উদ্ভিদ এবং রোগজীবাণু উপকরণ
ইলিনয় বিশ্ববিদ্যালয়ের (বর্তমানে ইউসি ডেভিস-এ কর্মরত) ডঃ প্যাট ব্রাউন সর্গাম কনভার্সন পপুলেশন (এসসিপি) নামে পরিচিত একটি সর্গাম অ্যাসোসিয়েশন ম্যাপিং পপুলেশন সরবরাহ করেছিলেন। এটি পূর্বে বর্ণিত হয়েছে এবং এটি মার্কিন যুক্তরাষ্ট্রের পরিবেশে উদ্ভিদের বৃদ্ধি ও বিকাশ সহজ করার জন্য আলোককাল-অসংবেদনশীলতা এবং ছোট আকারে রূপান্তরিত বিভিন্ন লাইনের একটি সংগ্রহ। এই গবেষণায় এই পপুলেশন থেকে ৫১০টি লাইন ব্যবহার করা হয়েছিল, যদিও দুর্বল অঙ্কুরোদগম এবং অন্যান্য গুণমান নিয়ন্ত্রণ সমস্যার কারণে তিনটি বৈশিষ্ট্যের বিশ্লেষণে সব লাইন ব্যবহার করা সম্ভব হয়নি। পরিশেষে, কাইটিন প্রতিক্রিয়ার বিশ্লেষণের জন্য ৩৪৫টি লাইন, flg22 প্রতিক্রিয়ার জন্য ৪৭২টি লাইন এবং টিএলএস প্রতিরোধের জন্য ৪৫৬টি লাইনের ডেটা ব্যবহার করা হয়েছিল।বি. কুকিLSLP18 স্ট্রেইনটি আরকানসাস বিশ্ববিদ্যালয়ের ডঃ বার্ট ব্লুমের কাছ থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল।
MAMP প্রতিক্রিয়া পরিমাপ
এই গবেষণায় দুটি ভিন্ন MAMP ব্যবহার করা হয়েছে: flg22 (জেনস্ক্রিপ্ট ক্যাটালগ# RP19986) এবং কাইটিন। গ্রিনহাউসে মাটি (৩৩% সানশাইন রেডি-আর্থ প্রো গ্রোয়িং মিক্স) ভরা ফ্ল্যাটের উপর রাখা ইনসার্টে জোয়ার গাছ লাগানো হয়েছিল। নমুনা সংগ্রহের দিন পাতায় অতিরিক্ত আর্দ্রতা এড়ানোর জন্য নমুনা সংগ্রহের আগের দিন গাছগুলিতে জল দেওয়া হয়েছিল।
লাইনগুলোকে দৈবচয়নের মাধ্যমে সাজানো হয়েছিল এবং লজিস্টিক কারণে ৬০টি লাইনের ব্যাচে রোপণ করা হয়েছিল। প্রতিটি লাইনের জন্য, তিনটি 'টবে' প্রতি লাইনে দুটি করে বীজ রোপণ করা হয়েছিল। পূর্ববর্তী ব্যাচটি প্রক্রিয়াজাত হওয়ার সাথে সাথেই পরবর্তী ব্যাচগুলো রোপণ করা হয়েছিল, যতক্ষণ না সম্পূর্ণ পপুলেশনটির মূল্যায়ন সম্পন্ন হয়। উভয় MAMP-এর জন্য দুটি পরীক্ষামূলক রান পরিচালনা করা হয়েছিল এবং এই দুটি রানের প্রতিটিতেই জিনোটাইপগুলোকে পুনরায় দৈবচয়নের মাধ্যমে সাজানো হয়েছিল।
ROS পরীক্ষাগুলো পূর্বে বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, প্রতিটি লাইনের জন্য ছয়টি করে বীজ তিনটি ভিন্ন টবে রোপণ করা হয়েছিল। উৎপন্ন চারাগাছগুলো থেকে, সাদৃশ্যের ভিত্তিতে তিনটি নির্বাচন করা হয়েছিল। যে চারাগাছগুলো দেখতে অস্বাভাবিক ছিল অথবা অধিকাংশের চেয়ে উল্লেখযোগ্যভাবে লম্বা বা খাটো ছিল, সেগুলো ব্যবহার করা হয়নি। তিনটি ভিন্ন ১৫-দিন বয়সী জোয়ার গাছের চতুর্থ পাতার সবচেয়ে চওড়া অংশ থেকে ৩ মিমি ব্যাসের চারটি পাতার চাকতি কেটে নেওয়া হয়েছিল। দুটি গাছ থেকে প্রতি পাতা থেকে একটি করে চাকতি এবং একটি গাছ থেকে দুটি চাকতি নেওয়া হয়েছিল, যেখানে দ্বিতীয় চাকতিটি ওয়াটার কন্ট্রোল (জল নিয়ন্ত্রক) হিসেবে ব্যবহৃত হয় (নিচে দেখুন)। চাকতিগুলোকে আলাদাভাবে একটি কালো ৯৬-ওয়েল প্লেটে ৫০ µl H2O-এর উপর ভাসানো হয়েছিল, আলোর সংস্পর্শ এড়ানোর জন্য একটি অ্যালুমিনিয়াম সিল দিয়ে মুখ বন্ধ করা হয়েছিল এবং সারারাত ঘরের তাপমাত্রায় রাখা হয়েছিল। পরদিন সকালে ২ মিগ্রা/মিলি কেমিলুমিনেসেন্ট প্রোব এল-০১২ (ওয়াকো, ক্যাটালগ # ১২০-০৪৮৯১), ২ মিগ্রা/মিলি হর্সরেডিশ পারঅক্সিডেজ (টাইপ VI-A, সিগমা-অলড্রিচ, ক্যাটালগ # P৬৭৮২), এবং ১০০ মিগ্রা/মিলি কাইটিন অথবা ২ মাইক্রোমোলার Flg22 ব্যবহার করে একটি বিক্রিয়া দ্রবণ তৈরি করা হয়েছিল। এই বিক্রিয়া দ্রবণের ৫০ মাইক্রোলিটার চারটি ওয়েলের মধ্যে তিনটিতে যোগ করা হয়েছিল। চতুর্থ ওয়েলটি ছিল একটি মক কন্ট্রোল, যেটিতে MAMP ছাড়া বিক্রিয়া দ্রবণটি যোগ করা হয়েছিল। প্রতিটি প্লেটে শুধুমাত্র জলযুক্ত চারটি ব্ল্যাঙ্ক ওয়েলও অন্তর্ভুক্ত ছিল।
বিক্রিয়া দ্রবণ যোগ করার পর, সিনার্জি™ ২ মাল্টি-ডিটেকশন মাইক্রোপ্লেট রিডার (বায়োটেক) ব্যবহার করে ১ ঘন্টা ধরে প্রতি ২ মিনিট অন্তর লুমিনেসেন্স পরিমাপ করা হয়েছিল। এই ১ ঘন্টার সময় প্লেট রিডারটি প্রতি ২ মিনিট অন্তর লুমিনেসেন্স পরিমাপ গ্রহণ করে। প্রতিটি ওয়েলের মান বের করার জন্য মোট ৩১টি রিডিংয়ের যোগফল গণনা করা হয়েছিল। প্রতিটি জিনোটাইপের জন্য MAMP প্রতিক্রিয়ার আনুমানিক মান গণনা করা হয়েছিল (তিনটি পরীক্ষামূলক ওয়েলের গড় লুমিনেসেন্স মান—মক ওয়েলের মান) - বিয়োগ ব্ল্যাঙ্ক ওয়েলের গড় মান হিসাবে। ব্ল্যাঙ্ক ওয়েলের মানগুলো ধারাবাহিকভাবে শূন্যের কাছাকাছি ছিল।
পাতার চাকতিনিকোটিয়ানা বেন্থামিয়ানাগুণমান নিয়ন্ত্রণের উদ্দেশ্যে প্রতিটি ৯৬-ওয়েল প্লেটে কন্ট্রোল হিসেবে একটি উচ্চ প্রতিক্রিয়াশীল জোয়ারের জাত (SC0003) এবং একটি নিম্ন প্রতিক্রিয়াশীল জোয়ারের জাত (PI 6069)-ও অন্তর্ভুক্ত করা হয়েছিল।
বি. কুকিইনোকুলাম প্রস্তুতি এবং ইনোকুলেশন
বি. কুকিপূর্বে বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে ইনোকুলাম প্রস্তুত করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, জোয়ারের দানা তিন দিন ধরে জলে ভিজিয়ে রেখে, ধুয়ে ১ লিটারের শঙ্কু আকৃতির ফ্লাস্কে তুলে নেওয়া হয়েছিল এবং ১৫ পিএসআই চাপ ও ১২১ ডিগ্রি সেলসিয়াস তাপমাত্রায় এক ঘণ্টা ধরে অটোক্লেভ করা হয়েছিল। এরপর দানাগুলোকে একটি তাজা কালচার থেকে নেওয়া প্রায় ৫ মিলি ম্যাসিলেটেড মাইসেলিয়া দিয়ে ইনোকুলেট করা হয়েছিল।বি. কুকিLSLP18 আইসোলেটগুলোকে ঘরের তাপমাত্রায় ২ সপ্তাহের জন্য রাখা হয়েছিল এবং প্রতি ৩ দিন পর পর ফ্লাস্কগুলো ঝাঁকানো হয়েছিল। ২ সপ্তাহ পর, ছত্রাক-আক্রান্ত জোয়ারের দানাগুলোকে বাতাসে শুকানো হয়েছিল এবং তারপর মাঠে ইনোকুলেশনের আগ পর্যন্ত ৪ °C তাপমাত্রায় সংরক্ষণ করা হয়েছিল। সম্পূর্ণ পরীক্ষাটির জন্য একই ইনোকুলাম ব্যবহার করা হয়েছিল এবং প্রতি বছর তা নতুন করে তৈরি করা হতো। ইনোকুলেশনের জন্য, ৪-৫ সপ্তাহ বয়সী জোয়ার গাছের শীষে ৬-১০টি আক্রান্ত দানা রাখা হয়েছিল। এই ছত্রাকগুলো থেকে উৎপন্ন স্পোর এক সপ্তাহের মধ্যে কচি জোয়ার গাছগুলোতে সংক্রমণ শুরু করে।
বীজ প্রস্তুতি
জমিতে রোপণের আগে জোয়ারের বীজকে একটি ছত্রাকনাশক, কীটনাশক এবং সেফেনার মিশ্রণ দিয়ে শোধন করা হয়েছিল, যেটিতে ছিল প্রায় ১% স্পাইরাটো ৪৮০ এফএস ছত্রাকনাশক, ৪% সেব্রিং ৪৮০ এফএস ছত্রাকনাশক এবং ৩% সরপ্রো ৯৪০ ইএস বীজ সেফেনার। এরপর বীজগুলোকে ৩ দিন ধরে বাতাসে শুকানো হয়েছিল, যার ফলে বীজের চারপাশে এই মিশ্রণের একটি পাতলা আস্তরণ তৈরি হয়। এই সেফেনারটি অঙ্কুরোদগমের পূর্ববর্তী শোধন হিসেবে ডুয়াল ম্যাগনাম নামক আগাছানাশক ব্যবহারের সুযোগ করে দেয়।
টার্গেট লিফ স্পট প্রতিরোধের মূল্যায়ন
এসসিপি (SCP) ২০১৭ সালের ১৪-১৫ জুন এবং ২০১৮ সালের ২০ জুন তারিখে ক্লেটন, এনসি-তে অবস্থিত সেন্ট্রাল ক্রপস রিসার্চ স্টেশনে একটি র্যান্ডমাইজড কমপ্লিট ব্লক ডিজাইনে রোপণ করা হয়েছিল, যেখানে প্রতিটি ক্ষেত্রে দুটি পরীক্ষামূলক পুনরাবৃত্তি ছিল। পরীক্ষাগুলো ১.৮ মিটার একক সারিতে এবং ০.৯ মিটার সারির প্রস্থে প্রতি প্লটে ১০টি করে বীজ ব্যবহার করে রোপণ করা হয়েছিল। প্রান্তিক প্রভাব (edge effects) প্রতিরোধ করার জন্য প্রতিটি পরীক্ষার পরিধির চারপাশে দুটি বর্ডার সারি রোপণ করা হয়েছিল। ২০১৭ সালের ২০ জুলাই এবং ২০১৮ সালের ২০ জুলাই তারিখে পরীক্ষাগুলোতে ইনোকুলেশন করা হয়েছিল, যে সময়ে জোয়ার গাছগুলো বৃদ্ধির তৃতীয় পর্যায়ে ছিল। রেটিংগুলো এক থেকে নয় স্কেলে নেওয়া হয়েছিল, যেখানে রোগের কোনো লক্ষণ না থাকা গাছগুলোকে নয় এবং সম্পূর্ণ মৃত গাছগুলোকে এক নম্বর দেওয়া হয়েছিল। ২০১৭ সালে দুটি এবং ২০১৮ সালে চারটি রেটিং নেওয়া হয়েছিল, যা প্রতি বছর ইনোকুলেশনের দুই সপ্তাহ পর থেকে শুরু হয়েছিল। sAUDPC (স্ট্যান্ডার্ডাইজড এরিয়া আন্ডার ডিজিজ প্রগ্রেশন কার্ভ) পূর্বে বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে গণনা করা হয়েছিল।
পোস্ট করার সময়: ০১-এপ্রিল-২০২১
