সিডিসি বোতল বায়োঅ্যাসে ব্যবহার করে ভারতে ভিসারাল লিশম্যানিয়াসিসের বাহক ফ্লেবোটোমাস আর্জেন্টাইপস-এর সাইপারমেথ্রিনের প্রতি সংবেদনশীলতা পর্যবেক্ষণ | কীটপতঙ্গ ও বাহক

ভিসারাল লিশম্যানিয়াসিস (ভিএল), যা ভারতীয় উপমহাদেশে কালা-আজারের নামে পরিচিত, হলো লিশম্যানিয়া নামক ফ্ল্যাজেলেটেড প্রোটোজোয়ান দ্বারা সৃষ্ট একটি পরজীবী রোগ, যা দ্রুত চিকিৎসা না করা হলে মারাত্মক হতে পারে। ফ্লেবোটোমাস আর্জেন্টাইপস নামক স্যান্ডফ্লাই দক্ষিণ-পূর্ব এশিয়ায় ভিএল-এর একমাত্র নিশ্চিত বাহক, যেখানে এটি একটি কৃত্রিম কীটনাশক, ইনডোর রেসিডুয়াল স্প্রেয়িং (আইআরএস) দ্বারা নিয়ন্ত্রিত হয়। ভিএল নিয়ন্ত্রণ কর্মসূচিতে ডিডিটি ব্যবহারের ফলে স্যান্ডফ্লাইয়ের মধ্যে প্রতিরোধ ক্ষমতা তৈরি হয়েছে, তাই ডিডিটির পরিবর্তে আলফা-সাইপারমেথ্রিন নামক কীটনাশক ব্যবহার করা হচ্ছে। তবে, আলফা-সাইপারমেথ্রিন ডিডিটির মতোই কাজ করে, তাই এই কীটনাশকের বারবার সংস্পর্শে আসার ফলে সৃষ্ট চাপের কারণে স্যান্ডফ্লাইয়ের মধ্যে প্রতিরোধ ক্ষমতা তৈরির ঝুঁকি বেড়ে যায়। এই গবেষণায়, আমরা সিডিসি বোতল বায়োঅ্যাসে ব্যবহার করে বন্য মশা এবং তাদের এফ১ বংশধরদের সংবেদনশীলতা মূল্যায়ন করেছি।
আমরা ভারতের বিহার রাজ্যের মুজাফফরপুর জেলার ১০টি গ্রাম থেকে মশা সংগ্রহ করেছি। আটটি গ্রামে উচ্চ ক্ষমতাসম্পন্ন কীটনাশক ব্যবহার অব্যাহত ছিল।সাইপারমেথ্রিনঘরের ভেতরে স্প্রে করার ক্ষেত্রে, একটি গ্রাম উচ্চ-ক্ষমতাসম্পন্ন সাইপারমেথ্রিন ব্যবহার বন্ধ করে দিয়েছে এবং অন্য একটি গ্রাম কখনোই উচ্চ-ক্ষমতাসম্পন্ন সাইপারমেথ্রিন ব্যবহার করেনি। সংগৃহীত মশাগুলোকে একটি নির্দিষ্ট সময়ের জন্য পূর্ব-নির্ধারিত ডায়াগনস্টিক ডোজের (৪০ মিনিটের জন্য ৩ μg/ml) সংস্পর্শে আনা হয়েছিল এবং সংস্পর্শে আনার ২৪ ঘণ্টা পর মশা নিধনের হার ও মৃত্যুহার লিপিবদ্ধ করা হয়েছিল।
বন্য মশার মৃত্যুর হার ছিল ৯১.১৯% থেকে ৯৯.৪৭% এবং তাদের এফ১ প্রজন্মের মৃত্যুর হার ছিল ৯১.৭০% থেকে ৯৮.৮৯%। সংস্পর্শে আসার চব্বিশ ঘণ্টা পর, বন্য মশার মৃত্যুর হার ছিল ৮৯.৩৪% থেকে ৯৮.৯৩% এবং তাদের এফ১ প্রজন্মের মৃত্যুর হার ছিল ৯০.১৬% থেকে ৯৮.৩৩%।
এই গবেষণার ফলাফল ইঙ্গিত দেয় যে P. argentipes-এর মধ্যে প্রতিরোধ ক্ষমতা তৈরি হতে পারে, যা একবার নির্মূল হয়ে গেলে নিয়ন্ত্রণ বজায় রাখার জন্য অব্যাহত পর্যবেক্ষণ এবং সতর্কতার প্রয়োজনীয়তা নির্দেশ করে।
ভিসারাল লিশম্যানিয়াসিস (ভিএল), যা ভারতীয় উপমহাদেশে কালা-আজারের নামে পরিচিত, হলো লিশম্যানিয়া নামক ফ্ল্যাজেলেটেড প্রোটোজোয়ান দ্বারা সৃষ্ট একটি পরজীবী রোগ। এটি সংক্রমিত স্ত্রী স্যান্ড ফ্লাই (ডিপটেরা: মাইর্মেকোফাগা)-এর কামড়ের মাধ্যমে ছড়ায়। দক্ষিণ-পূর্ব এশিয়ায় স্যান্ড ফ্লাই হলো ভিএল-এর একমাত্র নিশ্চিত বাহক। ভারত ভিএল নির্মূলের লক্ষ্য অর্জনের কাছাকাছি পৌঁছেছে। তবে, নির্মূলের পর সংক্রমণের হার কম রাখতে এবং সম্ভাব্য সংক্রমণ প্রতিরোধ করার জন্য বাহকের সংখ্যা হ্রাস করা অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ।
দক্ষিণ-পূর্ব এশিয়ায় কৃত্রিম কীটনাশক ব্যবহার করে ঘরের ভেতরে কীটনাশক স্প্রে (IRS) করার মাধ্যমে মশা নিয়ন্ত্রণ করা হয়। সিলভারলেগস মশার গোপনে বিশ্রাম নেওয়ার স্বভাবের কারণে ঘরের ভেতরে কীটনাশক স্প্রে করার মাধ্যমে এটি কীটনাশক নিয়ন্ত্রণের জন্য একটি উপযুক্ত লক্ষ্যবস্তু [1]। ভারতে জাতীয় ম্যালেরিয়া নিয়ন্ত্রণ কর্মসূচির অধীনে ডাইক্লোরোডাইফিনাইলট্রাইক্লোরোইথেন (DDT) এর ঘরের ভেতরে কীটনাশক স্প্রে করার ফলে মশার সংখ্যা নিয়ন্ত্রণে এবং ভিসেরাল লিশম্যানিয়াসিসের (VL) ঘটনা উল্লেখযোগ্যভাবে কমাতে গুরুত্বপূর্ণ পার্শ্ব প্রতিক্রিয়া দেখা গেছে [2]। ভিসেরাল লিশম্যানিয়াসিসের এই অপরিকল্পিত নিয়ন্ত্রণ ভারতীয় ভিসেরাল লিশম্যানিয়াসিস নির্মূল কর্মসূচিকে সিলভারলেগস নিয়ন্ত্রণের প্রাথমিক পদ্ধতি হিসাবে ঘরের ভেতরে কীটনাশক স্প্রে গ্রহণ করতে উৎসাহিত করে। ২০০৫ সালে, ভারত, বাংলাদেশ এবং নেপাল সরকার ২০১৫ সালের মধ্যে ভিসেরাল লিশম্যানিয়াসিস নির্মূল করার লক্ষ্যে একটি সমঝোতা স্মারক স্বাক্ষর করে [3]। বাহক নিয়ন্ত্রণ এবং মানুষের ক্ষেত্রে দ্রুত রোগ নির্ণয় ও চিকিৎসার সমন্বয়ে নির্মূল প্রচেষ্টার লক্ষ্য ছিল ২০১৫ সালের মধ্যে সংহতকরণ পর্যায়ে প্রবেশ করা, যা পরবর্তীকালে ২০১৭ এবং তারপর ২০২০ সালে সংশোধিত হয়। [4] উপেক্ষিত গ্রীষ্মমন্ডলীয় রোগ নির্মূলের নতুন বিশ্বব্যাপী রোডম্যাপে 2030 সালের মধ্যে VL নির্মূল অন্তর্ভুক্ত রয়েছে।[5]
ভারত যেহেতু BCVD নির্মূল-পরবর্তী পর্যায়ে প্রবেশ করছে, তাই এটা নিশ্চিত করা অপরিহার্য যে বিটা-সাইপারমেথ্রিনের বিরুদ্ধে উল্লেখযোগ্য প্রতিরোধ ক্ষমতা যেন গড়ে না ওঠে। প্রতিরোধের কারণ হলো DDT এবং সাইপারমেথ্রিন উভয়েরই কার্যপ্রণালী একই, অর্থাৎ, তারা VGSC প্রোটিনকে লক্ষ্য করে [21]। সুতরাং, অত্যন্ত শক্তিশালী সাইপারমেথ্রিনের নিয়মিত সংস্পর্শে আসার ফলে সৃষ্ট চাপের কারণে স্যান্ডফ্লাইয়ের মধ্যে প্রতিরোধ ক্ষমতা গড়ে ওঠার ঝুঁকি বেড়ে যেতে পারে। তাই এই কীটনাশকের বিরুদ্ধে প্রতিরোধী সম্ভাব্য স্যান্ডফ্লাই জনগোষ্ঠীকে পর্যবেক্ষণ ও শনাক্ত করা অপরিহার্য। এই প্রেক্ষাপটে, এই গবেষণার উদ্দেশ্য ছিল চৌবে এবং তার সহকর্মীদের দ্বারা নির্ধারিত ডায়াগনস্টিক ডোজ এবং সংস্পর্শের সময়কাল ব্যবহার করে বন্য স্যান্ডফ্লাইয়ের সংবেদনশীলতার অবস্থা পর্যবেক্ষণ করা। [20] ভারতের বিহারের মুজাফফরপুর জেলার বিভিন্ন গ্রামের P. argentipes-এর উপর গবেষণা করেছিলেন, যেখানে সাইপারমেথ্রিন দিয়ে শোধন করা ইনডোর স্প্রেয়িং সিস্টেম (ক্রমাগত IPS গ্রাম) ক্রমাগত ব্যবহার করা হতো। সিডিসি বোতল বায়োঅ্যাসে ব্যবহার করে, সাইপারমেথ্রিন-মিশ্রিত অভ্যন্তরীণ স্প্রে ব্যবস্থা ব্যবহার বন্ধ করে দেওয়া গ্রাম (প্রাক্তন আইপিএস গ্রাম) এবং যারা কখনও সাইপারমেথ্রিন-মিশ্রিত অভ্যন্তরীণ স্প্রে ব্যবস্থা ব্যবহার করেনি (নন-আইপিএস গ্রাম) সেখানকার বন্য পি. আর্জেন্টাইপস-এর সংবেদনশীলতার অবস্থা তুলনা করা হয়েছিল।
গবেষণাটির জন্য দশটি গ্রাম নির্বাচন করা হয়েছিল (চিত্র ১; সারণি ১), যার মধ্যে আটটি গ্রামে সিন্থেটিক পাইরেথ্রয়েড (হাইপারমেথ্রিন; যা ‘ধারাবাহিক হাইপারমেথ্রিন গ্রাম’ হিসেবে চিহ্নিত) ক্রমাগতভাবে ঘরের ভেতরে স্প্রে করার ইতিহাস ছিল এবং গত ৩ বছরে সেখানে ভিএল (ভিসারাল লিশম্যানিয়াসিস)-এর রোগী (অন্তত একটি রোগী) ছিল। গবেষণায় অন্তর্ভুক্ত বাকি দুটি গ্রামের মধ্যে, যে গ্রামে বিটা-সাইপারমেথ্রিন ঘরের ভেতরে স্প্রে করা হয়নি (যে গ্রামে ‘ইনডোর স্প্রেয়িং-বিহীন গ্রাম’ ছিল না) সেটিকে নিয়ন্ত্রক গ্রাম হিসেবে এবং যে গ্রামে মাঝে মাঝে বিটা-সাইপারমেথ্রিন ঘরের ভেতরে স্প্রে করা হতো (যে গ্রামে ‘মাঝে মাঝে ইনডোর স্প্রেয়িং গ্রাম/পূর্বতন ইনডোর স্প্রেয়িং গ্রাম’ ছিল) সেটিকে নিয়ন্ত্রক গ্রাম হিসেবে নির্বাচন করা হয়। স্বাস্থ্য বিভাগ ও ইনডোর স্প্রেয়িং টিমের সাথে সমন্বয় এবং মুজাফফরপুর জেলায় ইনডোর স্প্রেয়িং মাইক্রো অ্যাকশন প্ল্যানের বৈধতা যাচাইয়ের ভিত্তিতে এই গ্রামগুলো নির্বাচন করা হয়েছিল।
মুজাফফরপুর জেলার ভৌগোলিক মানচিত্র, যেখানে গবেষণায় অন্তর্ভুক্ত গ্রামগুলির (১-১০) অবস্থান দেখানো হয়েছে। গবেষণার স্থানসমূহ: ১, মণিফুলখাহা; ২, রামদাস মাঝৌলি; ৩, মধুবাণী; ৪, আনন্দপুর হারুনি; ৫, পান্ডে; ৬, হীরাপুর; ৭, মাধোপুর হাজারী; ৮, হামিদপুর; ৯, নুনফারা; ১০, সিমারা। মানচিত্রটি কিউজিআইএস (QGIS) সফটওয়্যার (সংস্করণ ৩.৩০.৩) এবং ওপেন অ্যাসেসমেন্ট শেপফাইল (Open Assessment Shapefile) ব্যবহার করে প্রস্তুত করা হয়েছে।
চৌবে এট আল. [20] এবং ডেনলিঙ্গার এট আল. [22] এর পদ্ধতি অনুসারে এক্সপোজার পরীক্ষার জন্য বোতলগুলি প্রস্তুত করা হয়েছিল। সংক্ষেপে, পরীক্ষার একদিন আগে ৫০০ মিলি কাচের বোতল প্রস্তুত করা হয়েছিল এবং বোতলের তলা, দেয়াল এবং ঢাকনায় কীটনাশকের অ্যাসিটোন দ্রবণ (২.০ মিলি) প্রয়োগ করে বোতলগুলির ভিতরের দেয়ালে নির্দেশিত কীটনাশকের (α-সাইপারমেথ্রিনের ডায়াগনস্টিক ডোজ ছিল ৩ μg/mL) প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল। এরপর প্রতিটি বোতল একটি যান্ত্রিক রোলারে ৩০ মিনিটের জন্য শুকানো হয়েছিল। এই সময়ে, অ্যাসিটোন বাষ্পীভূত হতে দেওয়ার জন্য ধীরে ধীরে ঢাকনাটি খোলা হয়েছিল। ৩০ মিনিট শুকানোর পর, ঢাকনাটি সরিয়ে বোতলটি ততক্ষণ ঘোরানো হয়েছিল যতক্ষণ না সমস্ত অ্যাসিটোন বাষ্পীভূত হয়ে যায়। এরপর বোতলগুলি সারারাত শুকানোর জন্য খোলা রাখা হয়েছিল। প্রতিটি পুনরাবৃত্তিমূলক পরীক্ষার জন্য, একটি বোতল, যা কন্ট্রোল হিসাবে ব্যবহৃত হয়েছিল, তাতে ২.০ মিলি অ্যাসিটোনের প্রলেপ দেওয়া হয়েছিল। ডেনলিঙ্গার এট আল. দ্বারা বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে যথাযথভাবে পরিষ্কার করার পর সমস্ত বোতল পরীক্ষা জুড়ে পুনরায় ব্যবহার করা হয়েছিল। এবং বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থা [22, 23]।
কীটনাশক তৈরির পরের দিন, খাঁচা থেকে ৩০-৪০টি বুনো মশা (ক্ষুধার্ত স্ত্রী মশা) শিশিতে রাখা অবস্থায় বের করে প্রতিটি শিশিতে আলতো করে ফুঁ দিয়ে ঢোকানো হয়। কন্ট্রোল বোতলসহ প্রতিটি কীটনাশক-প্রলিপ্ত বোতলের জন্য প্রায় একই সংখ্যক মাছি ব্যবহার করা হয়েছিল। প্রতিটি গ্রামে এই প্রক্রিয়াটি অন্তত পাঁচ থেকে ছয়বার পুনরাবৃত্তি করা হয়। কীটনাশকের সংস্পর্শে আসার ৪০ মিনিট পর, কতগুলো মাছি অচেতন হয়ে পড়েছিল তা লিপিবদ্ধ করা হয়। সমস্ত মাছিকে একটি যান্ত্রিক অ্যাসপিরেটরের সাহায্যে ধরা হয়, মিহি জাল দিয়ে ঢাকা এক পাইন্ট কার্ডবোর্ডের পাত্রে রাখা হয় এবং অপরিশোধিত কলোনিগুলোর মতো একই আর্দ্রতা ও তাপমাত্রার পরিবেশে একই খাদ্য উৎস (৩০% চিনির দ্রবণে ভেজানো তুলার বল) সহ একটি পৃথক ইনকিউবেটরে রাখা হয়। কীটনাশকের সংস্পর্শে আসার ২৪ ঘণ্টা পর মৃত্যুহার লিপিবদ্ধ করা হয়। প্রজাতির পরিচয় নিশ্চিত করার জন্য সমস্ত মশা ব্যবচ্ছেদ করে পরীক্ষা করা হয়। একই পদ্ধতি F1 বংশধর মাছিদের ক্ষেত্রেও প্রয়োগ করা হয়। সংস্পর্শে আসার ২৪ ঘণ্টা পর অচেতন হয়ে পড়া এবং মৃত্যুহার লিপিবদ্ধ করা হয়। যদি কন্ট্রোল বোতলগুলিতে মৃত্যুহার < ৫% হয়, তবে পুনরাবৃত্তির ক্ষেত্রে মৃত্যুহারের কোনো সংশোধন করা হয়নি। যদি কন্ট্রোল বোতলে মৃত্যুহার ≥ 5% এবং ≤ 20% হয়, তবে সেই রেপ্লিকেটের টেস্ট বোতলগুলিতে মৃত্যুহার অ্যাবটের সূত্র ব্যবহার করে সংশোধন করা হয়েছিল। যদি কন্ট্রোল গ্রুপে মৃত্যুহার 20% ছাড়িয়ে যায়, তবে সম্পূর্ণ টেস্ট গ্রুপটি বাতিল করা হয়েছিল [24, 25, 26]।
বন্য পরিবেশে ধরা P. argentipes মশার গড় মৃত্যুহার। ত্রুটি দণ্ডগুলি গড়ের প্রমিত ত্রুটি উপস্থাপন করে। গ্রাফের সাথে দুটি লাল অনুভূমিক রেখার ছেদবিন্দু (যথাক্রমে 90% এবং 98% মৃত্যুহার) সেই মৃত্যুহারের পরিসর নির্দেশ করে যেখানে প্রতিরোধ ক্ষমতা তৈরি হতে পারে।[25]
বন্য P. argentipes এর F1 বংশধরের গড় মৃত্যুহার। ত্রুটি বারগুলি গড়ের প্রমাণ ত্রুটি উপস্থাপন করে। দুটি লাল অনুভূমিক রেখা (যথাক্রমে 90% এবং 98% মৃত্যুহার) দ্বারা ছেদ করা বক্ররেখাগুলি মৃত্যুহারের পরিসরকে প্রতিনিধিত্ব করে যার উপর প্রতিরোধ ক্ষমতা তৈরি হতে পারে [25]।
নিয়ন্ত্রণ/আইআরএস-বিহীন গ্রাম (মানিফুলকাহা)-এর মশাগুলোকে কীটনাশকের প্রতি অত্যন্ত সংবেদনশীল বলে পাওয়া গেছে। নকডাউন এবং এক্সপোজারের ২৪ ঘণ্টা পর বন্য মশার গড় মৃত্যুহার (±এসই) ছিল যথাক্রমে ৯৯.৪৭ ± ০.৫২% এবং ৯৮.৯৩ ± ০.৬৫%, এবং এফ১ বংশধরের গড় মৃত্যুহার ছিল যথাক্রমে ৯৮.৮৯ ± ১.১১% এবং ৯৮.৩৩ ± ১.১১% (সারণি ২, ৩)।
এই গবেষণার ফলাফল ইঙ্গিত করে যে, যেসব গ্রামে সিন্থেটিক পাইরেথ্রয়েড (SP) α-সাইপারমেথ্রিন নিয়মিতভাবে ব্যবহৃত হয়েছে, সেখানে রূপালি-পা স্যান্ড ফ্লাইগুলি এই কীটনাশকের বিরুদ্ধে প্রতিরোধ ক্ষমতা গড়ে তুলতে পারে। এর বিপরীতে, যেসব গ্রাম আইআরএস/নিয়ন্ত্রণ কর্মসূচির আওতায় ছিল না, সেখান থেকে সংগৃহীত রূপালি-পা স্যান্ড ফ্লাইগুলিকে অত্যন্ত সংবেদনশীল বলে পাওয়া গেছে। ব্যবহৃত কীটনাশকের কার্যকারিতা পর্যবেক্ষণের জন্য বন্য স্যান্ড ফ্লাই জনগোষ্ঠীর সংবেদনশীলতা পর্যবেক্ষণ করা গুরুত্বপূর্ণ, কারণ এই তথ্য কীটনাশক প্রতিরোধ ক্ষমতা ব্যবস্থাপনায় সহায়তা করতে পারে। বিহারের স্থানীয় এলাকাগুলির স্যান্ড ফ্লাইগুলিতে ডিডিটি প্রতিরোধের উচ্চ মাত্রা নিয়মিতভাবে রিপোর্ট করা হয়েছে, যা এই কীটনাশক ব্যবহার করে আইআরএস-এর ঐতিহাসিক নির্বাচনী চাপের কারণে হয়েছে [1]।
আমরা দেখেছি যে পি. আর্জেন্টাইপস পাইরেথ্রয়েডের প্রতি অত্যন্ত সংবেদনশীল, এবং ভারত, বাংলাদেশ ও নেপালে পরিচালিত মাঠ পর্যায়ের পরীক্ষায় দেখা গেছে যে সাইপারমেথ্রিন বা ডেল্টামেথ্রিনের সাথে একত্রে ব্যবহার করলে আইআরএস-এর উচ্চ কীটতাত্ত্বিক কার্যকারিতা রয়েছে [১৯, ২৬, ২৭, ২৮, ২৯]। সম্প্রতি, রায় প্রমুখ [১৮] জানিয়েছেন যে নেপালে পি. আর্জেন্টাইপস পাইরেথ্রয়েডের বিরুদ্ধে প্রতিরোধ ক্ষমতা অর্জন করেছে। আমাদের মাঠ পর্যায়ের সংবেদনশীলতা সমীক্ষায় দেখা গেছে যে, আইআরএস-এর সংস্পর্শে না আসা গ্রামগুলি থেকে সংগৃহীত সিলভারলেগড স্যান্ড ফ্লাইগুলি অত্যন্ত সংবেদনশীল ছিল, কিন্তু মাঝে মাঝে/পূর্বে আইআরএস এবং ক্রমাগত আইআরএস থাকা গ্রামগুলি থেকে সংগৃহীত মাছিগুলি (আনন্দপুর-হারুনির স্যান্ড ফ্লাইগুলি ছাড়া বাকিদের ক্ষেত্রে মৃত্যুর হার ছিল ৯০% থেকে ৯৭%, যেখানে সংস্পর্শে আসার ২৪ ঘণ্টা পরে মৃত্যুর হার ছিল ৮৯.৩৪%) সম্ভবত অত্যন্ত কার্যকর সাইপারমেথ্রিনের [২৫] প্রতি প্রতিরোধী ছিল। এই প্রতিরোধ ক্ষমতা বিকাশের একটি সম্ভাব্য কারণ হল ইনডোর রুটিন স্প্রেয়িং (IRS) এবং কেস-ভিত্তিক স্থানীয় স্প্রেয়িং প্রোগ্রামগুলির দ্বারা সৃষ্ট চাপ, যা স্থানীয়ভাবে প্রচলিত এলাকা/ব্লক/গ্রামে কালা-আজারের প্রাদুর্ভাব ব্যবস্থাপনার জন্য আদর্শ পদ্ধতি (প্রাদুর্ভাব তদন্ত এবং ব্যবস্থাপনার জন্য আদর্শ অপারেটিং পদ্ধতি [30])। এই গবেষণার ফলাফল অত্যন্ত কার্যকর সাইপারমেথ্রিনের বিরুদ্ধে নির্বাচনী চাপের বিকাশের প্রাথমিক ইঙ্গিত প্রদান করে। দুর্ভাগ্যবশত, তুলনার জন্য সিডিসি বোতল বায়োঅ্যাসে ব্যবহার করে প্রাপ্ত এই অঞ্চলের ঐতিহাসিক সংবেদনশীলতার ডেটা উপলব্ধ নেই; পূর্ববর্তী সমস্ত গবেষণায় WHO কীটনাশক-সিক্ত কাগজ ব্যবহার করে পি. আর্জেন্টাইপসের সংবেদনশীলতা পর্যবেক্ষণ করা হয়েছে। WHO টেস্ট স্ট্রিপগুলিতে কীটনাশকের ডায়াগনস্টিক ডোজগুলি ম্যালেরিয়ার বাহক (অ্যানোফিলিস গ্যাম্বি) এর বিরুদ্ধে ব্যবহারের জন্য কীটনাশকের প্রস্তাবিত সনাক্তকরণ ঘনত্ব, এবং স্যান্ডফ্লাইয়ের ক্ষেত্রে এই ঘনত্বগুলির কার্যকরী প্রয়োগযোগ্যতা অস্পষ্ট কারণ স্যান্ডফ্লাই মশার চেয়ে কম ঘন ঘন উড়ে এবং বায়োঅ্যাসে সাবস্ট্রেটের সংস্পর্শে বেশি সময় কাটায় [23]।
নেপালের ভিএল-প্রবণ এলাকায় ১৯৯২ সাল থেকে স্যান্ডফ্লাই নিয়ন্ত্রণের জন্য সিন্থেটিক পাইরেথ্রয়েড, এসপি আলফা-সাইপারমেথ্রিন এবং ল্যাম্বডা-সাইহালোথ্রিনের সাথে পর্যায়ক্রমে ব্যবহৃত হয়ে আসছে [31], এবং ডেল্টামেথ্রিনও বাংলাদেশে ২০১২ সাল থেকে ব্যবহৃত হচ্ছে [32]। যেসব এলাকায় দীর্ঘদিন ধরে সিন্থেটিক পাইরেথ্রয়েড ব্যবহৃত হয়ে আসছে, সেখানকার সিলভারলেগড স্যান্ডফ্লাইয়ের বন্য জনগোষ্ঠীর মধ্যে ফিনোটাইপিক প্রতিরোধ ক্ষমতা শনাক্ত করা হয়েছে [18, 33, 34]। ইন্ডিয়ান স্যান্ডফ্লাইয়ের বন্য জনগোষ্ঠীর মধ্যে একটি নন-সিনোনিমাস মিউটেশন (L1014F) শনাক্ত করা হয়েছে এবং এটি ডিডিটি-র প্রতিরোধের সাথে সম্পর্কিত, যা থেকে বোঝা যায় যে পাইরেথ্রয়েড প্রতিরোধ ক্ষমতা আণবিক স্তরে তৈরি হয়, কারণ ডিডিটি এবং পাইরেথ্রয়েড (আলফা-সাইপারমেথ্রিন) উভয়ই পোকামাকড়ের স্নায়ুতন্ত্রের একই জিনকে লক্ষ্য করে [17, 34]। অতএব, নির্মূলকরণ ও নির্মূল-পরবর্তী সময়ে সাইপারমেথ্রিনের প্রতি সংবেদনশীলতার পদ্ধতিগত মূল্যায়ন এবং মশার প্রতিরোধ ক্ষমতা পর্যবেক্ষণ অপরিহার্য।
এই গবেষণার একটি সম্ভাব্য সীমাবদ্ধতা হলো, আমরা সংবেদনশীলতা পরিমাপের জন্য সিডিসি ভায়াল বায়োঅ্যাসে ব্যবহার করেছি, কিন্তু সমস্ত তুলনার জন্য ডব্লিউএইচও বায়োঅ্যাসে কিট ব্যবহার করে করা পূর্ববর্তী গবেষণার ফলাফল ব্যবহার করা হয়েছে। দুটি বায়োঅ্যাসের ফলাফল সরাসরি তুলনীয় নাও হতে পারে কারণ সিডিসি ভায়াল বায়োঅ্যাসে রোগ নির্ণয়ের সময়কালের শেষে নকডাউন পরিমাপ করে, যেখানে ডব্লিউএইচও কিট বায়োঅ্যাসে সংস্পর্শের ২৪ বা ৭২ ঘন্টা পরে মৃত্যুহার পরিমাপ করে (পরেরটি ধীর-কার্যকরী যৌগের জন্য) [35]। আরেকটি সম্ভাব্য সীমাবদ্ধতা হলো, এই গবেষণায় একটি নন-আইআরএস এবং একটি নন-আইআরএস/প্রাক্তন আইআরএস গ্রামের তুলনায় আইআরএস গ্রামের সংখ্যা কম। আমরা ধরে নিতে পারি না যে একটি জেলার পৃথক গ্রামগুলিতে পর্যবেক্ষণ করা মশা বাহকের সংবেদনশীলতার মাত্রা বিহারের অন্যান্য গ্রাম এবং জেলার সংবেদনশীলতার মাত্রার প্রতিনিধিত্ব করে। ভারত যখন লিউকেমিয়া ভাইরাস নির্মূল-পরবর্তী পর্যায়ে প্রবেশ করছে, তখন প্রতিরোধের উল্লেখযোগ্য বিকাশ রোধ করা অপরিহার্য। বিভিন্ন জেলা, ব্লক এবং ভৌগোলিক এলাকার স্যান্ডফ্লাই জনগোষ্ঠীর মধ্যে প্রতিরোধের দ্রুত পর্যবেক্ষণ প্রয়োজন। এই গবেষণায় উপস্থাপিত তথ্য প্রাথমিক এবং বিশ্ব স্বাস্থ্য সংস্থা [35] দ্বারা প্রকাশিত সনাক্তকরণ ঘনত্বের সাথে তুলনা করে যাচাই করা উচিত, যাতে স্যান্ডফ্লাইয়ের সংখ্যা কম রাখা এবং লিউকেমিয়া ভাইরাস নির্মূলকে সমর্থন করার জন্য ভেক্টর নিয়ন্ত্রণ কর্মসূচি সংশোধন করার আগে এই অঞ্চলগুলিতে P. argentipes এর সংবেদনশীলতার অবস্থা সম্পর্কে আরও নির্দিষ্ট ধারণা পাওয়া যায়।
লিউকোসিস ভাইরাসের বাহক মশা পি. আর্জেন্টাইপস, অত্যন্ত কার্যকরী সাইপারমেথ্রিনের বিরুদ্ধে প্রতিরোধের প্রাথমিক লক্ষণ দেখাতে শুরু করতে পারে। বাহক নিয়ন্ত্রণ কার্যক্রমের মহামারী সংক্রান্ত প্রভাব বজায় রাখার জন্য পি. আর্জেন্টাইপস-এর বন্য জনগোষ্ঠীর মধ্যে কীটনাশক প্রতিরোধের নিয়মিত পর্যবেক্ষণ প্রয়োজন। কীটনাশক প্রতিরোধ মোকাবিলা করতে এবং ভারতে লিউকোসিস ভাইরাস নির্মূলে সহায়তা করার জন্য বিভিন্ন কার্যপ্রণালীর কীটনাশকের আবর্তন এবং/অথবা নতুন কীটনাশকের মূল্যায়ন ও নিবন্ধন প্রয়োজন ও সুপারিশকৃত।