ক্ল্যাথ্রিয়া স্পিসিস স্পঞ্জ থেকে বিচ্ছিন্ন এন্টারোব্যাক্টার ক্লোয়াকি এসজে২ দ্বারা উৎপাদিত মাইক্রোবিয়াল বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের লার্ভানাশক ও উইপোকা-রোধী কার্যকারিতা।

কৃত্রিম কীটনাশকের ব্যাপক ব্যবহারের ফলে প্রতিরোধী জীবাণুর উদ্ভব, পরিবেশের অবক্ষয় এবং মানব স্বাস্থ্যের ক্ষতিসহ বহুবিধ সমস্যা দেখা দিয়েছে। তাই, নতুন অণুজীবকীটনাশকমানব স্বাস্থ্য ও পরিবেশের জন্য নিরাপদ এমন বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের জরুরি প্রয়োজন রয়েছে। এই গবেষণায়, মশা (কিউলেক্স কুইনকুইফ্যাসিয়েটাস) এবং উইপোকার (ওডোন্টোটার্মেস ওবেসাস) লার্ভার উপর বিষাক্ততা মূল্যায়নের জন্য এন্টারোব্যাক্টার ক্লোয়াকি এসজে২ (Enterobacter cloacae SJ2) দ্বারা উৎপাদিত র‍্যামনোলিপিড বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট ব্যবহার করা হয়েছে। ফলাফলে দেখা গেছে যে, বিভিন্ন ট্রিটমেন্টের মধ্যে মৃত্যুহার ডোজের উপর নির্ভরশীল ছিল। একটি নন-লিনিয়ার রিগ্রেশন কার্ভ ফিটিং পদ্ধতি ব্যবহার করে উইপোকা এবং মশার লার্ভার জন্য বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের ৪৮ ঘণ্টার এলসি৫০ (LC50) (৫০% প্রাণঘাতী ঘনত্ব) মান নির্ধারণ করা হয়েছে। ফলাফলে দেখা গেছে যে, বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের লার্ভানাশক এবং উইপোকা-প্রতিরোধী কার্যকলাপের ৪৮-ঘণ্টার এলসি৫০ মান (৯৫% কনফিডেন্স ইন্টারভাল) ছিল যথাক্রমে ২৬.৪৯ মিলিগ্রাম/লিটার (পরিসর ২৫.৪০ থেকে ২৭.৫৭) এবং ৩৩.৪৩ মিলিগ্রাম/লিটার (পরিসর ৩১.০৯ থেকে ৩৫.৬৮)। হিস্টোপ্যাথলজিক্যাল পরীক্ষা অনুসারে, বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট প্রয়োগের ফলে লার্ভা এবং উইপোকার অর্গানেল টিস্যুগুলোর মারাত্মক ক্ষতি হয়েছে। এই গবেষণার ফলাফল ইঙ্গিত দেয় যে, Enterobacter cloacae SJ2 দ্বারা উৎপাদিত মাইক্রোবিয়াল বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট Cx নিয়ন্ত্রণের জন্য একটি চমৎকার এবং সম্ভাব্য কার্যকর উপকরণ। quinquefasciatus এবং O. obesus।
ক্রান্তীয় দেশগুলিতে প্রচুর সংখ্যক মশাবাহিত রোগ দেখা যায়¹। মশাবাহিত রোগের প্রাসঙ্গিকতা ব্যাপক। প্রতি বছর ম্যালেরিয়ায় ৪ লক্ষেরও বেশি মানুষ মারা যায় এবং কিছু প্রধান শহরে ডেঙ্গু, ইয়েলো ফিভার, চিকুনগুনিয়া এবং জিকার মতো মারাত্মক রোগের মহামারী দেখা যাচ্ছে।² বিশ্বব্যাপী প্রতি ছয়টি সংক্রমণের মধ্যে একটির জন্য বাহক-বাহিত রোগ দায়ী, যার মধ্যে মশার মাধ্যমেই সবচেয়ে বেশি সংক্রমণ ঘটে।³,⁴ কিউলেক্স, অ্যানোফিলিস এবং এডিস হলো তিনটি মশার প্রজাতি যা রোগ সংক্রমণের সাথে সবচেয়ে বেশি জড়িত।⁵ এডিস ইজিপ্টি মশার মাধ্যমে সংক্রামিত ডেঙ্গু জ্বরের প্রাদুর্ভাব গত দশকে বৃদ্ধি পেয়েছে এবং এটি জনস্বাস্থ্যের জন্য একটি উল্লেখযোগ্য হুমকি হয়ে দাঁড়িয়েছে।⁴,⁷,⁸ বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থা (WHO) অনুসারে, বিশ্বের ৪০% এরও বেশি মানুষ ডেঙ্গু জ্বরের ঝুঁকিতে রয়েছে এবং ১০০টিরও বেশি দেশে প্রতি বছর ৫০-১০০ মিলিয়ন নতুন রোগী শনাক্ত হয়।⁹,¹⁰,¹¹ বিশ্বজুড়ে ডেঙ্গু জ্বরের প্রকোপ বৃদ্ধি পাওয়ায় এটি একটি প্রধান জনস্বাস্থ্য সমস্যায় পরিণত হয়েছে¹²,¹³,¹⁴। অ্যানোফিলিস গ্যাম্বি, যা সাধারণত আফ্রিকান অ্যানোফিলিস মশা নামে পরিচিত, গ্রীষ্মমন্ডলীয় এবং উপ-গ্রীষ্মমন্ডলীয় অঞ্চলে মানুষের ম্যালেরিয়ার সবচেয়ে গুরুত্বপূর্ণ বাহক¹⁵। ওয়েস্ট নাইল ভাইরাস, সেন্ট লুইস এনসেফালাইটিস, জাপানি এনসেফালাইটিস এবং ঘোড়া ও পাখির ভাইরাল সংক্রমণ কিউলেক্স মশার মাধ্যমে ছড়ায়, যাকে প্রায়শই সাধারণ গৃহ মশা বলা হয়। এছাড়াও, এরা ব্যাকটেরিয়াজনিত এবং পরজীবী রোগেরও বাহক¹⁶। বিশ্বে ৩,০০০-এরও বেশি প্রজাতির উইপোকা রয়েছে এবং এরা ১৫০ মিলিয়ন বছরেরও বেশি সময় ধরে পৃথিবীতে টিকে আছে¹⁷। বেশিরভাগ কীটপতঙ্গ মাটিতে বাস করে এবং কাঠ ও সেলুলোজযুক্ত কাঠের পণ্য খেয়ে জীবনধারণ করে। ভারতীয় উইপোকা ওডোন্টোটার্মেস ওবেসাস একটি গুরুত্বপূর্ণ কীটপতঙ্গ যা গুরুত্বপূর্ণ ফসল এবং রোপিত গাছের মারাত্মক ক্ষতি করে¹⁸। কৃষি এলাকায়, বিভিন্ন পর্যায়ে উইপোকার উপদ্রব বিভিন্ন ফসল, গাছের প্রজাতি এবং নির্মাণ সামগ্রীর ব্যাপক অর্থনৈতিক ক্ষতি করতে পারে। উইপোকা মানুষের স্বাস্থ্য সমস্যাও সৃষ্টি করতে পারে¹⁹।
আজকের ঔষধশিল্প এবং কৃষি ক্ষেত্রে অণুজীব ও কীটপতঙ্গের প্রতিরোধ ক্ষমতার বিষয়টি জটিল২০,২১। তাই, উভয় কোম্পানিরই নতুন সাশ্রয়ী জীবাণুনাশক এবং নিরাপদ জৈব-কীটনাশকের সন্ধান করা উচিত। বর্তমানে কৃত্রিম কীটনাশক পাওয়া যায় এবং দেখা গেছে যে এগুলো সংক্রামক এবং লক্ষ্যবহির্ভূত উপকারী পোকামাকড়কে বিতাড়িত করে২২। সাম্প্রতিক বছরগুলিতে, বিভিন্ন শিল্পে প্রয়োগের কারণে বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের উপর গবেষণা প্রসারিত হয়েছে। কৃষি, মৃত্তিকা পরিশোধন, পেট্রোলিয়াম উত্তোলন, ব্যাকটেরিয়া ও পোকামাকড় অপসারণ এবং খাদ্য প্রক্রিয়াকরণে বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট অত্যন্ত উপকারী ও গুরুত্বপূর্ণ২৩,২৪। বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট বা মাইক্রোবিয়াল সারফ্যাক্ট্যান্ট হলো উপকূলীয় বাসস্থান এবং তেল-দূষিত এলাকায় ব্যাকটেরিয়া, ইস্ট এবং ছত্রাকের মতো অণুজীব দ্বারা উৎপাদিত জৈব-সারফ্যাক্ট্যান্ট রাসায়নিক পদার্থ২৫,২৬। রাসায়নিকভাবে প্রাপ্ত সারফ্যাক্ট্যান্ট এবং বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট হলো দুই প্রকার যা সরাসরি প্রাকৃতিক পরিবেশ থেকে পাওয়া যায়২৭। সামুদ্রিক বাসস্থান থেকে বিভিন্ন ধরণের বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট পাওয়া যায়২৮,২৯। তাই, বিজ্ঞানীরা প্রাকৃতিক ব্যাকটেরিয়ার উপর ভিত্তি করে বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট উৎপাদনের জন্য নতুন প্রযুক্তি খুঁজছেন³⁰,³¹। এই ধরনের গবেষণার অগ্রগতি পরিবেশ সুরক্ষার জন্য এই জৈব যৌগগুলির গুরুত্ব প্রমাণ করে³²। ব্যাসিলাস, সিউডোমোনাস, রোডোকক্কাস, অ্যালকালিজেনেস, করিনেব্যাকটেরিয়াম এবং এই ব্যাকটেরিয়ার গণগুলি সুপরিচিত প্রতিনিধি²³,³³।
বিভিন্ন ধরণের বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট রয়েছে যেগুলোর ব্যাপক প্রয়োগক্ষেত্র রয়েছে। এই যৌগগুলোর একটি উল্লেখযোগ্য সুবিধা হলো, এদের মধ্যে কয়েকটির ব্যাকটেরিয়ারোধী, লার্ভানাশক এবং কীটনাশক কার্যকারিতা রয়েছে। এর মানে হলো, এগুলো কৃষি, রাসায়নিক, ঔষধশিল্প এবং প্রসাধনী শিল্পে ব্যবহার করা যেতে পারে। যেহেতু বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টগুলো সাধারণত জৈব-বিয়োজনযোগ্য এবং পরিবেশের জন্য উপকারী, তাই ফসল রক্ষার জন্য এগুলো সমন্বিত বালাই ব্যবস্থাপনা কর্মসূচিতে ব্যবহৃত হয়। এইভাবে, এন্টারোব্যাক্টার ক্লোয়াকি এসজে২ (Enterobacter cloacae SJ2) দ্বারা উৎপাদিত অণুজীবীয় বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের লার্ভানাশক এবং উইপোকা-রোধী কার্যকারিতা সম্পর্কে মৌলিক জ্ঞান অর্জন করা হয়েছে। আমরা র‍্যামনোলিপিড বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের বিভিন্ন ঘনত্বের সংস্পর্শে আসার পর মৃত্যুহার এবং কলাস্থানিক পরিবর্তন পরীক্ষা করেছি। এছাড়াও, আমরা অণুশৈবাল, ড্যাফনিয়া এবং মাছের জন্য তীব্র বিষাক্ততা নির্ধারণ করতে বহুল ব্যবহৃত কোয়ান্টিটেটিভ স্ট্রাকচার-অ্যাক্টিভিটি (QSAR) কম্পিউটার প্রোগ্রাম ইকোলজিক্যাল স্ট্রাকচার-অ্যাক্টিভিটি (ECOSAR) মূল্যায়ন করেছি।
এই গবেষণায়, ৩০ থেকে ৫০ মিলিগ্রাম/মিলি (৫ মিলিগ্রাম/মিলি ব্যবধানে) পর্যন্ত বিভিন্ন ঘনত্বের পরিশোধিত বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের উইপোকা-বিরোধী কার্যকারিতা (বিষাক্ততা) ভারতীয় উইপোকা, ও. ওবেসাস এবং চতুর্থ প্রজাতির সিএক্স. কুইনকুইফ্যাসিয়েটাস মশার লার্ভার বিরুদ্ধে পরীক্ষা করা হয়েছিল। ও. ওবেসাস, সিএক্স. এবং সি. সোলানাসিয়ারামের বিরুদ্ধে ৪৮ ঘণ্টা ধরে বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের এলসি৫০ (LC50) ঘনত্ব নির্ণয় করা হয়। একটি নন-লিনিয়ার রিগ্রেশন কার্ভ ফিটিং পদ্ধতি ব্যবহার করে মশার লার্ভা শনাক্ত করা হয়েছিল। ফলাফলে দেখা গেছে যে, বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের ঘনত্ব বৃদ্ধির সাথে সাথে উইপোকার মৃত্যুহারও বৃদ্ধি পেয়েছে। ফলাফলে দেখা গেছে যে, বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টটির লার্ভানাশক (চিত্র ১) এবং উইপোকা-রোধী (চিত্র ২) কার্যকারিতা রয়েছে, যার ৪৮-ঘণ্টার LC50 মান (৯৫% CI) যথাক্রমে ২৬.৪৯ মিলিগ্রাম/লিটার (২৫.৪০ থেকে ২৭.৫৭) এবং ৩৩.৪৩ মিলিগ্রাম/লিটার (৩১.০৯ থেকে ৩৫.৬৮) (সারণি ১)। তীব্র বিষাক্ততার (৪৮ ঘণ্টা) নিরিখে, পরীক্ষিত জীবগুলোর জন্য বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টটিকে “ক্ষতিকর” হিসেবে শ্রেণিবদ্ধ করা হয়েছে। এই গবেষণায় উৎপাদিত বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টটি সংস্পর্শে আসার ২৪-৪৮ ঘণ্টার মধ্যে ১০০% মৃত্যুহারের মাধ্যমে চমৎকার লার্ভানাশক কার্যকারিতা প্রদর্শন করেছে।
লার্ভানাশক কার্যকারিতার জন্য LC50 মান গণনা করুন। আপেক্ষিক মৃত্যুহার (%)-এর জন্য অরৈখিক রিগ্রেশন কার্ভ ফিটিং (অবিচ্ছিন্ন রেখা) এবং ৯৫% কনফিডেন্স ইন্টারভাল (ছায়াযুক্ত এলাকা)।
উইপোকা-প্রতিরোধী কার্যকারিতার জন্য LC50 মান গণনা করুন। আপেক্ষিক মৃত্যুহার (%)-এর জন্য অরৈখিক রিগ্রেশন কার্ভ ফিটিং (অবিচ্ছিন্ন রেখা) এবং ৯৫% কনফিডেন্স ইন্টারভাল (ছায়াযুক্ত এলাকা)।
পরীক্ষার শেষে, অণুবীক্ষণ যন্ত্রের নিচে আকারগত পরিবর্তন এবং অস্বাভাবিকতা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। নিয়ন্ত্রিত এবং পরীক্ষামূলক দলগুলিতে ৪০ গুণ বিবর্ধনে আকারগত পরিবর্তনগুলি পর্যবেক্ষণ করা হয়েছিল। চিত্র ৩-এ যেমন দেখানো হয়েছে, বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট দ্বারা পরীক্ষামূলকভাবে প্রয়োগ করা অধিকাংশ লার্ভার বৃদ্ধি ব্যাহত হয়েছিল। চিত্র ৩ক-তে একটি স্বাভাবিক Cx. quinquefasciatus দেখানো হয়েছে, চিত্র ৩খ-তে একটি অস্বাভাবিক Cx. quinquefasciatus-এর পাঁচটি নেমাটোড লার্ভা দেখানো হয়েছে।
কিউলেক্স কুইনকুইফ্যাসিয়েটাস লার্ভার বিকাশের উপর বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের সাবলেথাল (LC50) ডোজের প্রভাব। আলোক অণুবীক্ষণ চিত্র (ক) ৪০× বিবর্ধনে একটি স্বাভাবিক কিউলেক্সের। (খ) অস্বাভাবিক কিউলেক্স। পাঁচটি নেমাটোড লার্ভার কারণ।
বর্তমান গবেষণায়, পরীক্ষাধীন লার্ভা (চিত্র ৪) এবং উইপোকার (চিত্র ৫) হিস্টোলজিক্যাল পরীক্ষায় বেশ কিছু অস্বাভাবিকতা প্রকাশ পেয়েছে, যার মধ্যে রয়েছে উদরীয় অঞ্চলের হ্রাস এবং মধ্যান্ত্রের পেশী, উপকলা ও ত্বকের ক্ষতি। হিস্টোলজি এই গবেষণায় ব্যবহৃত বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের প্রতিরোধমূলক কার্যকলাপের কার্যপ্রণালী প্রকাশ করেছে।
স্বাভাবিক, চিকিৎসাবিহীন চতুর্থ ইনস্টার Cx কুইনকুইফ্যাসিয়েটাস লার্ভার হিস্টোপ্যাথলজি (কন্ট্রোল: (a,b)) এবং বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট দ্বারা চিকিৎসাকৃত (ট্রিটমেন্ট: (c,d))। তীরচিহ্নগুলো চিকিৎসাকৃত অন্ত্রের এপিথেলিয়াম (epi), নিউক্লিয়াস (n), এবং পেশী (mu) নির্দেশ করে। স্কেল = ৫০ µm।
স্বাভাবিক চিকিৎসাবিহীন ও. ওবেসাস (কন্ট্রোল: (a,b)) এবং বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট দ্বারা চিকিৎসাকৃত (ট্রিটমেন্ট: (c,d)) এর হিস্টোপ্যাথলজি। তীরচিহ্নগুলো যথাক্রমে অন্ত্রের এপিথেলিয়াম (epi) এবং পেশী (mu) নির্দেশ করে। স্কেল = ৫০ µm।
এই গবেষণায়, প্রাথমিক উৎপাদক (সবুজ শৈবাল), প্রাথমিক খাদক (জলজ পোকা) এবং দ্বিতীয় স্তরের খাদক (মাছ)-এর উপর র‍্যামনোলিপিড বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট পণ্যের তীব্র বিষাক্ততা পূর্বাভাস দেওয়ার জন্য ECOSAR ব্যবহার করা হয়েছে। এই প্রোগ্রামটি আণবিক কাঠামোর উপর ভিত্তি করে বিষাক্ততা মূল্যায়ন করার জন্য অত্যাধুনিক পরিমাণগত গঠন-কার্যকারিতা যৌগ মডেল ব্যবহার করে। মডেলটি জলজ প্রজাতির উপর পদার্থগুলোর তীব্র এবং দীর্ঘমেয়াদী বিষাক্ততা গণনা করার জন্য গঠন-কার্যকারিতা (SAR) সফটওয়্যার ব্যবহার করে। বিশেষভাবে, সারণি ২-এ বিভিন্ন প্রজাতির জন্য আনুমানিক গড় প্রাণঘাতী ঘনত্ব (LC50) এবং গড় কার্যকরী ঘনত্ব (EC50) সংক্ষিপ্তভাবে তুলে ধরা হয়েছে। রাসায়নিক পদার্থের শ্রেণিবিন্যাস এবং লেবেলিং-এর বিশ্বব্যাপী সমন্বিত পদ্ধতি (Globally Harmonized System of Classification and Labeling of Chemicals) ব্যবহার করে সন্দেহজনক বিষাক্ততাকে চারটি স্তরে শ্রেণিবদ্ধ করা হয়েছে (সারণি ৩)।
বাহক-বাহিত রোগ, বিশেষ করে মশা এবং এডিস মশার প্রজাতি নিয়ন্ত্রণ। মিশরীয়দের জন্য, এটি এখন একটি কঠিন কাজ ৪০,৪১,৪২,৪৩,৪৪,৪৫,৪৬। যদিও পাইরেথ্রয়েড এবং অর্গানোফসফেটের মতো কিছু রাসায়নিকভাবে উপলব্ধ কীটনাশক কিছুটা উপকারী, তবে এগুলো মানব স্বাস্থ্যের জন্য উল্লেখযোগ্য ঝুঁকি তৈরি করে, যার মধ্যে রয়েছে ডায়াবেটিস, প্রজনন সংক্রান্ত সমস্যা, স্নায়বিক রোগ, ক্যান্সার এবং শ্বাসযন্ত্রের রোগ। অধিকন্তু, সময়ের সাথে সাথে, এই পোকামাকড়গুলো এগুলোর বিরুদ্ধে প্রতিরোধী হয়ে উঠতে পারে১৩,৪৩,৪৮। সুতরাং, কার্যকর এবং পরিবেশবান্ধব জৈবিক নিয়ন্ত্রণ ব্যবস্থা মশা নিয়ন্ত্রণের একটি অধিক জনপ্রিয় পদ্ধতি হয়ে উঠবে৪৯,৫০। বেনেলি৫১ পরামর্শ দিয়েছেন যে শহরাঞ্চলে মশা বাহকের প্রাথমিক নিয়ন্ত্রণ অধিক কার্যকর হবে, কিন্তু তারা গ্রামাঞ্চলে লার্ভানাশক ব্যবহারের সুপারিশ করেননি৫২। টম এবং অন্যান্যরাও ৫৩ পরামর্শ দিয়েছেন যে মশাকে তাদের অপরিণত পর্যায়ে নিয়ন্ত্রণ করা একটি নিরাপদ এবং সহজ কৌশল হবে কারণ তারা নিয়ন্ত্রণকারী এজেন্টের প্রতি অধিক সংবেদনশীল ৫৪।
একটি শক্তিশালী স্ট্রেইন (এন্টারোব্যাক্টার ক্লোয়াকি SJ2) দ্বারা বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট উৎপাদন ধারাবাহিক এবং আশাব্যঞ্জক কার্যকারিতা দেখিয়েছে। আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণায় রিপোর্ট করা হয়েছে যে এন্টারোব্যাক্টার ক্লোয়াকি SJ2 ভৌত-রাসায়নিক পরামিতি ব্যবহার করে বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট উৎপাদনকে অপ্টিমাইজ করে। তাদের গবেষণা অনুসারে, একটি সম্ভাব্য ই. ক্লোয়াকি আইসোলেট দ্বারা বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট উৎপাদনের জন্য সর্বোত্তম শর্তগুলো ছিল ৩৬ ঘন্টা ইনকিউবেশন, ১৫০ আরপিএম-এ আলোড়ন, পিএইচ ৭.৫, ৩৭ °সে, লবণাক্ততা ১ পিপিটি, কার্বন উৎস হিসেবে ২% গ্লুকোজ এবং ১% ইস্ট। ২.৬১ গ্রাম/লিটার বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট পাওয়ার জন্য নির্যাসটি নাইট্রোজেন উৎস হিসেবে ব্যবহার করা হয়েছিল। এছাড়াও, টিএলসি, এফটিআর এবং এমএএলডিআই-টিওএফ-এমএস ব্যবহার করে বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টগুলোর বৈশিষ্ট্য নির্ধারণ করা হয়েছিল। এটি নিশ্চিত করেছে যে র‍্যামনোলিপিড একটি বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট। গ্লাইকোলিপিড বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টগুলো অন্যান্য ধরণের বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের মধ্যে সবচেয়ে নিবিড়ভাবে অধ্যয়ন করা শ্রেণী। এগুলো কার্বোহাইড্রেট এবং লিপিড অংশ, প্রধানত ফ্যাটি অ্যাসিড চেইন দ্বারা গঠিত। গ্লাইকোলিপিডগুলির মধ্যে, প্রধান প্রতিনিধি হল র‍্যামনোলিপিড এবং সোফোরোলিপিড৫৬। র‍্যামনোলিপিডে দুটি র‍্যামনোজ অংশ থাকে যা মনো- অথবা ডাই-বিটা-হাইড্রক্সিডেকানোয়িক অ্যাসিডের সাথে যুক্ত থাকে৫৭। চিকিৎসা এবং ঔষধ শিল্পে র‍্যামনোলিপিডের ব্যবহার সুপ্রতিষ্ঠিত ৫৮, এছাড়াও সম্প্রতি কীটনাশক হিসেবে এর ব্যবহার শুরু হয়েছে ৫৯।
শ্বসন সাইফনের হাইড্রোফোবিক অঞ্চলের সাথে বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের মিথস্ক্রিয়া এর পত্ররন্ধ্র গহ্বরের মধ্য দিয়ে জলকে যেতে দেয়, যার ফলে জলজ পরিবেশের সাথে লার্ভার সংস্পর্শ বৃদ্ধি পায়। বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের উপস্থিতি শ্বাসনালীকেও প্রভাবিত করে, যার দৈর্ঘ্য পৃষ্ঠের কাছাকাছি থাকে, যা লার্ভার পক্ষে পৃষ্ঠে উঠে আসা এবং শ্বাস নেওয়া সহজ করে তোলে। ফলস্বরূপ, জলের পৃষ্ঠটান কমে যায়। যেহেতু লার্ভা জলের পৃষ্ঠে লেগে থাকতে পারে না, তাই তারা ট্যাঙ্কের নীচে পড়ে যায়, হাইড্রোস্ট্যাটিক চাপ বিঘ্নিত করে, যার ফলে অতিরিক্ত শক্তি ব্যয় হয় এবং ডুবে মৃত্যু ঘটে৩৮,৬০। ঘ্রিবি৬১ দ্বারা অনুরূপ ফলাফল পাওয়া গেছে, যেখানে ব্যাসিলাস সাবটিলিস দ্বারা উৎপাদিত একটি বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট এফেস্ট্রিয়া কুহনিয়েলার বিরুদ্ধে লার্ভানাশক কার্যকলাপ প্রদর্শন করেছিল। একইভাবে, সিএক্স. দাস এবং মুখার্জি২৩ কুইনকুইফ্যাসিয়েটাস লার্ভার উপর চক্রীয় লাইপোপেপটাইডের প্রভাবও মূল্যায়ন করেছেন।
এই গবেষণার ফলাফল Cx. quinquefasciatus মশার বিরুদ্ধে র‌্যামনোলিপিড বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের লার্ভানাশক ক্রিয়াকলাপ সম্পর্কিত। কুইনকুইফ্যাসিয়েটাস মশার নিধন পূর্বে প্রকাশিত ফলাফলের সাথে সামঞ্জস্যপূর্ণ। উদাহরণস্বরূপ, ব্যাসিলাস এবং সিউডোমোনাস প্রজাতির বিভিন্ন ব্যাকটেরিয়া দ্বারা উৎপাদিত সারফ্যাক্টিন-ভিত্তিক বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট ব্যবহার করা হয়। কিছু প্রাথমিক প্রতিবেদন৬৪,৬৫,৬৬ ব্যাসিলাস সাবটিলিস২৩ থেকে প্রাপ্ত লাইপোপেপটাইড বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের লার্ভা-নিধনকারী ক্রিয়াকলাপের কথা জানিয়েছে। দীপালি প্রমুখ ৬৩ দেখেছেন যে স্টেনোট্রপোমোনাস মাল্টোফিলিয়া থেকে বিচ্ছিন্ন র‌্যামনোলিপিড বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট ১০ মিলিগ্রাম/লিটার ঘনত্বে শক্তিশালী লার্ভানাশক ক্রিয়াকলাপ দেখিয়েছে। সিলভা প্রমুখ ৬৭ ১ গ্রাম/লিটার ঘনত্বে এডিস ইজিপ্টি মশার বিরুদ্ধে র‌্যামনোলিপিড বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের লার্ভানাশক ক্রিয়াকলাপের কথা জানিয়েছেন। কনকদণ্ডে প্রমুখ। ৬৮ নং প্রতিবেদনে বলা হয়েছে যে, ব্যাসিলাস সাবটিলিস দ্বারা উৎপাদিত লিপোপেপটাইড বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট ইউক্যালিপটাসের লিপোফিলিক ভগ্নাংশের সাথে কিউলেক্স লার্ভা এবং উইপোকার সামগ্রিক মৃত্যুহার ঘটায়। একইভাবে, মাসেন্দ্র ও তার সহযোগীরা ৬৯ নং প্রতিবেদনে ইউক্যালিপটাসের অপরিশোধিত নির্যাসের লিপোফিলিক এন-হেক্সেন এবং ইটিওএসি ভগ্নাংশে কর্মী পিঁপড়ার (ক্রিপ্টোটার্মেস সিনোসেফালাস লাইট.) ৬১.৭% মৃত্যুহারের কথা জানিয়েছেন।
পার্থিপান ও অন্যান্যরা ৭০ ম্যালেরিয়া পরজীবী প্লাজমোডিয়ামের বাহক অ্যানোফিলিস স্টিফেনসির বিরুদ্ধে ব্যাসিলাস সাবটিলিস এ১ এবং সিউডোমোনাস স্টুটজেরি এনএ৩ দ্বারা উৎপাদিত লাইপোপেপটাইড বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের কীটনাশক ব্যবহারের কথা জানিয়েছেন। তারা পর্যবেক্ষণ করেছেন যে, বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে প্রয়োগের ফলে লার্ভা এবং পিউপা বেশি দিন বেঁচে থাকে, ডিম পাড়ার সময়কাল কমে যায়, বন্ধ্যা হয় এবং তাদের জীবনকাল সংক্ষিপ্ত হয়। বি. সাবটিলিস বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট এ১-এর পর্যবেক্ষণকৃত এলসি৫০ (LC50) মান বিভিন্ন লার্ভা দশার (অর্থাৎ লার্ভা I, II, III, IV এবং পিউপা পর্যায়) জন্য যথাক্রমে ৩.৫৮, ৪.৯২, ৫.৩৭, ৭.১০ এবং ৭.৯৯ মিলিগ্রাম/লিটার ছিল। তুলনামূলকভাবে, সিউডোমোনাস স্টুটজেরি NA3 এর লার্ভা পর্যায় I-IV এবং পিউপা পর্যায়ের জন্য বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের পরিমাণ ছিল যথাক্রমে 2.61, 3.68, 4.48, 5.55 এবং 6.99 মিলিগ্রাম/লিটার। বেঁচে থাকা লার্ভা এবং পিউপাদের বিলম্বিত ফিনোলজির কারণ হিসেবে কীটনাশক প্রয়োগের ফলে সৃষ্ট উল্লেখযোগ্য শারীরবৃত্তীয় এবং বিপাকীয় ব্যাঘাতকে মনে করা হয়71।
উইকারহ্যামোমাইসেস অ্যানোমালাস স্ট্রেইন CCMA 0358 একটি বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট তৈরি করে যা এডিস মশার বিরুদ্ধে ১০০% লার্ভানাশক কার্যকারিতা দেখায়। এজিপ্টি মশার ক্ষেত্রে ২৪-ঘণ্টার ব্যবধান ৩৮ সিলভা এট আল. দ্বারা উল্লিখিত সময়ের চেয়ে বেশি ছিল। সূর্যমুখী তেলকে কার্বন উৎস হিসেবে ব্যবহার করে সিউডোমোনাস অ্যারুজিনোসা থেকে উৎপাদিত একটি বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট ৪৮ ঘণ্টার মধ্যে ১০০% লার্ভা মেরে ফেলতে সক্ষম বলে দেখানো হয়েছে ৬৭। অবিনায়া এট আল.৭২ এবং প্রধান এট আল.৭৩ ব্যাসিলাস গণের বিভিন্ন আইসোলেট দ্বারা উৎপাদিত সারফ্যাক্ট্যান্টের লার্ভানাশক বা কীটনাশক প্রভাবও প্রদর্শন করেছেন। সেন্থিল-নাথান এট আল. দ্বারা পূর্বে প্রকাশিত একটি গবেষণায় দেখা গেছে যে উদ্ভিদ লেগুনের সংস্পর্শে আসা ১০০% মশার লার্ভা মারা যাওয়ার সম্ভাবনা ছিল। ৭৪।
সমন্বিত বালাই ব্যবস্থাপনা কর্মসূচির জন্য পোকামাকড়ের জীববিজ্ঞানের উপর কীটনাশকের উপ-প্রাণঘাতী প্রভাব মূল্যায়ন করা অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ, কারণ উপ-প্রাণঘাতী মাত্রা/ঘনত্ব পোকামাকড়কে হত্যা করে না, কিন্তু জৈবিক বৈশিষ্ট্য ব্যাহত করার মাধ্যমে ভবিষ্যৎ প্রজন্মের পোকামাকড়ের সংখ্যা হ্রাস করতে পারে¹⁰। সিকুইরা এবং তার সহকর্মীরা⁷⁵ ৫০ থেকে ৩০০ মিলিগ্রাম/মিলি পর্যন্ত বিভিন্ন ঘনত্বে পরীক্ষা করার সময় র‍্যামনোলিপিড বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের (৩০০ মিলিগ্রাম/মিলি) সম্পূর্ণ লার্ভানাশক কার্যকলাপ (১০০% মৃত্যুহার) পর্যবেক্ষণ করেছেন। তারা এডিস ইজিপ্টি স্ট্রেইনের লার্ভা পর্যায়ের উপর পরীক্ষা চালান। তারা লার্ভার বেঁচে থাকা এবং সাঁতার কাটার কার্যকলাপের উপর মৃত্যুর সময় এবং উপ-প্রাণঘাতী ঘনত্বের প্রভাব বিশ্লেষণ করেছেন। এছাড়াও, তারা বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের উপ-প্রাণঘাতী ঘনত্বের (যেমন, ৫০ মিলিগ্রাম/মিলি এবং ১০০ মিলিগ্রাম/মিলি) সংস্পর্শে আসার ২৪-৪৮ ঘন্টা পরে সাঁতারের গতি হ্রাস লক্ষ্য করেছেন। যে বিষগুলির আশাব্যঞ্জক উপ-প্রাণঘাতী ভূমিকা রয়েছে, সেগুলিকে সংস্পর্শে আসা কীটপতঙ্গের একাধিক ক্ষতি সাধনে আরও কার্যকর বলে মনে করা হয়⁷⁶।
আমাদের ফলাফলের হিস্টোলজিক্যাল পর্যবেক্ষণ ইঙ্গিত করে যে এন্টারোব্যাক্টার ক্লোয়াকি এসজে২ (Enterobacter cloacae SJ2) দ্বারা উৎপাদিত বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট মশা (সিএক্স. কুইনকুইফ্যাসিয়েটাস) এবং উইপোকা (ও. ওবেসাস) লার্ভার টিস্যুকে উল্লেখযোগ্যভাবে পরিবর্তন করে। অ্যানোফিলিস গ্যাম্বিয়াইস এবং অ্যানোফিলিস অ্যারাবিকার ক্ষেত্রে তুলসী তেলের প্রস্তুতি দ্বারা অনুরূপ অস্বাভাবিকতা সৃষ্টি হয়েছিল, যা ওচোলা৭৭ দ্বারা বর্ণিত হয়েছে। কামরাজ প্রমুখও অ্যানোফিলিসে একই রূপগত অস্বাভাবিকতার বর্ণনা দিয়েছেন। স্টেফানির লার্ভাকে সোনার ন্যানো পার্টিকেলের সংস্পর্শে আনা হয়েছিল। বসন্ত-শ্রীনিবাসন প্রমুখও রিপোর্ট করেছেন যে শেফার্ডস পার্স এসেনশিয়াল অয়েল এডিস অ্যালবোপিকটাসের চেম্বার এবং এপিথেলিয়াল স্তরকে মারাত্মকভাবে ক্ষতিগ্রস্ত করে। এডিস ইজিপ্টি। রাঘবেন্দ্রন প্রমুখ রিপোর্ট করেছেন যে মশার লার্ভাকে একটি স্থানীয় পেনিসিলিয়াম ছত্রাকের ৫০০ মিলিগ্রাম/মিলি মাইসেলিয়াল নির্যাস দিয়ে চিকিৎসা করা হয়েছিল। এডিস ইজিপ্টি এবং সিএক্স. মৃত্যুহার ৮০। পূর্বে, অবিনায়া ও অন্যান্যরা বেনজোডায়াজেপিন (B. licheniformis) এক্সোপলিস্যাকারাইড দ্বারা চিকিৎসাকৃত এডিস ইজিপ্টি (Aedes aegypti)-র চতুর্থ ইনস্টার লার্ভা নিয়ে গবেষণা করেছিলেন। স্টিফেনসি এবং রাঘবেন্দ্রন ও অন্যান্যদের মতে, প্লামবেরি (P. daleae) মাইসেলিয়াল নির্যাস দ্বারা চিকিৎসার পর, পরীক্ষিত মশার (চতুর্থ ইনস্টার লার্ভা) মধ্যান্ত্রের কোষগুলিতে অন্ত্রের লুমেনের স্ফীতি, আন্তঃকোষীয় উপাদানের হ্রাস এবং নিউক্লিয়াসের অবক্ষয় দেখা গেছে। একিনেশিয়া পাতার নির্যাস দ্বারা চিকিৎসাকৃত মশার লার্ভাতেও একই হিস্টোলজিক্যাল পরিবর্তন দেখা গেছে, যা চিকিৎসাকৃত যৌগগুলির কীটনাশক ক্ষমতা নির্দেশ করে।
ECOSAR সফটওয়্যারের ব্যবহার আন্তর্জাতিক স্বীকৃতি লাভ করেছে৮২। বর্তমান গবেষণা থেকে জানা যায় যে, মাইক্রোঅ্যালজি (C. vulgaris), মাছ এবং ওয়াটার ফ্লি (D. magna)-এর উপর ECOSAR বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের তীব্র বিষাক্ততা জাতিসংঘ কর্তৃক সংজ্ঞায়িত “বিষাক্ততা” বিভাগের অন্তর্ভুক্ত৮৩। ECOSAR ইকোটক্সিসিটি মডেলটি পদার্থের তীব্র এবং দীর্ঘমেয়াদী বিষাক্ততা পূর্বাভাস দেওয়ার জন্য SAR এবং QSAR ব্যবহার করে এবং এটি প্রায়শই জৈব দূষকের বিষাক্ততা পূর্বাভাস দেওয়ার জন্য ব্যবহৃত হয়৮২,৮৪।
এই গবেষণায় ব্যবহৃত প্যারাফর্মালডিহাইড, সোডিয়াম ফসফেট বাফার (পিএইচ ৭.৪) এবং অন্যান্য সকল রাসায়নিক পদার্থ ভারতের হাইমিডিয়া ল্যাবরেটরিজ থেকে ক্রয় করা হয়েছিল।
একমাত্র কার্বন উৎস হিসেবে ১% অপরিশোধিত তেল মিশ্রিত ২০০ মিলি জীবাণুমুক্ত বুশনেল হাস মিডিয়ামযুক্ত ৫০০ মিলি আর্লেনমেয়ার ফ্লাস্কে বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট উৎপাদন করা হয়েছিল। এন্টারোব্যাক্টার ক্লোয়াকি SJ2 (১.৪ × ১০⁴ CFU/ml)-এর একটি প্রিকালচার ইনোকুলেট করা হয়েছিল এবং একটি অরবিটাল শেকারে ৩৭°C তাপমাত্রায়, ২০০ rpm গতিতে ৭ দিন ধরে কালচার করা হয়েছিল। ইনকিউবেশন পিরিয়ড শেষে, কালচার মিডিয়ামটিকে ৪°C তাপমাত্রায় ২০ মিনিটের জন্য ৩৪০০×g গতিতে সেন্ট্রিফিউজ করে বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট নিষ্কাশন করা হয় এবং প্রাপ্ত সুপারন্যাট্যান্টটি স্ক্রিনিংয়ের উদ্দেশ্যে ব্যবহার করা হয়েছিল। বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের অপটিমাইজেশন পদ্ধতি এবং বৈশিষ্ট্য নিরূপণ আমাদের পূর্ববর্তী গবেষণা²⁶ থেকে গ্রহণ করা হয়েছিল।
কিউলেক্স কুইনকুইফ্যাসিয়েটাস মশার লার্ভা ভারতের তামিলনাড়ুর পালানচিপেটাই-এ অবস্থিত সেন্টার ফর অ্যাডভান্সড স্টাডি ইন মেরিন বায়োলজি (CAS) থেকে সংগ্রহ করা হয়েছিল। লার্ভাগুলোকে ২৭ ± ২° সেলসিয়াস তাপমাত্রায় এবং ১২:১২ (আলো:অন্ধকার) আলোকচক্রে বিশুদ্ধ জলে পূর্ণ প্লাস্টিকের পাত্রে প্রতিপালন করা হয়েছিল। মশার লার্ভাগুলোকে ১০% গ্লুকোজ দ্রবণ খাওয়ানো হয়েছিল।
খোলা এবং অরক্ষিত সেপটিক ট্যাঙ্কে কিউলেক্স কুইনকুইফ্যাসিয়েটাস লার্ভা পাওয়া গেছে। পরীক্ষাগারে লার্ভা শনাক্ত ও কালচার করার জন্য আদর্শ শ্রেণিবিন্যাস নির্দেশিকা ব্যবহার করুন৮৫। বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থার সুপারিশ অনুযায়ী লার্ভানাশক পরীক্ষা চালানো হয়েছিল৮৬। এসএইচ। কুইনকুইফ্যাসিয়েটাস-এর চতুর্থ ইনস্টার লার্ভা ২৫ মিলি এবং ৫০ মিলি-র গ্রুপে বন্ধ টিউবে সংগ্রহ করা হয়েছিল, যেখানে তাদের ধারণক্ষমতার দুই-তৃতীয়াংশ বায়ু ফাঁক রাখা হয়েছিল। প্রতিটি টিউবে আলাদাভাবে বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট (০–৫০ মিলিগ্রাম/মিলি) যোগ করা হয়েছিল এবং ২৫ ডিগ্রি সেলসিয়াসে সংরক্ষণ করা হয়েছিল। কন্ট্রোল টিউবে শুধুমাত্র পাতিত জল (৫০ মিলি) ব্যবহার করা হয়েছিল। ইনকিউবেশন পিরিয়ডে (১২–৪৮ ঘন্টা) যে লার্ভাগুলো সাঁতার কাটার কোনো লক্ষণ দেখায়নি, সেগুলোকে মৃত বলে গণ্য করা হয়েছিল৮৭। সমীকরণ (১) ব্যবহার করে লার্ভার মৃত্যুর হার গণনা করুন।৮৮।
ওডোন্টোটেরমিটিডি (Odontotermitidae) পরিবারের অন্তর্ভুক্ত হলো ভারতীয় উইপোকা ওডোন্টোটার্মেস ওবেসাস (Odontotermes obesus), যা ভারতের আন্নামালাই বিশ্ববিদ্যালয়ের কৃষি ক্যাম্পাসের পচা কাঠের গুঁড়িতে পাওয়া যায়। এই বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট (০-৫০ মিলিগ্রাম/মিলি) ক্ষতিকর কিনা তা নির্ধারণ করার জন্য সাধারণ পদ্ধতি ব্যবহার করে পরীক্ষা করুন। ৩০ মিনিট ধরে ল্যামিনার এয়ার ফ্লোতে শুকানোর পর, হোয়াটম্যান কাগজের প্রতিটি স্ট্রিপকে ৩০, ৪০, বা ৫০ মিলিগ্রাম/মিলি ঘনত্বে বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট দিয়ে প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল। প্রলেপযুক্ত এবং প্রলেপবিহীন কাগজের স্ট্রিপগুলিকে একটি পেট্রি ডিশের কেন্দ্রে পরীক্ষা ও তুলনা করা হয়েছিল। প্রতিটি পেট্রি ডিশে প্রায় ত্রিশটি সক্রিয় ও. ওবেসাস (O. obesus) উইপোকা ছিল। নিয়ন্ত্রণ এবং পরীক্ষাধীন উইপোকাদের খাদ্য উৎস হিসেবে ভেজা কাগজ দেওয়া হয়েছিল। ইনকিউবেশন সময়কাল জুড়ে সমস্ত প্লেট ঘরের তাপমাত্রায় রাখা হয়েছিল। ১২, ২৪, ৩৬ এবং ৪৮ ঘন্টা পরে উইপোকাগুলো মারা গিয়েছিল৮৯,৯০। এরপর বিভিন্ন বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট ঘনত্বে উইপোকার মৃত্যুর হার অনুমান করার জন্য সমীকরণ ১ ব্যবহার করা হয়েছিল। (২)।
নমুনাগুলো বরফের উপর রাখা হয়েছিল এবং ১০০ মিলি ০.১ মোলার সোডিয়াম ফসফেট বাফার (পিএইচ ৭.৪) যুক্ত মাইক্রোটিউবে প্যাক করে পরবর্তী বিশ্লেষণের জন্য রাজীব গান্ধী সেন্টার ফর অ্যাকোয়াকালচার (আরজিসিএ)-এর সেন্ট্রাল অ্যাকোয়াকালচার প্যাথলজি ল্যাবরেটরি (সিএপিএল), হিস্টোলজি ল্যাবরেটরি, সিরকালি, মায়িলাদুথুরাই জেলা, তামিলনাড়ু, ভারত-এ পাঠানো হয়েছিল। নমুনাগুলো অবিলম্বে ৩৭° সেলসিয়াস তাপমাত্রায় ৪৮ ঘণ্টার জন্য ৪% প্যারাফর্মালডিহাইডে ফিক্স করা হয়েছিল।
স্থিরীকরণ পর্বের পর, উপাদানটিকে ০.১ মোলার সোডিয়াম ফসফেট বাফার (পিএইচ ৭.৪) দিয়ে তিনবার ধৌত করা হয়, ধাপে ধাপে ইথানলে পানিশূন্য করা হয় এবং ৭ দিনের জন্য লাইকা রেজিনে ভিজিয়ে রাখা হয়। এরপর পদার্থটিকে রেজিন ও পলিমারাইজার দ্বারা পূর্ণ একটি প্লাস্টিকের ছাঁচে রাখা হয় এবং তারপর ৩৭° সেলসিয়াস তাপমাত্রায় উত্তপ্ত একটি ওভেনে রাখা হয়, যতক্ষণ না পদার্থযুক্ত ব্লকটি সম্পূর্ণরূপে পলিমারাইজড হয়।
পলিমারাইজেশনের পর, ব্লকগুলোকে একটি LEICA RM2235 মাইক্রোটোম (Rankin Biomedical Corporation 10,399 Enterprise Dr. Davisburg, MI 48,350, USA) ব্যবহার করে ৩ মিমি পুরুত্বে কাটা হয়েছিল। সেকশনগুলোকে স্লাইডে দলবদ্ধ করা হয়, প্রতি স্লাইডে ছয়টি করে সেকশন থাকে। স্লাইডগুলো ঘরের তাপমাত্রায় শুকানো হয়, তারপর ৭ মিনিটের জন্য হেমাটোক্সিলিন দিয়ে রঞ্জিত করা হয় এবং ৪ মিনিটের জন্য চলমান জল দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়। এছাড়াও, ত্বকে ৫ মিনিটের জন্য ইওসিন দ্রবণ প্রয়োগ করা হয় এবং ৫ মিনিটের জন্য চলমান জল দিয়ে ধুয়ে ফেলা হয়।
বিভিন্ন ক্রান্তীয় অঞ্চলের জলজ জীব ব্যবহার করে তীব্র বিষাক্ততার পূর্বাভাস দেওয়া হয়েছিল: ৯৬-ঘণ্টার মাছের LC50, ৪৮-ঘণ্টার D. magna LC50, এবং ৯৬-ঘণ্টার সবুজ শৈবালের EC50। মাছ এবং সবুজ শৈবালের উপর র‍্যামনোলিপিড বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের বিষাক্ততা মার্কিন পরিবেশ সুরক্ষা সংস্থা (US Environmental Protection Agency) দ্বারা তৈরি উইন্ডোজের জন্য ECOSAR সফটওয়্যার সংস্করণ ২.২ ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা হয়েছিল। (অনলাইনে উপলব্ধ: https://www.epa.gov/tsca-screening-tools/ecological-struct-activity-relationships-ecosar-predictive-model)।
লার্ভানাশক এবং উইপোকা-রোধী কার্যকলাপের জন্য সমস্ত পরীক্ষা তিনবার করে করা হয়েছিল। লার্ভা এবং উইপোকার মৃত্যুর তথ্যের নন-লিনিয়ার রিগ্রেশন (ডোজ প্রতিক্রিয়া ভেরিয়েবলের লগ) করে ৯৫% কনফিডেন্স ইন্টারভাল সহ মিডিয়ান লেথাল কনসেন্ট্রেশন (LC50) গণনা করা হয়েছিল এবং Prism® (সংস্করণ 8.0, GraphPad Software) Inc., USA) 84, 91 ব্যবহার করে কনসেন্ট্রেশন প্রতিক্রিয়া কার্ভ তৈরি করা হয়েছিল।
বর্তমান গবেষণাটি এন্টারোব্যাক্টার ক্লোয়াকি এসজে২ (Enterobacter cloacae SJ2) দ্বারা উৎপাদিত অণুজীবীয় বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের মশার লার্ভানাশক এবং উইপোকা-প্রতিরোধী উপাদান হিসেবে সম্ভাব্যতা প্রকাশ করে, এবং এই কাজটি লার্ভানাশক ও উইপোকা-প্রতিরোধী ক্রিয়ার কার্যপ্রণালী সম্পর্কে আরও ভালোভাবে বুঝতে সাহায্য করবে। বায়োসারফ্যাক্ট্যান্ট দ্বারা শোধিত লার্ভার হিস্টোলজিক্যাল গবেষণায় পরিপাকতন্ত্র, মধ্যান্ত্র, সেরিব্রাল কর্টেক্সের ক্ষতি এবং অন্ত্রের এপিথেলিয়াল কোষের হাইপারপ্লাসিয়া দেখা গেছে। ফলাফল: এন্টারোব্যাক্টার ক্লোয়াকি এসজে২ (Enterobacter cloacae SJ2) দ্বারা উৎপাদিত র‍্যামনোলিপিড বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের উইপোকা-প্রতিরোধী ও লার্ভানাশক ক্রিয়ার বিষবিদ্যাগত মূল্যায়নে দেখা গেছে যে, এই আইসোলেটটি মশা (Cx quinquefasciatus) এবং উইপোকা (O. obesus) দ্বারা বাহিত রোগ নিয়ন্ত্রণের জন্য একটি সম্ভাব্য জৈব-কীটনাশক। বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের অন্তর্নিহিত পরিবেশগত বিষাক্ততা এবং তাদের সম্ভাব্য পরিবেশগত প্রভাব সম্পর্কে বোঝার প্রয়োজন রয়েছে। এই গবেষণাটি বায়োসারফ্যাক্ট্যান্টের পরিবেশগত ঝুঁকি মূল্যায়নের জন্য একটি বৈজ্ঞানিক ভিত্তি প্রদান করে।