উদ্ভিদ এবং রোগজীবাণু উপাদান
ইলিনয় বিশ্ববিদ্যালয়ের (বর্তমানে ইউসি ডেভিস-এ) ডঃ প্যাট ব্রাউন, সোরঘাম কনভার্সন পপুলেশন (এসসিপি) নামে পরিচিত একটি সোরঘাম অ্যাসোসিয়েশন ম্যাপিং জনসংখ্যা প্রদান করেছিলেন। এটি পূর্বে বর্ণনা করা হয়েছে এবং এটি মার্কিন পরিবেশে উদ্ভিদের বৃদ্ধি এবং বিকাশকে সহজতর করার জন্য ফটোপিরিয়ড-অসংবেদনশীলতা এবং ছোট আকারে রূপান্তরিত বিভিন্ন রেখার একটি সংগ্রহ। এই গবেষণায় এই জনসংখ্যার 510টি লাইন ব্যবহার করা হয়েছিল যদিও খারাপ অঙ্কুরোদগম এবং অন্যান্য মান নিয়ন্ত্রণ সমস্যার কারণে, তিনটি বৈশিষ্ট্যের বিশ্লেষণে সমস্ত লাইন ব্যবহার করা হয়নি। অবশেষে 345টি লাইনের ডেটা চিটিন প্রতিক্রিয়া বিশ্লেষণের জন্য, 472টি লাইন flg22 প্রতিক্রিয়ার জন্য এবং 456টি TLS প্রতিরোধের জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল।বি. কুকেইLSLP18 স্ট্রেনটি আরকানসাস বিশ্ববিদ্যালয়ের ডঃ বার্ট ব্লুমের কাছ থেকে প্রাপ্ত হয়েছিল।
MAMP প্রতিক্রিয়া পরিমাপ
এই গবেষণায় দুটি ভিন্ন MAMP ব্যবহার করা হয়েছে flg22, (Genscript catalog# RP19986), এবং chitin। গ্রিনহাউসে মাটি (33% সানশাইন রেডি-আর্থ প্রো গ্রোয়িং মিক্স) ভরা সমতলের উপর স্থাপন করা সন্নিবেশে জোয়ার গাছ জন্মানো হয়েছিল। সংগ্রহের দিন অতিরিক্ত পাতার আর্দ্রতা এড়াতে নমুনা সংগ্রহের আগের দিন গাছগুলিতে জল দেওয়া হয়েছিল।
লাইনগুলি এলোমেলোভাবে তৈরি করা হয়েছিল এবং লজিস্টিক কারণে, 60টি লাইনের ব্যাচে রোপণ করা হয়েছিল। প্রতিটি লাইনের জন্য, তিনটি 'পাত্র' রোপণ করা হয়েছিল প্রতি লাইনে দুটি করে বীজ সহ। পূর্ববর্তী ব্যাচটি প্রক্রিয়াজাত করার সাথে সাথে পরবর্তী ব্যাচগুলি রোপণ করা হয়েছিল যতক্ষণ না পুরো জনসংখ্যা মূল্যায়ন করা হয়। উভয় MAMP-এর জন্য দুটি পরীক্ষামূলক রান পরিচালিত হয়েছিল, দুটি রানের প্রতিটিতে জিনোটাইপ পুনরায় এলোমেলোভাবে করা হয়েছিল।
পূর্বে বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে ROS পরীক্ষা করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, প্রতিটি লাইনের জন্য, 3টি ভিন্ন টবে ছয়টি বীজ রোপণ করা হয়েছিল। ফলস্বরূপ চারা থেকে, অভিন্নতার ভিত্তিতে তিনটি নির্বাচন করা হয়েছিল। যে চারাগুলি অস্বাভাবিক দেখাচ্ছিল বা বেশিরভাগের চেয়ে উল্লেখযোগ্যভাবে লম্বা বা ছোট ছিল সেগুলি ব্যবহার করা হয়নি। 15 দিন বয়সী তিনটি ভিন্ন জোয়ার গাছের চতুর্থ পাতার প্রশস্ত অংশ থেকে 3 মিমি ব্যাসের চারটি পাতার ডিস্ক কেটে নেওয়া হয়েছিল। দুটি গাছের প্রতিটি পাতার একটি ডিস্ক এবং একটি গাছের দুটি ডিস্ক, দ্বিতীয় ডিস্কটি জল নিয়ন্ত্রণে পরিণত হয়েছিল (নীচে দেখুন)। ডিস্কগুলিকে পৃথকভাবে 50 μl H20-তে একটি কালো 96-ওয়েল প্লেটে ভাসানো হয়েছিল, আলোর সংস্পর্শ এড়াতে একটি অ্যালুমিনিয়াম সিল দিয়ে সিল করা হয়েছিল এবং রাতারাতি ঘরের তাপমাত্রায় রাখা হয়েছিল। পরের দিন সকালে 2 মিলিগ্রাম/মিলি কেমিলুমিনেসেন্ট প্রোব L-012 (ওয়াকো, ক্যাটালগ # 120-04891), 2 মিলিগ্রাম/মিলি হর্সরাডিশ পেরোক্সিডেস (টাইপ VI-A, সিগমা-অ্যালড্রিচ, ক্যাটালগ # P6782), এবং 100 মিলিগ্রাম/মিলি চিটিন বা 2 μM Flg22 ব্যবহার করে একটি বিক্রিয়া দ্রবণ তৈরি করা হয়েছিল। এই বিক্রিয়া দ্রবণের 50 μl চারটি কূপের মধ্যে তিনটিতে যোগ করা হয়েছিল। চতুর্থ কূপটি ছিল একটি মক কন্ট্রোল, যেখানে MAMP বাদ দিয়ে বিক্রিয়া দ্রবণ যোগ করা হয়েছিল। প্রতিটি প্লেটে কেবল জল ধারণকারী চারটি খালি কূপও অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছিল।
বিক্রিয়ার দ্রবণ যোগ করার পর, SynergyTM 2 মাল্টি-ডিটেকশন মাইক্রোপ্লেট রিডার (BioTek) ব্যবহার করে প্রতি 2 মিনিট অন্তর 1 ঘন্টা ধরে আলোকসজ্জা পরিমাপ করা হয়েছিল। এই 1 ঘন্টার মধ্যে প্লেট রিডার প্রতি 2 মিনিট অন্তর আলোকসজ্জা পরিমাপ করে। প্রতিটি কূপের মান দেওয়ার জন্য সমস্ত 31টি রিডিংয়ের যোগফল গণনা করা হয়েছিল। প্রতিটি জিনোটাইপের জন্য MAMP প্রতিক্রিয়ার আনুমানিক মান গণনা করা হয়েছিল (তিনটি পরীক্ষামূলক কূপের গড় আলোকসজ্জা মান - মক ওয়েল মান) - গড় ফাঁকা কূপের মান বিয়োগ করে। ফাঁকা কূপের মান ধারাবাহিকভাবে শূন্যের কাছাকাছি ছিল।
পাতার চাকতিনিকোটিয়ানা বেন্থামিয়ানামান নিয়ন্ত্রণের উদ্দেশ্যে প্রতিটি ৯৬-ওয়েল প্লেটে নিয়ন্ত্রণ হিসেবে একটি উচ্চ প্রতিক্রিয়াশীল সোরঘাম লাইন (SC0003), এবং একটি নিম্ন প্রতিক্রিয়াশীল সোরঘাম লাইন (PI 6069) অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছিল।
বি. কুকেইইনোকুলাম প্রস্তুতি এবং ইনোকুলেশন
বি. কুকেইপূর্বে বর্ণিত পদ্ধতিতে ইনোকুলাম প্রস্তুত করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, জোয়ারের দানা তিন দিন জলে ভিজিয়ে রাখা হয়েছিল, ধুয়ে ফেলা হয়েছিল, 1 লিটার শঙ্কুযুক্ত ফ্লাস্কে স্কুপ করা হয়েছিল এবং 15psi এবং 121 °C তাপমাত্রায় এক ঘন্টার জন্য অটোক্লেভ করা হয়েছিল। এরপর দানাগুলিকে একটি তাজা কালচার থেকে প্রায় 5 মিলি ম্যাসেরেটেড মাইসেলিয়া দিয়ে টিকা দেওয়া হয়েছিল।বি. কুকেইLSLP18 কে আলাদা করে ঘরের তাপমাত্রায় 2 সপ্তাহের জন্য রেখে দেওয়া হয়, প্রতি 3 দিন অন্তর বোতলগুলি ঝাঁকিয়ে। 2 সপ্তাহ পর, ছত্রাক আক্রান্ত জোয়ারের দানাগুলিকে বাতাসে শুকানো হয় এবং তারপর 4 ডিগ্রি সেলসিয়াসে জমিতে টিকা না দেওয়া পর্যন্ত সংরক্ষণ করা হয়। পুরো পরীক্ষার জন্য একই ইনোকুলাম ব্যবহার করা হত এবং প্রতি বছর তাজা করা হত। টিকা দেওয়ার জন্য, 4-5 সপ্তাহ বয়সী জোয়ার গাছের ঘূর্ণিতে 6-10টি আক্রান্ত দানা স্থাপন করা হত। এই ছত্রাক থেকে উৎপন্ন স্পোরগুলি এক সপ্তাহের মধ্যে তরুণ জোয়ারের গাছগুলিতে সংক্রমণ শুরু করে।
বীজ প্রস্তুতি
জমিতে রোপণের আগে, জোয়ার বীজ ছত্রাকনাশক, কীটনাশক এবং সেফেনার মিশ্রণ দিয়ে শোধন করা হয়েছিল যার মধ্যে ছিল প্রায় ১% স্পিরাটো ৪৮০ এফএস ছত্রাকনাশক, ৪% সেব্রিং ৪৮০ এফএস ছত্রাকনাশক, ৩% সরপ্রো ৯৪০ ইএস বীজ সেফেনার। তারপর বীজগুলিকে ৩ দিন ধরে বাতাসে শুকানো হয়েছিল যা বীজের চারপাশে এই মিশ্রণের একটি পাতলা আবরণ তৈরি করেছিল। সেফেনারটি উত্থানের আগে ভেষজনাশক ডুয়েল ম্যাগনাম ব্যবহারের অনুমতি দেয়।
লক্ষ্য পাতার দাগ প্রতিরোধের মূল্যায়ন
ক্লেটন, এনসি-তে অবস্থিত সেন্ট্রাল ক্রপস রিসার্চ স্টেশনে ১৪-১৫ জুন ২০১৭ এবং ২০ জুন ২০১৮ তারিখে একটি এলোমেলোভাবে সম্পূর্ণ ব্লক ডিজাইনে এসসিপি রোপণ করা হয়েছিল, প্রতিটি ক্ষেত্রে দুটি পরীক্ষামূলক প্রতিলিপি ব্যবহার করা হয়েছিল। প্রতি প্লটে ১০টি বীজ ব্যবহার করে ০.৯ মিটার সারির প্রস্থ সহ ১.৮ মিটার একক সারিতে পরীক্ষা-নিরীক্ষা করা হয়েছিল। প্রান্তের প্রভাব প্রতিরোধ করার জন্য প্রতিটি পরীক্ষার পরিধির চারপাশে দুটি সীমানা সারি রোপণ করা হয়েছিল। ২০ জুলাই, ২০১৭ এবং ২০ জুলাই, ২০১৮ তারিখে পরীক্ষাগুলি টিকা দেওয়া হয়েছিল, যেখানে জোয়ার গাছগুলি বৃদ্ধির পর্যায়ে ছিল ৩য়। রেটিং এক থেকে নয়টি স্কেলে নেওয়া হয়েছিল, যেখানে রোগের কোনও লক্ষণ না দেখানো গাছগুলিকে নয়টি হিসাবে স্কোর করা হয়েছিল এবং সম্পূর্ণ মৃত গাছগুলিকে একটি হিসাবে স্কোর করা হয়েছিল। ২০১৭ সালে দুটি রেটিং নেওয়া হয়েছিল এবং ২০১৮ সালে চারটি রিডিং প্রতি বছর টিকা দেওয়ার দুই সপ্তাহ পরে শুরু হয়েছিল। sAUDPC (রোগের অগ্রগতি বক্ররেখার অধীনে মানসম্মত এলাকা) পূর্বে বর্ণিত হিসাবে গণনা করা হয়েছিল।
পোস্টের সময়: এপ্রিল-০১-২০২১