বেনিনে গৃহস্থালিতে ১২, ২৪ এবং ৩৬ মাস ব্যবহারের পর পাইরেথ্রয়েড-প্রতিরোধী ম্যালেরিয়া বাহকের বিরুদ্ধে নতুন প্রজন্মের কীটনাশকযুক্ত মশারিগুলির পরীক্ষামূলক কার্যকারিতা | ম্যালেরিয়া জার্নাল

পাইরেথ্রিন-প্রতিরোধী ম্যালেরিয়া বাহকের বিরুদ্ধে নতুন এবং মাঠপর্যায়ে পরীক্ষিত পরবর্তী প্রজন্মের মশারির জৈবিক কার্যকারিতা মূল্যায়নের জন্য দক্ষিণ বেনিনের খোয়েতে ধারাবাহিক পরীক্ষামূলক চাষাবাদ করা হয়েছিল। ১২, ২৪ এবং ৩৬ মাস পর মাঠপর্যায়ে ব্যবহৃত মশারিগুলো বাড়িগুলো থেকে সরিয়ে নেওয়া হয়। সম্পূর্ণ কীটনাশক-প্রতিরোধী মশারি থেকে কেটে নেওয়া জালের টুকরোগুলোর রাসায়নিক গঠন বিশ্লেষণ করা হয় এবং প্রতিটি পরীক্ষার সময় খোয়ের বাহক জনগোষ্ঠীর মধ্যে কীটনাশক প্রতিরোধের পরিবর্তন নির্ণয়ের জন্য সংবেদনশীলতা বায়োঅ্যাসে পরিচালনা করা হয়।
ইন্টারসেপ্টর® জি২ ​​অন্যান্য কীটনাশকযুক্ত মশারিকে ছাড়িয়ে গেছে, যা অন্যান্য ধরণের মশারির তুলনায় পাইরেথ্রয়েড এবং ক্লোরফেনাপাইর মশারির শ্রেষ্ঠত্বকে নিশ্চিত করে। নতুন পণ্যগুলোর মধ্যে, পরবর্তী প্রজন্মের সমস্ত কীটনাশকযুক্ত মশারি ইন্টারসেপ্টর®-এর চেয়ে ভালো জৈব-কার্যকারিতা প্রদর্শন করেছে; তবে, পাইরেথ্রয়েড-বহির্ভূত যৌগগুলোর স্বল্পস্থায়ীত্বের কারণে মাঠে ব্যবহারের পর এই উন্নতির মাত্রা হ্রাস পেয়েছে। এই ফলাফলগুলো পরবর্তী প্রজন্মের কীটনাশকযুক্ত মশারিগুলোর কীটনাশক কার্যকারিতার স্থায়িত্ব উন্নত করার প্রয়োজনীয়তার ওপর আলোকপাত করে।
     কীটনাশকবিগত ২০ বছরে ম্যালেরিয়ায় আক্রান্তের সংখ্যা ও মৃত্যুহার কমাতে কীটনাশকযুক্ত মশারি (আইটিএন) একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করেছে। ২০০৪ সাল থেকে বিশ্বব্যাপী ৩ বিলিয়নেরও বেশি আইটিএন বিতরণ করা হয়েছে এবং মডেলিং সমীক্ষা থেকে জানা যায় যে, ২০০০ থেকে ২০১৫ সালের মধ্যে সাব-সাহারান আফ্রিকায় ৬৮% ম্যালেরিয়া প্রতিরোধ করা সম্ভব হয়েছে। দুর্ভাগ্যবশত, পাইরেথ্রয়েডের (আইটিএন-এ ব্যবহৃত কীটনাশকের একটি সাধারণ শ্রেণি) প্রতি ম্যালেরিয়ার বাহক মশার প্রতিরোধ ক্ষমতা উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পেয়েছে, যা এই অপরিহার্য হস্তক্ষেপের কার্যকারিতাকে হুমকির মুখে ফেলেছে। একই সময়ে, বিশ্বব্যাপী ম্যালেরিয়া নিয়ন্ত্রণে অগ্রগতি মন্থর হয়ে পড়েছে এবং ২০১৫ সাল থেকে বেশ কয়েকটি উচ্চ-ঝুঁকিপূর্ণ দেশে ম্যালেরিয়ার প্রকোপ বৃদ্ধি পেয়েছে। এই প্রবণতাগুলোই পাইরেথ্রয়েড প্রতিরোধের হুমকি মোকাবেলা, এই বোঝা কমাতে সাহায্য করা এবং উচ্চাভিলাষী বৈশ্বিক লক্ষ্যমাত্রা অর্জনের উদ্দেশ্যে নতুন প্রজন্মের উদ্ভাবনী আইটিএন পণ্য তৈরির প্রেরণা যুগিয়েছে।
বর্তমানে বাজারে তিন ধরনের নতুন প্রজন্মের কীটনাশকযুক্ত মশারি (ITN) পাওয়া যায়, যার প্রত্যেকটিতে একটি পাইরেথ্রয়েডের সাথে অন্য কোনো কীটনাশক বা সিনারজিস্টের সংমিশ্রণ রয়েছে, যা ম্যালেরিয়ার বাহক মশার মধ্যে পাইরেথ্রয়েড প্রতিরোধ ক্ষমতা কাটিয়ে উঠতে সক্ষম। সাম্প্রতিক বছরগুলোতে, শুধুমাত্র পাইরেথ্রয়েডযুক্ত প্রচলিত মশারির তুলনায় এই মশারিগুলোর মহামারী সংক্রান্ত কার্যকারিতা মূল্যায়ন করতে এবং বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থার (WHO) সুপারিশগুলোকে সমর্থন করার জন্য প্রয়োজনীয় প্রমাণ সরবরাহ করতে বেশ কয়েকটি ক্লাস্টার র‍্যান্ডমাইজড কন্ট্রোলড ট্রায়াল (RCT) পরিচালিত হয়েছে। পাইরেথ্রয়েডের সাথে পাইপেরোনিল বিউটোক্সাইড (PBO) মিশ্রিত মশারিগুলোই প্রথম WHO দ্বারা সুপারিশকৃত হয়। PBO হলো একটি সিনারজিস্ট যা মশার বিষমুক্তকারী এনজাইমগুলোকে বাধা দিয়ে পাইরেথ্রয়েডের কার্যকারিতা বাড়ায়। তানজানিয়া এবং উগান্ডায় পরিচালিত ক্লাস্টার র‍্যান্ডমাইজড কন্ট্রোলড ট্রায়ালে দুটি পণ্য (Olyset® Plus এবং PermaNet® 3.0) শুধুমাত্র পাইরেথ্রয়েডযুক্ত মশারির তুলনায় উন্নততর মহামারী সংক্রান্ত প্রভাব প্রদর্শন করার পর এই সুপারিশ করা হয়। তবে, পশ্চিম আফ্রিকায় পাইরেথ্রয়েড-পিবিও মশারির জনস্বাস্থ্যগত উপযোগিতা নির্ধারণের জন্য আরও তথ্যের প্রয়োজন, যেখানে তীব্র পাইরেথ্রয়েড প্রতিরোধ ক্ষমতা শুধুমাত্র পাইরেথ্রয়েডযুক্ত মশারির তুলনায় এর উপকারিতা হ্রাস করতে পারে।
কীটনাশক-প্রয়োগকৃত মশারির (ITN) কীটনাশক কার্যকারিতা সাধারণত বিভিন্ন এলাকা থেকে নির্দিষ্ট সময় অন্তর মশারি সংগ্রহ করে এবং পরীক্ষাগারে পোকামাকড়ের মধ্যে প্রজনন করা মশার প্রজাতি ব্যবহার করে জৈব-পরীক্ষার মাধ্যমে মূল্যায়ন করা হয়। যদিও এই পরীক্ষাগুলো সময়ের সাথে সাথে মশারির উপরিভাগে থাকা কীটনাশকের জৈব-উপলভ্যতা এবং কার্যকারিতা নির্ণয়ের জন্য উপযোগী, তবে এগুলো বিভিন্ন ধরনের পরবর্তী প্রজন্মের মশারির তুলনামূলক কার্যকারিতা সম্পর্কে সীমিত তথ্য প্রদান করে। কারণ, ব্যবহৃত পদ্ধতি এবং মশার প্রজাতিগুলোকে অবশ্যই মশারিতে থাকা কীটনাশকের কার্যপ্রণালীর সাথে খাপ খাইয়ে নিতে হয়। পরীক্ষামূলক কুঁড়েঘর পরীক্ষা (experimental hut test) একটি বিকল্প পদ্ধতি, যা ব্যবহারের সময় বন্য মশা এবং গৃহস্থালির মশারির মধ্যে প্রাকৃতিক মিথস্ক্রিয়ার অনুকরণে স্থায়িত্ব গবেষণায় কীটনাশক-প্রয়োগকৃত মশারির কার্যকারিতা তুলনামূলকভাবে মূল্যায়ন করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। প্রকৃতপক্ষে, মহামারী সংক্রান্ত তথ্যের জন্য কীটতাত্ত্বিক বিকল্প ব্যবহার করে সাম্প্রতিক মডেলিং গবেষণায় দেখা গেছে যে, এই পরীক্ষাগুলোতে পরিমাপ করা মশার মৃত্যুহার এবং খাদ্যগ্রহণের হার গুচ্ছভিত্তিক র‍্যান্ডমাইজড কন্ট্রোল ট্রায়ালে (RCT) ম্যালেরিয়ার ঘটনা ও প্রাদুর্ভাবের উপর কীটনাশক-প্রয়োগকৃত মশারির প্রভাব ভবিষ্যদ্বাণী করতে ব্যবহার করা যেতে পারে। সুতরাং, কুটির-ভিত্তিক পরীক্ষামূলক গবেষণা, যেখানে মাঠ থেকে সংগৃহীত কীটনাশক-প্রয়োগকৃত লিম্ফ নোডগুলিকে ক্লাস্টার আরসিটি-তে অন্তর্ভুক্ত করা হয়, তা তাদের প্রত্যাশিত জীবনকাল জুড়ে কীটনাশক-প্রয়োগকৃত লিম্ফ নোডগুলির তুলনামূলক জৈব-কার্যকারিতা এবং কীটনাশক স্থায়িত্ব সম্পর্কে মূল্যবান তথ্য প্রদান করতে পারে এবং এই গবেষণাগুলির মহামারী সংক্রান্ত ফলাফল ব্যাখ্যা করতে সহায়তা করতে পারে।
পরীক্ষামূলক কুঁড়েঘর পরীক্ষা হলো বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থা কর্তৃক সুপারিশকৃত একটি প্রমিত অনুকৃত মানব বসতি পরিবেশ, যা কীটনাশকযুক্ত মশারির কার্যকারিতা মূল্যায়নের জন্য ব্যবহৃত হয়। এই পরীক্ষাগুলো মশার বাহকদের বাস্তব জগতের সেই সংস্পর্শের পরিস্থিতিকে অনুকরণ করে, যা তারা বাড়ির মশারির সংস্পর্শে আসার সময় সম্মুখীন হয়। তাই, ব্যবহৃত মশারির প্রত্যাশিত কার্যকাল জুড়ে তার জৈবিক কার্যকারিতা মূল্যায়নের জন্য এটি একটি অত্যন্ত উপযুক্ত পদ্ধতি।
এই গবেষণায় পরীক্ষামূলক খামারবাড়িতে মাঠপর্যায়ে তিন ধরনের নতুন প্রজন্মের কীটনাশকযুক্ত মশারির (পারমানেট® ৩.০, রয়্যাল গার্ড® এবং ইন্টারসেপ্টর® জি২) কীটতাত্ত্বিক কার্যকারিতা মূল্যায়ন করা হয়েছে এবং সেগুলোকে একটি আদর্শ শুধু-পাইরেথ্রিনযুক্ত মশারির (ইন্টারসেপ্টর®) সাথে তুলনা করা হয়েছে। এই সমস্ত কীটনাশকযুক্ত মশারিগুলো রোগবাহক নিয়ন্ত্রণের জন্য বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থার (WHO) প্রাক-যোগ্যতা তালিকায় অন্তর্ভুক্ত। প্রতিটি মশারির বিস্তারিত বৈশিষ্ট্য নিচে দেওয়া হলো:
২০২০ সালের মার্চ মাসে, দক্ষিণ বেনিনের ঝু প্রিফেকচারের কুঁড়েঘর-ভিত্তিক গ্রামগুলিতে কুঁড়েঘরে পরীক্ষামূলক প্রয়োগের জন্য মাঠপর্যায়ে ব্যবহৃত মশারির একটি বৃহৎ আকারের বিতরণ অভিযান চালানো হয়েছিল। দ্বৈত কীটনাশক-প্রয়োগকৃত মশারির মহামারী সংক্রান্ত কার্যকারিতা মূল্যায়নের জন্য একটি ক্লাস্টার আরসিটি-র (RCT) মধ্যে অন্তর্ভুক্ত একটি স্থায়িত্ব পর্যবেক্ষণমূলক গবেষণার অংশ হিসাবে, কোভে, জাগনানাদো এবং উইনহি পৌরসভাগুলির দৈবচয়নে নির্বাচিত ক্লাস্টারগুলি থেকে ইন্টারসেপ্টর®, রয়্যাল গার্ড® এবং ইন্টারসেপ্টর® জি২ ​​(Interceptor®, Royal Guard®) মশারি নির্বাচন করা হয়েছিল। জিজা এবং বোহিকন টাউনশিপের নিকটবর্তী আভোকানজুন গ্রাম (৭°২০′ উত্তর, ১°৫৬′ পূর্ব) থেকে পারমানেট® ৩.০ (PermaNet® 3.0) মশারি সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং জাতীয় ম্যালেরিয়া নিয়ন্ত্রণ কর্মসূচির ২০২০ সালের গণ অভিযানের সময় আরসিটি ক্লাস্টারের মশারির সাথে একযোগে বিতরণ করা হয়েছিল। চিত্র ১-এ পরীক্ষামূলক কুঁড়েঘরের স্থানগুলির সাপেক্ষে সেইসব গবেষণা ক্লাস্টার/গ্রামের অবস্থান দেখানো হয়েছে যেখান থেকে বিভিন্ন ধরনের কীটনাশক-প্রয়োগকৃত মশারি সংগ্রহ করা হয়েছিল।
বিতরণের ১২, ২৪ এবং ৩৬ মাস পর বাড়িঘর থেকে সরিয়ে নেওয়ার পর Interceptor®, PermaNet® 3.0, Royal Guard® এবং Interceptor® G2 ITN-গুলোর কীটতাত্ত্বিক কার্যকারিতা তুলনা করার জন্য একটি পরীক্ষামূলক কুঁড়েঘর পরীক্ষা চালানো হয়েছিল। প্রতি বছর, মাঠে থাকা পুরোনো ITN-গুলোর কার্যকারিতা প্রতিটি ধরনের নতুন, অব্যবহৃত জাল এবং নেগেটিভ কন্ট্রোল হিসেবে ব্যবহৃত অপরিশোধিত জালের সাথে তুলনা করা হয়েছিল। প্রতি বছর, মাঠে পুরোনো হওয়া ITN-এর মোট ৫৪টি নমুনা এবং প্রতিটি ধরনের ৬টি নতুন ITN-কে ১ বা ২টি কুঁড়েঘর পরীক্ষায় দৈনিক ভিত্তিতে পরীক্ষা আবর্তনের মাধ্যমে পরীক্ষা করা হয়েছিল। প্রতিটি কুঁড়েঘর পরীক্ষার আগে, WHO-এর সুপারিশ অনুযায়ী প্রতিটি ধরনের পুরোনো মাঠের জালের গড় ছিদ্রতা সূচক পরিমাপ করা হয়েছিল। দৈনন্দিন ব্যবহারের ফলে সৃষ্ট ক্ষয়ক্ষতি অনুকরণ করার জন্য, WHO-এর সুপারিশ অনুসারে সমস্ত নতুন ITN এবং অপরিশোধিত কন্ট্রোল জালে ছয়টি ৪ x ৪ সেমি ছিদ্র করা হয়েছিল: প্রতিটি লম্বা পাশের প্যানেলে দুটি এবং প্রতিটি ছোট পাশের প্যানেলে একটি করে। কুঁড়েঘরের দেয়ালের উপরের কোণায় পেরেকে ছাদের টিনের কিনারা দড়ি দিয়ে বেঁধে মশারির জাল লাগানো হয়েছিল। প্রতিটি কুঁড়েঘরের পরীক্ষায় নিম্নলিখিত পদ্ধতিগুলো মূল্যায়ন করা হয়েছিল:
মাঠ পর্যায়ে ব্যবহৃত জালগুলো যে বছর সরানো হয়েছিল, সেই বছরেই পরীক্ষামূলক কুঁড়েঘরগুলোতে সেগুলোর মূল্যায়ন করা হয়েছিল। কুঁড়েঘরের পরীক্ষাগুলো একই স্থানে ২০২১ সালের মে থেকে সেপ্টেম্বর, ২০২২ সালের এপ্রিল থেকে জুন এবং ২০২৩ সালের মে থেকে জুলাই পর্যন্ত পরিচালিত হয়েছিল এবং যথাক্রমে ১২, ২৪ ও ৩৬ মাস পর জালগুলো সরানো হয়েছিল। প্রতিটি পরীক্ষা একটি সম্পূর্ণ ট্রিটমেন্ট চক্র (৯ সপ্তাহে ৫৪ রাত) ধরে চলেছিল, তবে ১২ মাসের ক্ষেত্রে মশার নমুনার আকার বাড়ানোর জন্য পরপর দুটি ট্রিটমেন্ট চক্র চালানো হয়েছিল। একটি ল্যাটিন স্কয়ার ডিজাইন অনুসরণ করে, কুঁড়েঘরের অবস্থানের প্রভাব নিয়ন্ত্রণের জন্য পরীক্ষামূলক কুঁড়েঘরগুলোর মধ্যে সাপ্তাহিক ভিত্তিতে ট্রিটমেন্ট আবর্তন করা হয়েছিল, অন্যদিকে স্বতন্ত্র পোষকের প্রতি মশার আকর্ষণের পার্থক্য নিয়ন্ত্রণের জন্য স্বেচ্ছাসেবকদের দৈনিক ভিত্তিতে আবর্তন করা হয়েছিল। সপ্তাহে ৬ দিন মশা সংগ্রহ করা হতো; ৭ম দিনে, পরবর্তী আবর্তন চক্রের আগে, উপদ্রব প্রতিরোধ করার জন্য কুঁড়েঘরগুলো পরিষ্কার ও বায়ুচলাচলের ব্যবস্থা করা হতো।
পাইরেথ্রয়েড-প্রতিরোধী অ্যানোফিলিস গ্যাম্বি মশার বিরুদ্ধে পরীক্ষামূলক কুঁড়েঘর পদ্ধতির কার্যকারিতার প্রাথমিক পরিমাপক এবং পরবর্তী প্রজন্মের আইটিএন-এর সাথে শুধুমাত্র পাইরেথ্রয়েডযুক্ত ইন্টারসেপ্টর® জালের তুলনা ছিল নিম্নরূপ:
পাইরেথ্রয়েড-প্রতিরোধী অ্যানোফিলিস গ্যাম্বি মশার বিরুদ্ধে পরীক্ষামূলক কুঁড়েঘর পদ্ধতির গৌণ কার্যকারিতা নিরূপণ বিন্দুগুলো নিম্নরূপ ছিল:
নিয়ন্ত্রণ (%) – চিকিৎসাবিহীন দলের তুলনায় চিকিৎসাকৃত দলে প্রবেশের হারের হ্রাস। এর গণনা নিম্নরূপ:
যেখানে Tu হলো চিকিৎসা-বিহীন নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর অন্তর্ভুক্ত মশার সংখ্যা, এবং Tt হলো চিকিৎসাকৃত গোষ্ঠীর অন্তর্ভুক্ত মশার সংখ্যা।
ঝরে পড়ার হার (%) – পরিচর্যার কারণে সম্ভাব্য অস্বস্তির ফলে ঝরে পড়ার হার, যা বারান্দা থেকে সংগৃহীত মশার সংখ্যার অনুপাতে প্রকাশ করা হয়।
রক্তচোষা দমন সহগ (%) হলো চিকিৎসাবিহীন নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় চিকিৎসাকৃত গোষ্ঠীতে রক্তচোষা মশার অনুপাতের হ্রাস। গণনা পদ্ধতিটি নিম্নরূপ: যেখানে Bfu হলো চিকিৎসাবিহীন নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীতে রক্তচোষা মশার অনুপাত, এবং Bft হলো চিকিৎসাকৃত গোষ্ঠীতে রক্তচোষা মশার অনুপাত।
প্রজনন ক্ষমতা হ্রাস (%) — চিকিৎসাবিহীন নিয়ন্ত্রিত দলের তুলনায় চিকিৎসাকৃত দলে প্রজননক্ষম মশার অনুপাতের হ্রাস। গণনা পদ্ধতিটি নিম্নরূপ: যেখানে Fu হলো চিকিৎসাবিহীন নিয়ন্ত্রিত দলের প্রজননক্ষম মশার অনুপাত, এবং Ft হলো চিকিৎসাকৃত দলের প্রজননক্ষম মশার অনুপাত।
সময়ের সাথে সাথে কোভে বাহক জনগোষ্ঠীর প্রতিরোধ ক্ষমতার পরিবর্তন পর্যবেক্ষণ করার জন্য, বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থা (WHO) প্রতিটি পরীক্ষামূলক কুটির ট্রায়ালের একই বছরে (২০২১, ২০২২, ২০২৩) ইন ভিট্রো এবং ভায়াল বায়োঅ্যাসে পরিচালনা করে। এর উদ্দেশ্য ছিল গবেষণাধীন কীটনাশকযুক্ত মশারিতে (ITN) সক্রিয় কীটনাশকের (AI) প্রতি সংবেদনশীলতা মূল্যায়ন করা এবং ফলাফলের ব্যাখ্যাকে তথ্যসমৃদ্ধ করা। ইন ভিট্রো গবেষণায়, এই কীটনাশকগুলোর প্রতি সংবেদনশীলতা মূল্যায়নের জন্য মশাগুলোকে আলফা-সাইপারমেথ্রিন (০.০৫%) এবং ডেল্টামেথ্রিন (০.০৫%) এর নির্দিষ্ট ঘনত্বে শোধিত ফিল্টার পেপার এবং সিএফপি (১০০ μg/বোতল) ও পিপিএফ (১০০ μg/বোতল) এর নির্দিষ্ট ঘনত্বে প্রলেপযুক্ত বোতলের সংস্পর্শে আনা হয়। পাইরেথ্রয়েড প্রতিরোধের তীব্রতা পরীক্ষা করার জন্য মশাগুলোকে আলফা-সাইপারমেথ্রিন এবং ডেল্টামেথ্রিনের ৫-গুণ (০.২৫%) এবং ১০-গুণ (০.৫০%) ভিন্ন ঘনত্বের সংস্পর্শে আনা হয়। অবশেষে, পাইরেথ্রয়েড প্রতিরোধে পিবিও সিনার্জি এবং সাইটোক্রোম পি৪৫০ মনোঅক্সিজিনেজ (পি৪৫০) ওভারএক্সপ্রেশনের অবদান মূল্যায়ন করার জন্য মশাগুলোকে আলফা-সাইপারমেথ্রিন (০.০৫%) ও ডেল্টামেথ্রিন (০.০৫%)-এর বিভিন্ন ঘনত্বের সংস্পর্শে এবং পিবিও (৪%)-এর সংস্পর্শে আনা হয়েছিল। ডব্লিউএইচও টিউব পরীক্ষার জন্য ব্যবহৃত ফিল্টার পেপারটি ইউনিভার্সিটি সাইন্স মালয়েশিয়া থেকে কেনা হয়েছিল। সিএফপি এবং পিপিএফ ব্যবহার করে ডব্লিউএইচও বায়োঅ্যাসে পরীক্ষার ভায়ালগুলো ডব্লিউএইচও-এর সুপারিশ অনুযায়ী প্রস্তুত করা হয়েছিল।
জৈব পরীক্ষার জন্য ব্যবহৃত মশাগুলোকে পরীক্ষামূলক কুঁড়েঘরের নিকটবর্তী প্রজনন ক্ষেত্র থেকে লার্ভা অবস্থায় সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং তারপর সেগুলোকে পূর্ণাঙ্গ মশায় পরিণত করা হয়। প্রতিটি নির্দিষ্ট সময়ে, প্রতি টিউব/বোতলে ৪টি পুনরাবৃত্তি এবং প্রায় ২৫টি মশা রেখে, কমপক্ষে ১০০টি মশাকে প্রতিটি ট্রিটমেন্টের অধীনে ৬০ মিনিটের জন্য রাখা হয়েছিল। পাইরেথ্রয়েড এবং সিএফপি প্রয়োগের জন্য ৩-৫ দিন বয়সী অনাহারী মশা ব্যবহার করা হয়েছিল, অন্যদিকে পিপিএফ প্রয়োগের জন্য ডিম্বোৎপাদনকে উদ্দীপিত করতে এবং মশার প্রজননের উপর পিপিএফ-এর প্রভাব মূল্যায়ন করতে ৫-৭ দিন বয়সী রক্তচোষা মশা ব্যবহার করা হয়েছিল। নিয়ন্ত্রক হিসেবে সিলিকন তেল-সিক্ত ফিল্টার পেপার, বিশুদ্ধ পিবিও (৪%), এবং অ্যাসিটোন-প্রলিপ্ত বোতল ব্যবহার করে সমান্তরালভাবে পরীক্ষা চালানো হয়েছিল। পরীক্ষা শেষে, মশাগুলোকে অপরিশোধিত পাত্রে স্থানান্তর করে ১০% (ওজন/আয়তন) গ্লুকোজ দ্রবণে ভেজানো তুলার সংস্পর্শে আনা হয়। পাইরেথ্রয়েড প্রয়োগের ২৪ ঘণ্টা পর এবং সিএফপি ও পিপিএফ প্রয়োগের পর ৭২ ঘণ্টা পর্যন্ত প্রতি ২৪ ঘণ্টা অন্তর মৃত্যুহার রেকর্ড করা হয়েছিল। PPF-এর প্রতি সংবেদনশীলতা মূল্যায়ন করার জন্য, বিলম্বিত মৃত্যুহার রেকর্ড করার পর PPF-এর সংস্পর্শে আসা জীবিত মশা এবং সংশ্লিষ্ট নেগেটিভ কন্ট্রোলগুলিকে ব্যবচ্ছেদ করা হয়েছিল, একটি যৌগিক অণুবীক্ষণ যন্ত্র ব্যবহার করে ডিম্বাশয়ের বিকাশ পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল, এবং ডিমের বিকাশের ক্রিস্টোফার্স পর্যায় [28, 30] অনুসারে উর্বরতা মূল্যায়ন করা হয়েছিল। যদি ডিমগুলি ক্রিস্টোফার্স পর্যায় V পর্যন্ত সম্পূর্ণরূপে বিকশিত হয়, তবে মশাগুলিকে উর্বর হিসাবে শ্রেণীবদ্ধ করা হয়েছিল, এবং যদি ডিমগুলি সম্পূর্ণরূপে বিকশিত না হয় এবং পর্যায় I–IV-তে থেকে যায়, তবে মশাগুলিকে বন্ধ্যা হিসাবে শ্রেণীবদ্ধ করা হয়েছিল।
বছরের প্রতিটি সময়ে, WHO সুপারিশে [22] উল্লেখিত স্থানগুলিতে নতুন এবং মাঠে ব্যবহৃত জাল থেকে 30 × 30 সেমি টুকরা কাটা হয়েছিল। কাটার পরে, জালগুলিতে লেবেল লাগানো হয়েছিল, অ্যালুমিনিয়াম ফয়েলে মোড়ানো হয়েছিল এবং কাপড়ের মধ্যে সক্রিয় কীটনাশকের প্রবেশ রোধ করার জন্য 4 ± 2 °C তাপমাত্রায় একটি রেফ্রিজারেটরে সংরক্ষণ করা হয়েছিল। এরপর জালগুলিকে তাদের কার্যকাল জুড়ে মোট সক্রিয় কীটনাশকের পরিমাণে পরিবর্তন পরিমাপ করার জন্য রাসায়নিক বিশ্লেষণের জন্য বেলজিয়ামের ওয়ালুন কৃষি গবেষণা কেন্দ্রে পাঠানো হয়েছিল। ব্যবহৃত বিশ্লেষণাত্মক পদ্ধতিগুলি (কীটনাশক বিশ্লেষণের জন্য আন্তর্জাতিক সহযোগী কমিটির সুপারিশকৃত পদ্ধতির উপর ভিত্তি করে) পূর্বে বর্ণনা করা হয়েছে [25, 31]।
পরীক্ষামূলক কুঁড়েঘর ট্রায়ালের ডেটার জন্য, প্রতিটি ট্রায়ালে প্রতিটি ট্রিটমেন্টের ক্ষেত্রে কুঁড়েঘরের বিভিন্ন প্রকোষ্ঠে থাকা জীবিত/মৃত, কামড়ানো/অকামড়ানো, এবং উর্বর/বন্ধ্যা মশার মোট সংখ্যা যোগ করে বিভিন্ন আনুপাতিক ফলাফল (৭২-ঘণ্টার মৃত্যুহার, কামড়, বহিঃপরজীবিতা, জালে আটকা পড়া, উর্বরতা) এবং তাদের সংশ্লিষ্ট ৯৫% কনফিডেন্স ইন্টারভ্যাল (সিআই) গণনা করা হয়েছিল। এই আনুপাতিক বাইনারি ফলাফলগুলোর জন্য ট্রিটমেন্টগুলোর মধ্যে পার্থক্য লজিস্টিক রিগ্রেশন ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল, অন্যদিকে গণনা-ভিত্তিক ফলাফলগুলোর জন্য পার্থক্য নেগেটিভ বাইনোমিয়াল রিগ্রেশন ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। যেহেতু প্রতি ১২ মাসে দুটি ট্রিটমেন্ট রোটেশন চক্র পরিচালিত হয়েছিল এবং কিছু ট্রিটমেন্ট একাধিক ট্রায়ালে পরীক্ষা করা হয়েছিল, তাই মশার অনুপ্রবেশ বিশ্লেষণগুলোকে প্রতিটি ট্রিটমেন্ট পরীক্ষার দিনের সংখ্যার সাথে সমন্বয় করা হয়েছিল। সমস্ত সময়কালের জন্য একটি একক অনুমান পেতে প্রতিটি ফলাফলের জন্য নতুন আইটিএন-ও বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ট্রিটমেন্টের প্রধান ব্যাখ্যামূলক চলক ছাড়াও, প্রতিটি মডেলে স্বতন্ত্র স্লিপার ও কুঁড়েঘরের আকর্ষণ, ঋতু, মশারির অবস্থা এবং অতিরিক্ত বিস্তারের পার্থক্যের কারণে সৃষ্ট তারতম্য নিয়ন্ত্রণের জন্য কুঁড়েঘর, স্লিপার, ট্রায়ালের সময়কাল, আইটিএন অ্যাপারচার ইনডেক্স এবং দিনকে ফিক্সড এফেক্ট হিসেবে অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছিল। মশার মৃত্যুহার এবং প্রজনন ক্ষমতার প্রাথমিক ফলাফলের উপর, শুধুমাত্র পাইরেথ্রয়েডযুক্ত জাল, ইন্টারসেপ্টর®-এর তুলনায় নতুন প্রজন্মের আইটিএন-এর প্রভাব অনুমান করার জন্য রিগ্রেশন বিশ্লেষণের মাধ্যমে অ্যাডজাস্টেড অডস রেশিও (ORs) এবং সংশ্লিষ্ট ৯৫% কনফিডেন্স ইন্টারভ্যাল তৈরি করা হয়েছে। প্রাথমিক এবং মাধ্যমিক ফলাফলগুলোর সমস্ত জোড়াভিত্তিক তুলনার ক্ষেত্রে, ৫% স্তরে পরিসংখ্যানগত তাৎপর্য নির্দেশকারী কম্প্যাক্ট লেটার নির্ধারণ করার জন্য মডেলগুলো থেকে প্রাপ্ত পি-ভ্যালুগুলোও ব্যবহার করা হয়েছে। সমস্ত রিগ্রেশন বিশ্লেষণ স্ট্যাটা ভার্সন ১৮-এ সম্পন্ন করা হয়েছে।
বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থার সুপারিশ অনুযায়ী, ইন ভিট্রো এবং বোতল বায়োঅ্যাসে-তে পর্যবেক্ষণকৃত মৃত্যুহার ও প্রজনন ক্ষমতার উপর ভিত্তি করে কোভিস বাহক জনগোষ্ঠীর সংবেদনশীলতা ব্যাখ্যা করা হয়েছিল। রাসায়নিক বিশ্লেষণের ফলাফল থেকে আইটিএন খণ্ডগুলিতে মোট সক্রিয় উপাদানের (AI) পরিমাণ জানা যায়, যা প্রতি বছর প্রতিটি নির্দিষ্ট সময়ে নতুন জালের তুলনায় মাঠে পুরোনো জালে সক্রিয় উপাদান ধারণের হার গণনা করতে ব্যবহৃত হয়েছিল। সমস্ত তথ্য প্রমিত ফর্মে হাতে লিখে রেকর্ড করা হয়েছিল এবং তারপর একটি মাইক্রোসফট এক্সেল ডেটাবেসে ডাবল-এন্ট্রি করা হয়েছিল।
বেনিনের স্বাস্থ্য মন্ত্রণালয়ের (নং ৬/৩০/এমএস/ডিসি/ডিআরএফএমটি/সিএনইআরএস/এসএ), লন্ডন স্কুল অফ হাইজিন অ্যান্ড ট্রপিক্যাল মেডিসিনের (এলএসএইচটিএম) (নং ১৬২৩৭) এবং বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থার (নং ইআরসি.০০০০৩১৫৩) নীতিশাস্ত্র কমিটিগুলো স্বেচ্ছাসেবকদের নিয়ে একটি পরীক্ষামূলক কুটির গবেষণা পরিচালনার অনুমোদন দিয়েছে। গবেষণায় অংশগ্রহণের পূর্বে সকল স্বেচ্ছাসেবকের কাছ থেকে লিখিত সম্মতিপত্র গ্রহণ করা হয়েছিল। ম্যালেরিয়ার ঝুঁকি কমাতে সকল স্বেচ্ছাসেবককে বিনামূল্যে কেমোপ্রোফাইলাক্সিস দেওয়া হয়েছিল এবং কোনো স্বেচ্ছাসেবকের জ্বরের উপসর্গ দেখা দিলে বা পরীক্ষামূলক পণ্যটির প্রতি কোনো বিরূপ প্রতিক্রিয়া হলে, তাকে পর্যবেক্ষণ করার জন্য পুরো গবেষণা চলাকালীন একজন নার্স দায়িত্বে ছিলেন।
পরীক্ষামূলক কুটিরগুলো থেকে প্রাপ্ত পূর্ণাঙ্গ ফলাফল, যেখানে প্রতিটি পরীক্ষামূলক দলের জন্য জীবিত/মৃত, অনাহারে থাকা/রক্তপানকারী এবং উর্বর/বন্ধ্যা মশার মোট সংখ্যার সারসংক্ষেপ ও বর্ণনামূলক পরিসংখ্যান রয়েছে, তা পরিপূরক উপাদান (সারণি S1) হিসেবে উপস্থাপন করা হয়েছে।
বেনিনের কোওয়াতে একটি পরীক্ষামূলক কুঁড়েঘরে, বন্য পাইরেথ্রয়েড-প্রতিরোধী অ্যানোফিলিস গ্যাম্বি মশার রক্তপান দমন করা হয়েছিল। কার্যকারিতার একটি একক অনুমান প্রদানের জন্য, পরীক্ষাগুলি থেকে অপরিশোধিত নিয়ন্ত্রণ এবং নতুন জালের তথ্য একত্রিত করা হয়েছিল। লজিস্টিক রিগ্রেশন বিশ্লেষণ অনুসারে, একই অক্ষরযুক্ত কলামগুলি ৫% স্তরে (p > ০.০৫) উল্লেখযোগ্যভাবে ভিন্ন ছিল না। ত্রুটি দণ্ডগুলি ৯৫% আত্মবিশ্বাস ব্যবধানকে প্রতিনিধিত্ব করে।
বেনিনের কোওয়াতে একটি পরীক্ষামূলক কুঁড়েঘরে প্রবেশকারী বুনো পাইরেথ্রয়েড-প্রতিরোধী অ্যানোফিলিস গ্যাম্বি মশার মৃত্যুহার। কার্যকারিতার একটি একক অনুমান প্রদানের জন্য, পরীক্ষাগুলি জুড়ে অপরিশোধিত নিয়ন্ত্রণ এবং নতুন জালের তথ্য একত্রিত করা হয়েছিল। লজিস্টিক রিগ্রেশন বিশ্লেষণ অনুসারে, একই অক্ষরযুক্ত কলামগুলি ৫% স্তরে (p > ০.০৫) উল্লেখযোগ্যভাবে ভিন্ন ছিল না। ত্রুটি দণ্ডগুলি ৯৫% আত্মবিশ্বাস ব্যবধানকে প্রতিনিধিত্ব করে।
অডস রেশিও নতুন প্রজন্মের মশারির সাথে শুধুমাত্র পাইরেথ্রয়েডযুক্ত মশারির তুলনায় মৃত্যুহারের পার্থক্য বর্ণনা করে। ডটেড লাইনটি ১-এর একটি অডস রেশিও নির্দেশ করে, যা মৃত্যুহারে কোনো পার্থক্য না থাকাকে বোঝায়। অডস রেশিও > ১ হলে নতুন প্রজন্মের মশারির ক্ষেত্রে মৃত্যুহার বেশি হয়। কার্যকারিতার একটি একক অনুমান তৈরি করার জন্য বিভিন্ন ট্রায়াল থেকে নতুন প্রজন্মের মশারির ডেটা একত্রিত করা হয়েছিল। এরর বারগুলো ৯৫% কনফিডেন্স ইন্টারভ্যাল নির্দেশ করে।
যদিও পরীক্ষিত সমস্ত কীটনাশক-প্রক্রিয়াজাত জালের মধ্যে ইন্টারসেপ্টর®-এর মৃত্যুহার ছিল সর্বনিম্ন, মাঠে ব্যবহারের ফলে এর পুরোনো হয়ে যাওয়া বাহকের মৃত্যুহারের উপর কোনো নেতিবাচক প্রভাব ফেলেনি। প্রকৃতপক্ষে, নতুন ইন্টারসেপ্টর®-এর ক্ষেত্রে মৃত্যুহার ছিল ১২%, যেখানে মাঠে পুরোনো হয়ে যাওয়া জালগুলো ১২ মাস (১৭%, p=০.০০৬) এবং ২৪ মাস (১৭%, p=০.০০৪) পর সামান্য উন্নতি দেখায় এবং ৩৬ মাস পর তা আবার নতুন জালের মতোই পর্যায়ে (১১%, p=০.০৫) ফিরে আসে। এর বিপরীতে, পরবর্তী প্রজন্মের কীটনাশক-প্রক্রিয়াজাত জালগুলো ব্যবহারের পর সময়ের সাথে সাথে মৃত্যুহার ধীরে ধীরে হ্রাস পেয়েছে। এই হ্রাস ইন্টারসেপ্টর® জি২-এর ক্ষেত্রে সবচেয়ে বেশি লক্ষণীয় ছিল, যেখানে নতুন জালের ক্ষেত্রে মৃত্যুহার ৫৮% থেকে কমে ১২ মাস পর ৩৬%-এ নেমে আসে (p < ০.০০১)।< ০.০০১), ২৪ মাসে ৩১% (পি< ০.০০১), এবং ৩৬ মাসে ২০% (পি< ০.০০১)। নতুন PermaNet® 3.0 এর ফলে মৃত্যুহার ৩৭% এ নেমে আসে, যা ১২ মাস পর উল্লেখযোগ্যভাবে কমে ২০% হয় (p < ০.০০১)।< ০.০০১), ২৪ মাসে ১৬% (পি< ০.০০১), এবং ৩৬ মাসে ১৮% (পি < ০.০০১), এবং ৩৬ মাসে ১৮% (পি < ০.০০১)।< ০.০০১)। রয়্যাল গার্ড®-এর ক্ষেত্রেও একই ধরনের প্রবণতা লক্ষ্য করা গেছে, যেখানে নতুন জালটির ফলে মৃত্যুহার ৩৩% হ্রাস পায় এবং ১২ মাস পর তা উল্লেখযোগ্যভাবে কমে ২১%-এ দাঁড়ায় (p < ০.০০১)।< ০.০০১), ২৪ মাসে ১৭% (পি< ০.০০১) এবং ৩৬ মাসে ১৫% (পি< ০.০০১)।
বেনিনের কোয়া-তে একটি পরীক্ষামূলক কুঁড়েঘরে প্রবেশকারী বন্য পাইরেথ্রয়েড-প্রতিরোধী অ্যানোফিলিস গ্যাম্বি মশার প্রজনন ক্ষমতার হ্রাস। কার্যকারিতার একটি একক অনুমান প্রদানের জন্য পরীক্ষাগুলি থেকে অপরিশোধিত নিয়ন্ত্রণ এবং নতুন জালের তথ্য একত্রিত করা হয়েছিল। লজিস্টিক রিগ্রেশন বিশ্লেষণ অনুসারে, একই অক্ষরযুক্ত বারগুলি ৫% স্তরে (p > ০.০৫) উল্লেখযোগ্যভাবে ভিন্ন ছিল না। ত্রুটি বারগুলি ৯৫% আত্মবিশ্বাস ব্যবধানকে প্রতিনিধিত্ব করে।
অডস রেশিও নতুন প্রজন্মের মশারির সাথে শুধুমাত্র পাইরেথ্রয়েডযুক্ত মশারির তুলনা করে প্রজনন ক্ষমতার পার্থক্য বর্ণনা করে। ডটেড লাইনটি ১-এর অনুপাতকে প্রতিনিধিত্ব করে, যা প্রজনন ক্ষমতায় কোনো পার্থক্য না থাকাকে বোঝায়। অডস রেশিও< ১ নতুন প্রজন্মের মশারির মাধ্যমে প্রজনন ক্ষমতা অধিক হ্রাসের ইঙ্গিত দেয়। কার্যকারিতার একটি একক অনুমান তৈরি করার জন্য নতুন প্রজন্মের মশারির ডেটা বিভিন্ন ট্রায়াল থেকে একত্রিত করা হয়েছিল। এরর বারগুলি ৯৫% কনফিডেন্স ইন্টারভাল উপস্থাপন করে।