই মাইক্রোটিউবুলকে ডিপোলিমারাইজ করতে পারে, ডিসোপাইরামাইড মারাত্মক মূল বিকৃতি ঘটায় যখন ওরিজালিনের তুলনামূলকভাবে হালকা প্রভাব রয়েছে।তদুপরি, টিউবুলিনে মিউটেশন, যা মাইক্রোটিউবুলকে স্থিতিশীল করে, এছাড়াও শিকড়গুলিতে ডেক্সট্রোরোটেশন ঘটায়, যেখানে প্যাক্লিট্যাক্সেল, যা মাইক্রোটিউবুলের গতিবিদ্যাকেও স্থিতিশীল করে, তা করে না।অতএব, ইউরসোলিক অ্যাসিডের আণবিক লক্ষ্যগুলি অধ্যয়ন করা এবং সনাক্ত করা উদ্ভিদ কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুলসের নিয়ন্ত্রণে নতুন অন্তর্দৃষ্টি প্রদান করা উচিত।একইভাবে, বিকৃত বৃদ্ধির প্রচারে কার্যকর রাসায়নিকের ভবিষ্যত তুলনা, যেমন ডিসোপাইরামাইড এবং কম কার্যকর রাসায়নিক, যেমন ওরিজালিন বা কুমামোটোরিক অ্যাসিড, কীভাবে বিকৃত বৃদ্ধি ঘটতে পারে তার সূত্র প্রদান করবে।
অন্যদিকে, প্রতিরক্ষা-সম্পর্কিত সাইটোস্কেলেটাল পুনর্বিন্যাসগুলি ursonic অ্যাসিডের সাইটোটক্সিসিটি ব্যাখ্যা করার আরেকটি সম্ভাবনা।একটি প্যাথোজেনের সংক্রমণ বা উদ্ভিদ কোষে একটি এলিসিটরের প্রবর্তন কখনও কখনও সাইটোস্কেলটনের ধ্বংস এবং পরবর্তী কোষের মৃত্যু ঘটায় 29।উদাহরণস্বরূপ, omycete থেকে প্রাপ্ত ক্রিপ্টোক্সানথিন তামাক কোষের মৃত্যুর আগে মাইক্রোটিউবুলস এবং অ্যাক্টিন ফিলামেন্টগুলিকে ব্যাহত করে বলে রিপোর্ট করা হয়েছে, যা KAND চিকিত্সার সাথে ঘটে 30,31 এর মতো।ursonic অ্যাসিড দ্বারা প্ররোচিত প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া এবং সেলুলার প্রতিক্রিয়াগুলির মধ্যে মিলগুলি আমাদের অনুমান করতে পরিচালিত করে যে তারা সাধারণ সেলুলার প্রক্রিয়াগুলিকে ট্রিগার করে, যদিও ক্রিপ্টোক্সানথিনের তুলনায় ursonic অ্যাসিডের একটি দ্রুত এবং শক্তিশালী প্রভাব স্পষ্ট।যাইহোক, গবেষণায় দেখা গেছে যে অ্যাক্টিন ফিলামেন্টের ব্যাঘাত স্বতঃস্ফূর্ত কোষের মৃত্যুকে উৎসাহিত করে, যা সর্বদা মাইক্রোটিউবুল বিঘ্নের সাথে থাকে না।উপরন্তু, এটি দেখতে বাকি থাকে যে প্যাথোজেন বা ইলিসিটর বিকৃত শিকড় বৃদ্ধির কারণ হয়, যেমনটি ursonic অ্যাসিড ডেরিভেটিভগুলি করে।এইভাবে, আণবিক জ্ঞান প্রতিরক্ষা প্রতিক্রিয়া এবং সাইটোস্কেলটনকে সংযুক্ত করার জন্য একটি আকর্ষণীয় সমস্যা সমাধান করা উচিত।ursonic অ্যাসিড সম্পর্কিত কম আণবিক ওজন যৌগের উপস্থিতি শোষণ করে, সেইসাথে বিভিন্ন ক্ষমতার সাথে ডেরিভেটিভের একটি পরিসীমা, তারা অজানা সেলুলার প্রক্রিয়াকে লক্ষ্য করার সুযোগ প্রদান করতে পারে।
একসাথে নেওয়া, নতুন যৌগগুলির আবিষ্কার এবং প্রয়োগ যা মাইক্রোটিউবুলের গতিবিদ্যাকে সংশোধন করে উদ্ভিদ কোষের আকৃতি নির্ধারণের অন্তর্নিহিত জটিল আণবিক প্রক্রিয়াগুলিকে মোকাবেলা করার জন্য শক্তিশালী পদ্ধতি প্রদান করবে।এই প্রসঙ্গে, সম্প্রতি বিকশিত যৌগ urmotonic অ্যাসিড, যা মাইক্রোটিউবুল এবং অ্যাক্টিন ফিলামেন্টগুলিকে প্রভাবিত করে এবং কোষের মৃত্যুকে প্ররোচিত করে, মাইক্রোটিউবুল নিয়ন্ত্রণ এবং এই অন্যান্য প্রক্রিয়াগুলির মধ্যে সংযোগ বোঝার সুযোগ দিতে পারে।সুতরাং, আরবেনোনিক অ্যাসিড ব্যবহার করে রাসায়নিক এবং জৈবিক বিশ্লেষণ আমাদের আণবিক নিয়ন্ত্রক প্রক্রিয়াগুলি বুঝতে সাহায্য করবে যা উদ্ভিদ সাইটোস্কেলটন নিয়ন্ত্রণ করে।
2% (w/v) গ্যালাকটোজ, 2% (w/v) এসেন্স পেস্ট, 1% (w/v) ব্যাকটো কম্পোজ সমন্বিত 110 mL বীজ মাঝারি সমন্বিত একটি 500 মিলি বিভ্রান্ত Erlenmeyer ফ্লাস্কে S. werraensis MK493-CF1 টিকা দিন .-সয়টন (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক, ইনক.), 0.5% (w/v) ভুট্টার নির্যাস (KOGOSTCH Co., Ltd., Japan), 0.2% (w/v) (NH4)2SO4 এবং 0.2% CaCO3 ডিওনাইজড জলে।(জীবাণুমুক্তকরণের আগে pH 7.4)।বীজের চাষগুলি রোটারি শেকারে (180 rpm) 27 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 2 দিনের জন্য ইনকিউবেট করা হয়েছিল।সলিড স্টেট ফার্মেন্টেশনের মাধ্যমে উৎপাদন চাষ।বীজ চাষ (7 মিলি) একটি 500 মিলি কে-1 ফ্লাস্কে স্থানান্তরিত করা হয়েছিল যাতে 40 গ্রাম উৎপাদন মাধ্যম থাকে যার মধ্যে 15 গ্রাম চাপা বার্লি (MUSO Co., Ltd., Japan) এবং 25 গ্রাম ডিওনাইজড জল (pH সমন্বয় করা হয়নি)। জীবাণুমুক্ত করার আগে)।)14 দিনের জন্য অন্ধকারে 30 ডিগ্রি সেলসিয়াসে গাঁজন করা হয়েছিল।গাঁজন উপাদানটি 40 মিলি/বোতল EtOH এবং সেন্ট্রিফিউজড (1500 গ্রাম, 4°C, 10 মিনিট) দিয়ে বের করা হয়েছিল।কালচার সুপারনাট্যান্ট (60 মিলি) 10% MeOH/EtOAc এর মিশ্রণ দিয়ে বের করা হয়েছিল।জৈব স্তরটি একটি অবশিষ্টাংশ (59.5 মিলিগ্রাম) পাওয়ার জন্য কম চাপে বাষ্পীভূত হয়েছিল, যা একটি বিপরীত ফেজ কলামে (SHISEIDO CAPCELL PAK C18 UG120, 5 μm, ID) গ্রেডিয়েন্ট ইলুশন (0-10 মিনিট: 90%) সহ HPLC-এর অধীন ছিল। 10 মিমি × দৈর্ঘ্য 250 মিমি) H2O/CH3CN, 10-35 মিনিট: 90% H2O/CH3CN থেকে 70% H2O/CH3CN (গ্রেডিয়েন্ট), 35-45 মিনিট: 90% H2O/EtOH, 45-155 মিনিট: 90% HO2 /EtOH থেকে 100% EtOH (গ্রেডিয়েন্ট (গ্রেডিয়েন্ট), 155-200 মিনিট: 100% EtOH) 1.5 মিলি/মিনিটের প্রবাহ হারে, কউমামোনামাইড (1, 36.0 মিলিগ্রাম) সাদা নিরাকার পাউডার হিসাবে বিচ্ছিন্ন ছিল।
কুমামোটোমাইড (1);1H-NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.93 (t, J = 2.5 Hz, 1H), 6.76 (dd, J = 4.3, 1.8 Hz 1H), 6.05 (t, J = 3.8 Hz, 1H)।), 4.08 (s, 3H);13C-NMR (125 MHz, CDCl3) δ 161.1, 121.0, 119.9, 112.2, 105.0, 68.3;ESI-HRMS [M+H]+: [C6H9N2O2]+ গণনা করা মান: 141.0659, পরিমাপ করা মান: 141.0663, IR νmax 3451, 3414, 3173, 2938, 1603, 1593, 137cm।
কলাম্বিয়ার বীজ (Col-0) গবেষণা ব্যবহারের জন্য অনুমতি নিয়ে Arabidopsis Biological Resource Center (ABRC) থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল।Col-0 বীজগুলি আমাদের পরীক্ষাগারের অবস্থার অধীনে প্রচারিত এবং রক্ষণাবেক্ষণ করা হয়েছিল এবং বন্য ধরণের অ্যারাবিডোপসিস উদ্ভিদ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।অ্যারাবিডোপসিস বীজগুলি 2% সুক্রোজ (ফুজিফিল্ম ওয়াকো পিওর কেমিক্যাল), 0.05% (ডব্লিউ/ভি) 2- (4-মরফোলিনো) ইথেনেসালফোনিক অ্যাসিড (এমইএস) (ফুজিফিল্ম ওয়াকো পিউর চেমিক্যাল অ্যাসিড) ধারণ করে অর্ধ-শক্তির মুরাশিগে এবং স্কুগ মাধ্যমের উপরিভাগ নির্বীজিত এবং সংষ্কৃত করা হয়েছিল। )) এবং 1.5% আগর (ফুজিফিল্ম ওয়াকো পিওর কেমিক্যাল), pH 5.7, 23 °সে এবং ধ্রুবক আলো।phs1-1 মিউট্যান্টের বীজ T. Hashimoto (Nara Institute of Science and Technology) দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছিল।
স্ট্রেন SR-1 এর বীজ টি. হাশিমোটো (নারা ইনস্টিটিউট অফ সায়েন্স অ্যান্ড টেকনোলজি) দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছিল এবং বন্য ধরণের তামাক গাছ হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।তামাকের বীজগুলিকে জীবাণুমুক্ত করা হয়েছিল এবং অঙ্কুরোদগম বাড়াতে তিন রাত জীবাণুমুক্ত জলে ভিজিয়ে রাখা হয়েছিল, তারপর 2% সুক্রোজ, 0.05% (w/v) MES এবং 0.8% জেলান গাম (ফুজিফিল্ম ওয়াকো পিওর কেমিক্যাল) ধারণকারী অর্ধ-শক্তির দ্রবণে রাখা হয়েছিল। মুরাশিগে।এবং স্কুগ মিডিয়াম) পিএইচ 5.7 সহ এবং ধ্রুবক আলোতে 23°সে.
স্ট্রেন টাক-১ টি. কোহচি (কিয়োটো বিশ্ববিদ্যালয়) দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছিল এবং লিভারওয়ার্ট অধ্যয়নের জন্য স্ট্যান্ডার্ড পরীক্ষামূলক ইউনিট হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল।জীবাণুমুক্ত সংষ্কৃত উদ্ভিদ থেকে জেমা প্রাপ্ত করা হয়েছিল এবং তারপর গামবোর্গ বি 5 মাঝারি (ফুজিফিল্ম ওয়াকো পিওর কেমিক্যাল) এর উপর 1% সুক্রোজ এবং 0.3% জেলান গামযুক্ত প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল এবং অবিচ্ছিন্ন আলোতে 23 ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় ইনকিউব করা হয়েছিল।
তামাক বিওয়াই-২ কোষ (নিকোটিয়ানা ট্যাবাকাম এল. সিভি। উজ্জ্বল হলুদ 2) এস. হাসেজাওয়া (টোকিও বিশ্ববিদ্যালয়) দ্বারা সরবরাহ করা হয়েছিল।BY-2 কোষগুলি পরিবর্তিত Linsmeier এবং Skoog মাধ্যমে 95-গুণ মিশ্রিত করা হয়েছিল এবং 2,4-ডিক্লোরোফেনোক্সাইসেটিক অ্যাসিড 32 দিয়ে সাপ্তাহিক পরিপূরক করা হয়েছিল।সেল সাসপেনশনটি অন্ধকারে 27 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 130 আরপিএম-এ একটি ঘূর্ণমান শেকারে মিশ্রিত করা হয়েছিল।তাজা মাধ্যমের 10 গুণ ভলিউম সহ কোষগুলি ধুয়ে ফেলুন এবং একই মাধ্যমে পুনরায় সাসপেন্ড করুন।ফুলকপি মোজাইক ভাইরাস 35S প্রোমোটারের অধীনে মাইক্রোটিউবুল মার্কার TagRFP-TUA6 বা অ্যাক্টিন ফিলামেন্ট মার্কার GFP-ABD2 কে স্থিরভাবে প্রকাশ করে BY-2 ট্রান্সজেনিক সেল লাইনগুলি 33,34,35 হিসাবে বর্ণনা করা হয়েছে।এই সেল লাইনগুলি মূল BY-2 সেল লাইনের জন্য ব্যবহৃত পদ্ধতির মতো পদ্ধতি ব্যবহার করে রক্ষণাবেক্ষণ এবং সিঙ্ক্রোনাইজ করা যেতে পারে।
হেলা কোষগুলিকে Dulbecco-এর পরিবর্তিত ঈগলস মিডিয়াম (DMEM) (লাইফ টেকনোলজিস) তে 10% ভ্রূণের বোভাইন সিরাম, 1.2 U/ml পেনিসিলিন এবং 1.2 μg/ml স্ট্রেপ্টোমাইসিন দিয়ে একটি 37°C %2 ইনকিউবেটরে সংযোজন করা হয়েছিল।
এই পাণ্ডুলিপিতে বর্ণিত সমস্ত পরীক্ষা-নিরীক্ষা জাপানি জৈব নিরাপত্তা প্রবিধান এবং নির্দেশিকা অনুসারে সম্পাদিত হয়েছিল।
যৌগগুলি ডাইমিথাইল সালফক্সাইডে (DMSO; ফুজিফিল্ম ওয়াকো পিওর কেমিক্যাল) স্টক সলিউশন হিসাবে দ্রবীভূত করা হয়েছিল এবং অ্যারাবিডোপসিসের জন্য এমএস মিডিয়ামে এবং লিভারওয়ার্টের জন্য তামাক বা গামবুর্গ বি5 মিডিয়ামে মিশ্রিত করা হয়েছিল।শিকড়ের বৃদ্ধি প্রতিরোধের পরীক্ষা করার জন্য, নির্দেশিত যৌগ বা DMSO ধারণকারী আগর মাধ্যমে প্রতি প্লেটে 10টিরও বেশি বীজ বপন করা হয়েছিল।বীজ 7 দিনের জন্য একটি গ্রোথ চেম্বারে ইনকিউব করা হয়েছিল।চারার ছবি তোলা হয় এবং শিকড়ের দৈর্ঘ্য পরিমাপ করা হয়।অ্যারাবিডোপসিস অঙ্কুরোদগম পরীক্ষার জন্য, 200 μM যৌগ বা DMSO সমন্বিত আগর মাধ্যমে প্রতি প্লেটে 48টি বীজ বপন করা হয়েছিল।অ্যারাবিডোপসিস বীজ একটি গ্রোথ চেম্বারে জন্মানো হয়েছিল এবং অঙ্কুরোদগমের (ড্যাগ) 7 দিন পরে অঙ্কুরিত চারাগুলির সংখ্যা গণনা করা হয়েছিল।তামাকের অঙ্কুরোদগম পরীক্ষার জন্য, প্রতি প্লেটে 24টি বীজ আগর মাধ্যমে বপন করা হয়েছিল যাতে 200 μM KAND বা DMSO ছিল।তামাকের বীজ একটি গ্রোথ চেম্বারে জন্মানো হয়েছিল এবং 14 দিন পর অঙ্কুরিত চারার সংখ্যা গণনা করা হয়েছিল।লিভারওয়ার্ট গ্রোথ ইনহিবিশন অ্যাসের জন্য, প্রতিটি প্লেট থেকে 9টি ভ্রূণ আগর মিডিয়ামে প্রলেপ করা হয়েছিল যাতে KAND বা DMSO-এর নির্দেশিত ঘনত্ব রয়েছে এবং 14 দিনের জন্য একটি গ্রোথ চেম্বারে ইনকিউব করা হয়েছিল।
5 মিলিগ্রাম/মিলি প্রোপিডিয়াম আয়োডাইড (PI) দিয়ে দাগযুক্ত চারা ব্যবহার করুন মূল মেরিস্টেম সংগঠনের কল্পনা করতে।PI সংকেতগুলি একটি TCS SPE কনফোকাল লেজার স্ক্যানিং মাইক্রোস্কোপ (লাইকা মাইক্রোসিস্টেম) ব্যবহার করে ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপি দ্বারা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।
β-glucuronidase (GUS) এর সাথে শিকড়ের হিস্টোকেমিক্যাল স্টেনিং মালামি এবং বেনফে 36 দ্বারা বর্ণিত প্রোটোকল অনুসারে সঞ্চালিত হয়েছিল।চারাগুলিকে 90% অ্যাসিটোনে রাতারাতি স্থির করা হয়েছিল, 0.5 mg/ml 5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-d-glucuronic অ্যাসিড দিয়ে GUS বাফারে 1 ঘন্টার জন্য দাগ দেওয়া হয়েছিল এবং একটি হাইড্রেটেড ক্লোরালডিহাইড দ্রবণে স্থাপন করা হয়েছিল।(8 গ্রাম ক্লোরাল হাইড্রেট, 2 মিলি জল এবং 1 মিলি গ্লিসারল) এবং একটি অ্যাক্সিও ইমেজার এম1 মাইক্রোস্কোপ (কার্ল জেইস) ব্যবহার করে ডিফারেনশিয়াল ইন্টারফারেন্স কনট্রাস্ট মাইক্রোস্কোপি দ্বারা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছে।
মূল কোণগুলি উল্লম্বভাবে স্থাপন করা প্লেটে জন্মানো 7-দিন বয়সী চারাগুলিতে পরিমাপ করা হয়েছিল।ধাপ 6 এ বর্ণিত অভিকর্ষ ভেক্টরের দিক থেকে মূলের কোণ পরিমাপ করুন।
কর্টিকাল মাইক্রোটিউবুলের বিন্যাসটি বর্ণনা অনুসারে পরিলক্ষিত হয়েছিল, প্রোটোকল 37-এ সামান্য পরিবর্তন সহ।অ্যান্টি-β-টিউবুলিন অ্যান্টিবডি (KMX-1, মার্ক মিলিপুর: MAB3408) এবং অ্যালেক্সা ফ্লুর 488-কনজুগেটেড অ্যান্টি-মাউস আইজিজি (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক: A32723) প্রাথমিক এবং মাধ্যমিক অ্যান্টিবডি হিসাবে 1:1000 এবং 1:100 ডিলিউশনে ব্যবহৃত হয়েছিল, যথাক্রমেফ্লুরোসেন্স ইমেজগুলি টিসিএস এসপিই কনফোকাল লেজার স্ক্যানিং মাইক্রোস্কোপ (লাইকা মাইক্রোসিস্টেম) ব্যবহার করে অর্জিত হয়েছিল।জেড-স্ট্যাক চিত্রগুলি অর্জন করুন এবং প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে সর্বাধিক তীব্রতার অনুমান তৈরি করুন।
প্রস্তুতকারকের নির্দেশ অনুসারে সেল কাউন্টিং কিট 8 (ডোজিন্ডো) ব্যবহার করে হেলা সেল প্রসারণ পরীক্ষা করা হয়েছিল।
E. coli DH5α এর বৃদ্ধি 600 nm (OD600) এ স্পেকট্রোফটোমিটার ব্যবহার করে সংস্কৃতিতে কোষের ঘনত্ব পরিমাপ করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল।
CSU-X1 কনফোকাল স্ক্যানিং ডিভাইস (ইয়োকোগাওয়া) এবং একটি sCMOS ক্যামেরা (Zyla, Andor Technology) দিয়ে সজ্জিত একটি ফ্লুরোসেন্স মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করে ট্রান্সজেনিক BY-2 কোষে সাইটোস্কেলেটাল সংস্থা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।সাইটোস্কেলিটাল ঘনত্ব চিত্র বিশ্লেষণের দ্বারা মূল্যায়ন করা হয়েছিল, যা 38,39 হিসাবে বর্ণিত ইমেজজে সফ্টওয়্যার ব্যবহার করে কনফোকাল চিত্রগুলিতে সাইটোপ্লাজমিক পিক্সেলগুলির মধ্যে সাইটোস্কেলিটাল পিক্সেলের শতাংশের পরিমাণ নির্ধারণ করে।
BY-2 কোষে কোষের মৃত্যু শনাক্ত করার জন্য, ঘরের তাপমাত্রায় 0.05% ইভান্স ব্লু দিয়ে সেল সাসপেনশনের একটি অ্যালিকোট 10 মিনিটের জন্য ইনকিউব করা হয়েছিল।মৃত কোষের সিলেক্টিভ ইভান্স ব্লু স্টেনিং অক্ষত প্লাজমা মেমব্রেন40 দ্বারা কার্যকর কোষ থেকে রঞ্জক এক্সট্রুশনের উপর নির্ভর করে।দাগযুক্ত কোষগুলি একটি উজ্জ্বল-ক্ষেত্র মাইক্রোস্কোপ (BX53, অলিম্পাস) ব্যবহার করে পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।
37°C এবং 5% CO2-এ আর্দ্রতাযুক্ত ইনকিউবেটরে 10% FBS-এর সাথে DMEM-তে HeLa কোষ জন্মানো হয়েছিল।কোষগুলিকে 100 μM KAND 11, কুমামোনামিক অ্যাসিড 6, kumamonamide 1, 100 ng/ml colcemid (Gibco), বা 100 ng/ml Nocodmaze (Sigma) দিয়ে 37 ডিগ্রি সেলসিয়াসে 6 ঘন্টার জন্য চিকিত্সা করা হয়েছিল।কোষগুলিকে 10 মিনিটের জন্য MetOH দিয়ে এবং তারপরে ঘরের তাপমাত্রায় 5 মিনিটের জন্য অ্যাসিটেট দিয়ে স্থির করা হয়েছিল।স্থির কোষগুলিকে β-টিউবুলিন প্রাইমারি অ্যান্টিবডি (1D4A4, প্রোটিনটেক: 66240-1) 0.5% BSA/PBS-এ 2 ঘন্টার জন্য মিশ্রিত করা হয়েছিল, TBST দিয়ে 3 বার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল, এবং তারপর আলেক্সা ফ্লুর ছাগলের অ্যান্টিবডি দিয়ে ইনকিউব করা হয়েছিল।488 1 ঘন্টা।– মাউস IgG (থার্মো ফিশার সায়েন্টিফিক: A11001) এবং 15 ng/ml 4′,6-diamidino-2-phenylindole (DAPI) 0.5% BSA/PBS-এ মিশ্রিত।তিনবার টিবিএসটি দিয়ে ধোয়ার পর, নিকন ইক্লিপস টি-ই ইনভার্টেড মাইক্রোস্কোপে দাগযুক্ত কোষগুলি পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল।মেটামর্ফ সফ্টওয়্যার (আণবিক ডিভাইস) ব্যবহার করে একটি শীতল হামামাতসু ORCA-R2 সিসিডি ক্যামেরা দিয়ে চিত্রগুলি ধারণ করা হয়েছিল।