ছোট জলজ ট্যাডপোলের জন্য বাণিজ্যিক সাইপারমেথ্রিন প্রস্তুতির মৃত্যুহার এবং বিষাক্ততা

এই গবেষণায় বাণিজ্যিক ব্যবহারের প্রাণঘাতীতা, সূক্ষ্মতা এবং বিষাক্ততার মূল্যায়ন করা হয়েছেসাইপারমেথ্রিনঅ্যানুরান ট্যাডপোলের জন্য ফর্মুলেশন। তীব্র পরীক্ষায়, 100-800 μg/L ঘনত্ব 96 ঘন্টা ধরে পরীক্ষা করা হয়েছিল। দীর্ঘস্থায়ী পরীক্ষায়, প্রাকৃতিকভাবে ঘটে যাওয়া সাইপারমেথ্রিন ঘনত্ব (1, 3, 6, এবং 20 μg/L) মৃত্যুর জন্য পরীক্ষা করা হয়েছিল, তারপরে মাইক্রোনিউক্লিয়াস পরীক্ষা এবং 7 দিনের জন্য লোহিত রক্তকণিকার নিউক্লিয়ার অস্বাভাবিকতা পরীক্ষা করা হয়েছিল। ট্যাডপোলের জন্য বাণিজ্যিক সাইপারমেথ্রিন ফর্মুলেশনের LC50 ছিল 273.41 μg L−1। দীর্ঘস্থায়ী পরীক্ষায়, সর্বোচ্চ ঘনত্ব (20 μg L−1) 50% এরও বেশি মৃত্যুহারের কারণ হয়েছিল, কারণ এটি পরীক্ষিত অর্ধেক ট্যাডপোলকে হত্যা করেছিল। মাইক্রোনিউক্লিয়াস পরীক্ষায় 6 এবং 20 μg L−1 এ উল্লেখযোগ্য ফলাফল দেখানো হয়েছিল এবং বেশ কয়েকটি নিউক্লিয়ার অস্বাভাবিকতা সনাক্ত করা হয়েছিল, যা ইঙ্গিত করে যে বাণিজ্যিক সাইপারমেথ্রিন ফর্মুলেশনে P. gracilis এর বিরুদ্ধে জিনোটক্সিক সম্ভাবনা রয়েছে। সাইপারমেথ্রিন এই প্রজাতির জন্য একটি উচ্চ ঝুঁকিপূর্ণ, যা ইঙ্গিত দেয় যে এটি একাধিক সমস্যা সৃষ্টি করতে পারে এবং স্বল্প ও দীর্ঘমেয়াদে এই বাস্তুতন্ত্রের গতিশীলতাকে প্রভাবিত করতে পারে। অতএব, এটি উপসংহারে পৌঁছানো যেতে পারে যে বাণিজ্যিক সাইপারমেথ্রিন ফর্মুলেশনগুলি পি. গ্র্যাসিলিসের উপর বিষাক্ত প্রভাব ফেলে।
কৃষি কার্যক্রমের ক্রমাগত সম্প্রসারণ এবং এর নিবিড় প্রয়োগের কারণেকীটপতঙ্গ নিয়ন্ত্রণপরিমাপের ক্ষেত্রে, জলজ প্রাণীরা প্রায়শই কীটনাশকের সংস্পর্শে আসে1,2. কৃষিক্ষেত্রের কাছাকাছি জল সম্পদের দূষণ উভচর প্রাণীর মতো লক্ষ্যবস্তুবিহীন জীবের বিকাশ এবং বেঁচে থাকার উপর প্রভাব ফেলতে পারে।
পরিবেশগত ম্যাট্রিক্স মূল্যায়নে উভচর প্রাণী ক্রমশ গুরুত্বপূর্ণ হয়ে উঠছে। জটিল জীবনচক্র, দ্রুত লার্ভা বৃদ্ধির হার, ট্রফিক অবস্থা, প্রবেশযোগ্য ত্বক10,11, প্রজননের জন্য পানির উপর নির্ভরতা12 এবং অরক্ষিত ডিম11,13,14 এর মতো অনন্য বৈশিষ্ট্যের কারণে অনুরানদের পরিবেশ দূষণকারীর ভালো জৈব সূচক হিসেবে বিবেচনা করা হয়। ছোট জল ব্যাঙ (Physalaemus gracilis), যা সাধারণত কাঁদতে থাকা ব্যাঙ নামে পরিচিত, কীটনাশক দূষণের একটি জৈব সূচক প্রজাতি হিসেবে দেখানো হয়েছে4,5,6,7,15। এই প্রজাতিটি আর্জেন্টিনা, উরুগুয়ে, প্যারাগুয়ে এবং ব্রাজিলের স্থায়ী জল, সুরক্ষিত এলাকা বা পরিবর্তনশীল আবাসস্থল সহ এলাকায় পাওয়া যায়1617 এবং IUCN শ্রেণীবিভাগ অনুসারে এর বিস্তৃত বিতরণ এবং বিভিন্ন আবাসস্থলের সহনশীলতার কারণে স্থিতিশীল বলে বিবেচিত হয়18।
সাইপারমেথ্রিনের সংস্পর্শে আসার পর উভচর প্রাণীদের মধ্যে অতি-মারাত্মক প্রভাবের খবর পাওয়া গেছে, যার মধ্যে রয়েছে ট্যাডপোলের আচরণগত, রূপগত এবং জৈব রাসায়নিক পরিবর্তন23,24,25, পরিবর্তিত মৃত্যুহার এবং রূপান্তরের সময়, এনজাইমেটিক পরিবর্তন, ডিম ফুটে বের হওয়ার সাফল্য হ্রাস24,25, হাইপারঅ্যাকটিভিটি26, কোলিনস্টেরেজ কার্যকলাপের বাধা27 এবং সাঁতারের কর্মক্ষমতা পরিবর্তন7,28। তবে, উভচর প্রাণীদের মধ্যে সাইপারমেথ্রিনের জিনোটক্সিক প্রভাবের গবেষণা সীমিত। অতএব, সাইপারমেথ্রিনের প্রতি অনুরান প্রজাতির সংবেদনশীলতা মূল্যায়ন করা গুরুত্বপূর্ণ।
পরিবেশ দূষণ উভচর প্রাণীর স্বাভাবিক বৃদ্ধি এবং বিকাশকে প্রভাবিত করে, তবে সবচেয়ে গুরুতর প্রতিকূল প্রভাব হল কীটনাশকের সংস্পর্শে আসার ফলে ডিএনএর জিনগত ক্ষতি। রক্তকণিকার রূপবিদ্যা বিশ্লেষণ দূষণ এবং বন্য প্রজাতির উপর পদার্থের সম্ভাব্য বিষাক্ততার একটি গুরুত্বপূর্ণ জৈব সূচক। মাইক্রোনিউক্লিয়াস পরীক্ষা পরিবেশে রাসায়নিকের জিনোটক্সিসিটি নির্ধারণের জন্য সবচেয়ে বেশি ব্যবহৃত পদ্ধতিগুলির মধ্যে একটি। এটি একটি দ্রুত, কার্যকর এবং সস্তা পদ্ধতি যা উভচর প্রাণীর মতো জীবের রাসায়নিক দূষণের একটি ভাল সূচক 31,32 এবং জিনোটক্সিন দূষণকারীর সংস্পর্শ সম্পর্কে তথ্য প্রদান করতে পারে 33।
এই গবেষণার উদ্দেশ্য ছিল মাইক্রোনিউক্লিয়াস পরীক্ষা এবং পরিবেশগত ঝুঁকি মূল্যায়ন ব্যবহার করে ছোট জলজ ট্যাডপোলগুলিতে বাণিজ্যিক সাইপারমেথ্রিন ফর্মুলেশনের বিষাক্ত সম্ভাবনা মূল্যায়ন করা।
পরীক্ষার তীব্র সময়কালে বাণিজ্যিক সাইপারমেথ্রিনের বিভিন্ন ঘনত্বের সংস্পর্শে আসা পি. গ্র্যাসিলিস ট্যাডপোলের ক্রমবর্ধমান মৃত্যুহার (%)।
দীর্ঘস্থায়ী পরীক্ষার সময় বাণিজ্যিক সাইপারমেথ্রিনের বিভিন্ন ঘনত্বের সংস্পর্শে আসা পি. গ্র্যাসিলিস ট্যাডপোলের ক্রমবর্ধমান মৃত্যুহার (%)।
সাইপারমেথ্রিনের বিভিন্ন ঘনত্বের (6 এবং 20 μg/L) সংস্পর্শে আসা উভচর প্রাণীদের মধ্যে জিনোটক্সিক প্রভাবের ফলে উচ্চ মৃত্যুহার লক্ষ্য করা গেছে, যা মাইক্রোনিউক্লিয়াস (MN) এর উপস্থিতি এবং এরিথ্রোসাইটগুলিতে নিউক্লিয়ার অস্বাভাবিকতা দ্বারা প্রমাণিত। MN গঠন মাইটোসিসে ত্রুটি নির্দেশ করে এবং মাইক্রোটিউবুলের সাথে ক্রোমোজোমের দুর্বল বন্ধন, ক্রোমোজোম গ্রহণ এবং পরিবহনের জন্য দায়ী প্রোটিন কমপ্লেক্সে ত্রুটি, ক্রোমোজোম পৃথকীকরণে ত্রুটি এবং DNA ক্ষতি মেরামতে ত্রুটির সাথে সম্পর্কিত 38,39 এবং কীটনাশক-প্ররোচিত অক্সিডেটিভ স্ট্রেসের সাথে সম্পর্কিত হতে পারে40,41। মূল্যায়ন করা সমস্ত ঘনত্বে অন্যান্য অস্বাভাবিকতা পরিলক্ষিত হয়েছিল। সাইপারমেথ্রিনের ঘনত্ব বৃদ্ধির ফলে লোহিত রক্তকণিকায় সর্বনিম্ন (1 μg/L) এবং সর্বোচ্চ (20 μg/L) মাত্রায় যথাক্রমে 5% এবং 20% নিউক্লিয়ার অস্বাভাবিকতা বৃদ্ধি পেয়েছে। উদাহরণস্বরূপ, একটি প্রজাতির DNA-তে পরিবর্তন স্বল্প এবং দীর্ঘমেয়াদী উভয় ধরণের বেঁচে থাকার জন্য গুরুতর পরিণতি ঘটাতে পারে, যার ফলে জনসংখ্যা হ্রাস, প্রজনন ক্ষমতা পরিবর্তিত, আন্তঃপ্রজনন, জিনগত বৈচিত্র্য হ্রাস এবং পরিবর্তিত স্থানান্তর হার দেখা দিতে পারে। এই সমস্ত কারণ প্রজাতির বেঁচে থাকা এবং রক্ষণাবেক্ষণের উপর প্রভাব ফেলতে পারে42,43। এরিথ্রয়েড অস্বাভাবিকতার গঠন সাইটোকাইনেসিসে বাধা নির্দেশ করতে পারে, যার ফলে অস্বাভাবিক কোষ বিভাজন (বাইনিউক্লিয়েটেড এরিথ্রোসাইট)44,45 হয়; বহুস্তরীভূত নিউক্লিয়াস হল একাধিক লোব সহ নিউক্লিয়ার ঝিল্লির প্রোট্রুশন46, যখন অন্যান্য এরিথ্রয়েড অস্বাভাবিকতা ডিএনএ পরিবর্ধনের সাথে যুক্ত হতে পারে, যেমন নিউক্লিয়ার কিডনি/ব্লেবস47। অ্যানিউক্লিয়েটেড এরিথ্রোসাইটগুলির উপস্থিতি অক্সিজেন পরিবহনের প্রতিবন্ধকতা নির্দেশ করতে পারে, বিশেষ করে দূষিত জলে48,49। অ্যাপোপটোসিস কোষের মৃত্যু নির্দেশ করে50।
অন্যান্য গবেষণায় সাইপারমেথ্রিনের জিনোটক্সিক প্রভাবও প্রমাণিত হয়েছে। কাবানা এট আল.৫১ সাইপারমেথ্রিনের উচ্চ ঘনত্বের (৫০০০ এবং ১০,০০০ μg L−১) ৯৬ ঘন্টা ধরে এক্সপোজারের পরে ওডন্টোফ্রিনাস আমেরিকানাস কোষে মাইক্রোনিউক্লিয়াস এবং দ্বিনিউক্লিয়েটেড কোষ এবং অ্যাপোপটোটিক কোষের মতো নিউক্লিয়ার পরিবর্তনের উপস্থিতি প্রমাণ করেছেন। P. biligonigerus52 এবং Rhinella arenarum53-তেও সাইপারমেথ্রিন-প্ররোচিত অ্যাপোপটোসিস সনাক্ত করা হয়েছিল। এই ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে সাইপারমেথ্রিনের বিভিন্ন জলজ জীবের উপর জিনোটক্সিক প্রভাব রয়েছে এবং MN এবং ENA পরীক্ষা উভচর প্রাণীর উপর সাবলেথাল প্রভাবের একটি সূচক হতে পারে এবং বিষাক্ত পদার্থের সংস্পর্শে আসা স্থানীয় প্রজাতি এবং বন্য জনসংখ্যার ক্ষেত্রে প্রযোজ্য হতে পারে।
সাইপারমেথ্রিনের বাণিজ্যিক ফর্মুলেশনগুলি উচ্চ পরিবেশগত ঝুঁকি তৈরি করে (তীব্র এবং দীর্ঘস্থায়ী উভয়), যার HQ US Environmental Protection Agency (EPA) স্তর 54 অতিক্রম করে যা পরিবেশে উপস্থিত থাকলে প্রজাতিগুলিকে প্রতিকূলভাবে প্রভাবিত করতে পারে। দীর্ঘস্থায়ী ঝুঁকি মূল্যায়নে, মৃত্যুর জন্য NOEC ছিল 3 μg L−1, যা নিশ্চিত করে যে জলে পাওয়া ঘনত্ব প্রজাতির জন্য ঝুঁকি তৈরি করতে পারে55। এন্ডোসালফান এবং সাইপারমেথ্রিনের মিশ্রণের সংস্পর্শে আসা R. arenarum লার্ভার জন্য মারাত্মক NOEC ছিল 168 ঘন্টা পরে 500 μg L−1; এই মান 336 ঘন্টা পরে 0.0005 μg L−1 এ কমে যায়। লেখকরা দেখান যে যত বেশি সময় ধরে এক্সপোজার হবে, প্রজাতির জন্য ক্ষতিকারক ঘনত্ব তত কম হবে। এটিও তুলে ধরা গুরুত্বপূর্ণ যে একই এক্সপোজারের সময় NOEC মান P. gracilis এর তুলনায় বেশি ছিল, যা ইঙ্গিত করে যে সাইপারমেথ্রিনের প্রতি প্রজাতির প্রতিক্রিয়া প্রজাতি-নির্দিষ্ট। অধিকন্তু, মৃত্যুহারের দিক থেকে, সাইপারমেথ্রিনের সংস্পর্শে আসার পর P. gracilis-এর CHQ মান 64.67-এ পৌঁছেছে, যা মার্কিন পরিবেশ সুরক্ষা সংস্থা দ্বারা নির্ধারিত রেফারেন্স মানের চেয়ে বেশি54, এবং R. arenarum লার্ভার CHQ মানও এই মানের চেয়ে বেশি ছিল (CHQ > 388.00 336 ঘন্টা পরে), যা নির্দেশ করে যে অধ্যয়ন করা কীটনাশকগুলি বেশ কয়েকটি উভচর প্রজাতির জন্য উচ্চ ঝুঁকি তৈরি করে। P. gracilis-এর রূপান্তর সম্পূর্ণ করতে প্রায় 30 দিন সময় লাগে56, এই সিদ্ধান্তে উপনীত হতে পারে যে সাইপারমেথ্রিনের অধ্যয়ন করা ঘনত্ব সংক্রামিত ব্যক্তিদের অল্প বয়সে প্রাপ্তবয়স্ক বা প্রজনন পর্যায়ে প্রবেশ করতে বাধা দিয়ে জনসংখ্যা হ্রাসে অবদান রাখতে পারে।
মাইক্রোনিউক্লিয়াস এবং অন্যান্য লোহিত রক্তকণিকার নিউক্লিয়ার অস্বাভাবিকতার গণনাকৃত ঝুঁকি মূল্যায়নে, CHQ মান 14.92 থেকে 97.00 পর্যন্ত ছিল, যা ইঙ্গিত করে যে সাইপারমেথ্রিনের প্রাকৃতিক আবাসস্থলেও P. gracilis-এর জন্য সম্ভাব্য জিনোটক্সিক ঝুঁকি ছিল। মৃত্যুহার বিবেচনায়, P. gracilis-এর জন্য সহনীয় জেনোবায়োটিক যৌগের সর্বাধিক ঘনত্ব ছিল 4.24 μg L−1। তবে, 1 μg/L-এর কম ঘনত্বও জিনোটক্সিক প্রভাব দেখিয়েছে। এই সত্যটি অস্বাভাবিক ব্যক্তির সংখ্যা বৃদ্ধির দিকে পরিচালিত করতে পারে57 এবং তাদের আবাসস্থলে প্রজাতির বিকাশ এবং প্রজননকে প্রভাবিত করতে পারে, যার ফলে উভচর জনসংখ্যা হ্রাস পেতে পারে।
সাইপারমেথ্রিনের বাণিজ্যিক ফর্মুলেশনে P. gracilis-এর তীব্র এবং দীর্ঘস্থায়ী বিষাক্ততা বেশি ছিল। মাইক্রোনিউক্লিয়াস এবং লোহিত রক্তকণিকার নিউক্লিয়ার অস্বাভাবিকতা, বিশেষ করে দানাদার নিউক্লিয়াস, লবড নিউক্লিয়াস এবং ভেসিকুলার নিউক্লিয়াসের উপস্থিতি দ্বারা প্রমাণিত বিষাক্ত প্রভাবের কারণে সম্ভবত উচ্চ মৃত্যুর হার লক্ষ্য করা গেছে। এছাড়াও, অধ্যয়ন করা প্রজাতিগুলি তীব্র এবং দীর্ঘস্থায়ী উভয় ধরণের পরিবেশগত ঝুঁকি দেখিয়েছে। আমাদের গবেষণা দলের পূর্ববর্তী গবেষণার সাথে মিলিত এই তথ্যগুলি দেখিয়েছে যে সাইপারমেথ্রিনের বিভিন্ন বাণিজ্যিক ফর্মুলেশন এখনও অ্যাসিটাইলকোলিনেস্টেরেজ (AChE) এবং বুটিরিলকোলিনেস্টেরেজ (BChE) কার্যকলাপ এবং জারণ চাপ হ্রাস করেছে58, এবং এর ফলে P. gracilis-এ সাঁতারের কার্যকলাপ এবং মৌখিক ত্রুটি59-তে পরিবর্তন এসেছে, যা ইঙ্গিত করে যে সাইপারমেথ্রিনের বাণিজ্যিক ফর্মুলেশনে এই প্রজাতির জন্য উচ্চ প্রাণঘাতী এবং সাবলেথাল বিষাক্ততা রয়েছে। হার্টম্যান এবং অন্যান্যরা 60 দেখেছেন যে সাইপারমেথ্রিনের বাণিজ্যিক ফর্মুলেশনগুলি P. gracilis এবং একই প্রজাতির অন্য একটি প্রজাতির (P. cuvieri) জন্য নয়টি অন্যান্য কীটনাশকের তুলনায় সবচেয়ে বিষাক্ত ছিল। এর থেকে বোঝা যায় যে পরিবেশ সুরক্ষার জন্য সাইপারমেথ্রিনের আইনত অনুমোদিত ঘনত্বের ফলে উচ্চ মৃত্যুহার এবং দীর্ঘমেয়াদী জনসংখ্যা হ্রাস পেতে পারে।
উভচর প্রাণীর উপর এই কীটনাশকের বিষাক্ততা মূল্যায়নের জন্য আরও গবেষণা প্রয়োজন, কারণ পরিবেশে পাওয়া ঘনত্ব উচ্চ মৃত্যুহারের কারণ হতে পারে এবং পি. গ্র্যাসিলিসের জন্য সম্ভাব্য ঝুঁকি তৈরি করতে পারে। উভচর প্রজাতির উপর গবেষণা উৎসাহিত করা উচিত, কারণ এই জীবগুলির উপর তথ্য খুব কম, বিশেষ করে ব্রাজিলীয় প্রজাতির উপর।
দীর্ঘস্থায়ী বিষাক্ততা পরীক্ষাটি স্থির অবস্থায় ১৬৮ ঘন্টা (৭ দিন) ধরে চলেছিল এবং সাবলেথাল ঘনত্ব ছিল: ১, ৩, ৬ এবং ২০ μg ai L−১। উভয় পরীক্ষায়, প্রতি চিকিত্সা গ্রুপে ১০টি ট্যাডপোল মূল্যায়ন করা হয়েছিল ছয়টি প্রতিলিপি দিয়ে, যার ফলে প্রতি ঘনত্বে মোট ৬০টি ট্যাডপোল পাওয়া গিয়েছিল। ইতিমধ্যে, শুধুমাত্র জল-প্রক্রিয়াটি নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ হিসেবে কাজ করেছিল। প্রতিটি পরীক্ষামূলক সেটআপে ৫০০ মিলি ধারণক্ষমতা এবং প্রতি ৫০ মিলি দ্রবণে ১টি ট্যাডপোলের ঘনত্ব সহ একটি জীবাণুমুক্ত কাচের থালা ছিল। বাষ্পীভবন রোধ করার জন্য ফ্লাস্কটি পলিথিন ফিল্ম দিয়ে ঢেকে দেওয়া হয়েছিল এবং ক্রমাগত বায়ুচলাচল করা হয়েছিল।
০, ৯৬ এবং ১৬৮ ঘন্টা তাপমাত্রায় কীটনাশকের ঘনত্ব নির্ধারণের জন্য পানি রাসায়নিকভাবে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। সাবিন এট আল। ৬৮ এবং মার্টিন্স এট আল। ৬৯ এর মতে, সান্তা মারিয়ার ফেডারেল বিশ্ববিদ্যালয়ের কীটনাশক বিশ্লেষণ পরীক্ষাগারে (LARP) গ্যাস ক্রোমাটোগ্রাফি এবং ট্রিপল কোয়াড্রপোল ভর স্পেকট্রোমেট্রি (ভেরিয়ান মডেল ১২০০, পালো আল্টো, ক্যালিফোর্নিয়া, মার্কিন যুক্তরাষ্ট্র) ব্যবহার করে বিশ্লেষণগুলি করা হয়েছিল। পানিতে কীটনাশকের পরিমাণগত নির্ধারণ সম্পূরক উপাদান হিসাবে দেখানো হয়েছে (টেবিল SM1)।
মাইক্রোনিউক্লিয়াস পরীক্ষা (MNT) এবং লোহিত কণিকা নিউক্লিয়ার অস্বাভাবিকতা পরীক্ষার (RNA) জন্য, প্রতিটি চিকিৎসা গ্রুপ থেকে ১৫টি ট্যাডপোল বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ট্যাডপোলগুলিকে ৫% লিডোকেন (৫০ মিলিগ্রাম g-১৭০) দিয়ে চেতনানাশক দেওয়া হয়েছিল এবং ডিসপোজেবল হেপারিনাইজড সিরিঞ্জ ব্যবহার করে কার্ডিয়াক পাংচারের মাধ্যমে রক্তের নমুনা সংগ্রহ করা হয়েছিল। জীবাণুমুক্ত মাইক্রোস্কোপ স্লাইডে রক্তের স্মিয়ার তৈরি করা হয়েছিল, বাতাসে শুকানো হয়েছিল, ১০০% মিথানল (৪ ডিগ্রি সেলসিয়াস) দিয়ে ২ মিনিটের জন্য স্থির করা হয়েছিল এবং তারপর অন্ধকারে ১৫ মিনিটের জন্য ১০% জিমসা দ্রবণ দিয়ে দাগ দেওয়া হয়েছিল। প্রক্রিয়া শেষে, অতিরিক্ত দাগ অপসারণের জন্য স্লাইডগুলিকে পাতিত জল দিয়ে ধুয়ে ঘরের তাপমাত্রায় শুকানো হয়েছিল।
প্রতিটি ট্যাডপোল থেকে কমপক্ষে ১০০০টি আরবিসি ১০০× মাইক্রোস্কোপ ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল যার উদ্দেশ্য ছিল MN এবং ENA-এর উপস্থিতি নির্ধারণ করা। সাইপারমেথ্রিনের ঘনত্ব এবং নিয়ন্ত্রণ বিবেচনা করে ট্যাডপোল থেকে মোট ৭৫,৭৯৬টি আরবিসি মূল্যায়ন করা হয়েছিল। ক্যারাসকো এবং ফেনেক এট আল-এর পদ্ধতি অনুসারে জিনোটক্সিসিটি বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। ৩৮,৭২ নিম্নলিখিত নিউক্লিয়ার ক্ষতগুলির ফ্রিকোয়েন্সি নির্ধারণ করে: (১) অ্যানোক্লিয়েট কোষ: নিউক্লিয়াস ছাড়া কোষ; (২) অ্যাপোপটোটিক কোষ: নিউক্লিয়ার ফ্র্যাগমেন্টেশন, প্রোগ্রাম করা কোষ মৃত্যু; (৩) বাইনোক্লিয়েট কোষ: দুটি নিউক্লিয়াসযুক্ত কোষ; (৪) নিউক্লিয়ার কুঁড়ি বা ব্লেব কোষ: নিউক্লিয়ার ঝিল্লির ছোট প্রোট্রুশন সহ নিউক্লিয়াসযুক্ত কোষ, মাইক্রোনিউক্লিয়ার আকারের অনুরূপ ব্লেব; (৫) ক্যারিওলাইজড কোষ: অভ্যন্তরীণ উপাদান ছাড়াই নিউক্লিয়াসের রূপরেখা সহ কোষ; (৬) খাঁজযুক্ত কোষ: নিউক্লিয়াসযুক্ত কোষ যার আকারে স্পষ্ট ফাটল বা খাঁজ রয়েছে, যাকে কিডনি-আকৃতির নিউক্লিয়াসও বলা হয়; (৭) লোবুলেটেড কোষ: উপরে উল্লিখিত ভেসিকেলের চেয়ে বড় নিউক্লিয়ার প্রোট্রুশন সহ কোষ; এবং (৮) মাইক্রোকোষ: ঘনীভূত নিউক্লিয়াস এবং হ্রাসপ্রাপ্ত সাইটোপ্লাজম সহ কোষ। পরিবর্তনগুলি নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ ফলাফলের সাথে তুলনা করা হয়েছিল।
তীব্র বিষাক্ততা পরীক্ষার ফলাফল (LC50) GBasic সফ্টওয়্যার এবং TSK-Trimmed Spearman-Karber পদ্ধতি74 ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। দীর্ঘস্থায়ী পরীক্ষার তথ্য ত্রুটি স্বাভাবিকতা (Shapiro-Wilks) এবং বৈচিত্র্যের সমজাতীয়তা (Bartlett) এর জন্য প্রাক-পরীক্ষা করা হয়েছিল। ফলাফলগুলি বৈচিত্র্যের একমুখী বিশ্লেষণ (ANOVA) ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। টুকির পরীক্ষাটি তাদের মধ্যে ডেটা তুলনা করার জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল, এবং ডানেটের পরীক্ষাটি চিকিত্সা গ্রুপ এবং নেতিবাচক নিয়ন্ত্রণ গ্রুপের মধ্যে ডেটা তুলনা করার জন্য ব্যবহৃত হয়েছিল।
LOEC এবং NOEC ডেটা ডানেটের পরীক্ষা ব্যবহার করে বিশ্লেষণ করা হয়েছিল। পরিসংখ্যানগত পরীক্ষাগুলি Statistica 8.0 সফ্টওয়্যার (StatSoft) ব্যবহার করে সম্পাদিত হয়েছিল যার তাৎপর্য স্তর 95% (p < 0.05)।