সেন্ট জন'স ওয়ার্টে ইন ভিট্রো অর্গোজেনেসিস এবং জৈব সক্রিয় যৌগ উৎপাদনের উপর উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রক এবং আয়রন অক্সাইড ন্যানো পার্টিকেলের সিনারজিস্টিক প্রভাব

এই গবেষণায়, সম্মিলিত চিকিৎসার উদ্দীপক প্রভাবগুলিউদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রক*হাইপেরিকাম পারফোরেটাম* এল.-এ ইন ভিট্রো মরফোজেনেসিস এবং সেকেন্ডারি মেটাবোলাইট উৎপাদনের উপর (২,৪-ডি এবং কাইনেটিন) এবং আয়রন অক্সাইড ন্যানো পার্টিকেল (Fe₃O₄-NPs) তদন্ত করা হয়েছিল। অপ্টিমাইজড চিকিৎসা [২,৪-ডি (০.৫ মিলিগ্রাম/লি) + কাইনেটিন (২ মিলিগ্রাম/লি) + Fe₃O₄-NPs (৪ মিলিগ্রাম/লি)] উদ্ভিদের বৃদ্ধির পরামিতিগুলিকে উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত করেছে: নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় উদ্ভিদের উচ্চতা ৫৯.৬%, শিকড়ের দৈর্ঘ্য ১১৪.০%, কুঁড়ি সংখ্যা ১৮০.০% এবং কলাসের তাজা ওজন ১৯৮.৩% বৃদ্ধি পেয়েছে। এই সম্মিলিত চিকিৎসা পুনর্জন্ম দক্ষতা (৫০.৮৫%) বৃদ্ধি করেছে এবং হাইপারিসিনের পরিমাণ ৬৬.৬% বৃদ্ধি করেছে। GC-MS বিশ্লেষণে হাইপারোসাইড, β-প্যাথোলিন এবং সিটিল অ্যালকোহলের উচ্চ পরিমাণ প্রকাশ পেয়েছে, যা মোট পিক এলাকার 93.36%, যেখানে মোট ফেনোলিক এবং ফ্ল্যাভোনয়েডের পরিমাণ 80.1% বৃদ্ধি পেয়েছে। এই ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রক (PGRs) এবং Fe₃O₄ ন্যানো পার্টিকেল (Fe₃O₄-NPs) জৈব-সক্রিয় যৌগগুলির জৈব-সঞ্চয়কে উদ্দীপিত করে এবং জৈব-সক্রিয় যৌগগুলির সঞ্চয়ের মাধ্যমে একটি সমন্বয়মূলক প্রভাব ফেলে, যা ঔষধি উদ্ভিদের জৈব-প্রযুক্তিগত উন্নতির জন্য একটি প্রতিশ্রুতিশীল কৌশল উপস্থাপন করে।
সেন্ট জন'স ওয়ার্ট (হাইপেরিকাম পারফোরেটাম এল.), যা সেন্ট জন'স ওয়ার্ট নামেও পরিচিত, হাইপারিকাসি পরিবারের একটি বহুবর্ষজীবী ভেষজ উদ্ভিদ যার অর্থনৈতিক মূল্য রয়েছে।[1] এর সম্ভাব্য জৈব-সক্রিয় উপাদানগুলির মধ্যে রয়েছে প্রাকৃতিক ট্যানিন, জ্যান্থোন, ফ্লোরোগ্লুসিনল, ন্যাপথ্যালেনিডিয়ানথ্রোন (হাইপারিন এবং সিউডোহাইপারিন), ফ্ল্যাভোনয়েড, ফেনোলিক অ্যাসিড এবং প্রয়োজনীয় তেল।[2,3,4] সেন্ট জন'স ওয়ার্ট ঐতিহ্যবাহী পদ্ধতিতে বংশবিস্তার করা যেতে পারে; তবে, ঐতিহ্যবাহী পদ্ধতির ঋতুগততা, কম বীজ অঙ্কুরোদগম এবং রোগের প্রতি সংবেদনশীলতা এর বৃহৎ আকারের চাষ এবং গৌণ বিপাকীয় পদার্থের ক্রমাগত গঠনের সম্ভাবনাকে সীমিত করে।[1,5,6]
সুতরাং, ইন ভিট্রো টিস্যু কালচার দ্রুত উদ্ভিদ বংশবিস্তার, জার্মপ্লাজম সম্পদ সংরক্ষণ এবং ঔষধি যৌগের ফলন বৃদ্ধির জন্য একটি কার্যকর পদ্ধতি হিসাবে বিবেচিত হয় [7, 8]। উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রক (PGRs) মরফোজেনেসিস নিয়ন্ত্রণে গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে এবং ক্যালাস এবং সমগ্র জীবের ইন ভিট্রো চাষের জন্য প্রয়োজনীয়। এই বিকাশ প্রক্রিয়াগুলির সফল সমাপ্তির জন্য তাদের ঘনত্ব এবং সংমিশ্রণের অপ্টিমাইজেশন অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ [9]। অতএব, সেন্ট জনস ওয়ার্ট (H. perforatum) [10] এর বৃদ্ধি এবং পুনর্জন্ম ক্ষমতা উন্নত করার জন্য নিয়ন্ত্রকদের উপযুক্ত গঠন এবং ঘনত্ব বোঝা গুরুত্বপূর্ণ।
আয়রন অক্সাইড ন্যানো পার্টিকেল (Fe₃O₄) হল এক শ্রেণীর ন্যানো পার্টিকেল যা টিস্যু কালচারের জন্য তৈরি করা হয়েছে বা তৈরি হচ্ছে। Fe₃O₄ এর উল্লেখযোগ্য চৌম্বকীয় বৈশিষ্ট্য, ভালো জৈব-সামঞ্জস্যতা এবং উদ্ভিদের বৃদ্ধি বৃদ্ধি এবং পরিবেশগত চাপ কমানোর ক্ষমতা রয়েছে, তাই এটি টিস্যু কালচার ডিজাইনে যথেষ্ট মনোযোগ আকর্ষণ করেছে। এই ন্যানো পার্টিকেলগুলির সম্ভাব্য প্রয়োগের মধ্যে কোষ বিভাজনকে উৎসাহিত করার জন্য ইন ভিট্রো কালচার অপ্টিমাইজ করা, পুষ্টি গ্রহণ উন্নত করা এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইম সক্রিয় করা অন্তর্ভুক্ত থাকতে পারে [11]।
যদিও ন্যানো পার্টিকেলগুলি উদ্ভিদের বৃদ্ধির উপর ভালো প্রভাব ফেলেছে, তবুও *H. perforatum* তে Fe₃O₄ ন্যানো পার্টিকেল এবং অপ্টিমাইজড উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রকদের সম্মিলিত প্রয়োগের উপর গবেষণা এখনও অপ্রতুল। এই জ্ঞানের ঘাটতি পূরণ করার জন্য, এই গবেষণায় ঔষধি উদ্ভিদের বৈশিষ্ট্য উন্নত করার জন্য নতুন অন্তর্দৃষ্টি প্রদানের জন্য ইন ভিট্রো মরফোজেনেসিস এবং সেকেন্ডারি মেটাবোলাইট উৎপাদনের উপর তাদের সম্মিলিত প্রভাবের প্রভাব মূল্যায়ন করা হয়েছে। অতএব, এই গবেষণার দুটি উদ্দেশ্য রয়েছে: (১) উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রকদের ঘনত্বকে কার্যকরভাবে কলাস গঠন, অঙ্কুর পুনর্জন্ম এবং শিকড় গঠনকে উৎসাহিত করার জন্য অপ্টিমাইজ করা; এবং (২) ইন ভিট্রো বৃদ্ধির পরামিতিগুলিতে Fe₃O₄ ন্যানো পার্টিকেলের প্রভাব মূল্যায়ন করা। ভবিষ্যতের পরিকল্পনাগুলির মধ্যে রয়েছে অভিযোজন (ইন ভিট্রো) সময় পুনরুত্পাদিত উদ্ভিদের বেঁচে থাকার হার মূল্যায়ন করা। আশা করা হচ্ছে যে এই গবেষণার ফলাফল *H. perforatum* এর মাইক্রোপ্রোপ্যাগেশন দক্ষতা উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত করবে, যার ফলে এই গুরুত্বপূর্ণ ঔষধি উদ্ভিদের টেকসই ব্যবহার এবং জৈবপ্রযুক্তিগত প্রয়োগে অবদান রাখবে।
এই গবেষণায়, আমরা জমিতে জন্মানো বার্ষিক সেন্ট জন'স ওয়ার্ট গাছ (মাদার প্ল্যান্ট) থেকে পাতার এক্সপ্ল্যান্ট সংগ্রহ করেছি। এই এক্সপ্ল্যান্টগুলি ইন ভিট্রো কালচার অবস্থার সর্বোত্তম করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। কালচার করার আগে, পাতাগুলি কয়েক মিনিটের জন্য প্রবাহিত পাতিত জলের নীচে পুঙ্খানুপুঙ্খভাবে ধুয়ে ফেলা হয়েছিল। এরপর এক্সপ্ল্যান্টের পৃষ্ঠগুলি 70% ইথানলে 30 সেকেন্ডের জন্য ডুবিয়ে জীবাণুমুক্ত করা হয়েছিল, তারপরে 1.5% সোডিয়াম হাইপোক্লোরাইট (NaOCl) দ্রবণে 10 মিনিটের জন্য কয়েক ফোঁটা টুইন 20 ধারণ করে ডুবিয়ে রাখা হয়েছিল। অবশেষে, পরবর্তী কালচার মাধ্যমে স্থানান্তর করার আগে এক্সপ্ল্যান্টগুলিকে জীবাণুমুক্ত পাতিত জল দিয়ে তিনবার ধুয়ে ফেলা হয়েছিল।
পরবর্তী চার সপ্তাহ ধরে, অঙ্কুর পুনর্জন্মের পরামিতি পরিমাপ করা হয়েছিল, যার মধ্যে রয়েছে পুনর্জন্মের হার, প্রতি অঙ্কুর সংখ্যা এবং অঙ্কুর দৈর্ঘ্য। যখন পুনর্জন্মের অঙ্কুর দৈর্ঘ্য কমপক্ষে 2 সেমি পৌঁছায়, তখন সেগুলিকে অর্ধ-শক্তি MS মাধ্যম, 0.5 mg/L ইন্ডোলেবিউটারিক অ্যাসিড (IBA) এবং 0.3% গুয়ার গাম সমন্বিত একটি মূল মাধ্যমে স্থানান্তরিত করা হয়েছিল। রুটিং কালচার তিন সপ্তাহ ধরে অব্যাহত ছিল, এই সময়কালে মূল হার, মূল সংখ্যা এবং মূল দৈর্ঘ্য পরিমাপ করা হয়েছিল। প্রতিটি চিকিত্সা তিনবার পুনরাবৃত্তি করা হয়েছিল, প্রতি প্রতিলিপিতে 10টি এক্সপ্ল্যান্ট কালচার করা হয়েছিল, যার ফলে প্রতি চিকিত্সায় প্রায় 30টি এক্সপ্ল্যান্ট পাওয়া গিয়েছিল।
গাছের গোড়া থেকে লম্বা পাতার ডগা পর্যন্ত একটি রুলার ব্যবহার করে গাছের উচ্চতা সেন্টিমিটার (সেমি) তে পরিমাপ করা হয়েছিল। সাবধানে চারা অপসারণ এবং ক্রমবর্ধমান মাধ্যম অপসারণের পরপরই শিকড়ের দৈর্ঘ্য মিলিমিটার (মিমি) তে পরিমাপ করা হয়েছিল। প্রতিটি উদ্ভিদে প্রতি এক্সপ্ল্যান্টের কুঁড়ির সংখ্যা সরাসরি গণনা করা হয়েছিল। পাতায় কালো দাগের সংখ্যা, যা নোডিউল নামে পরিচিত, দৃশ্যত পরিমাপ করা হয়েছিল। এই কালো নোডিউলগুলিকে হাইপারিসিন বা অক্সিডেটিভ দাগযুক্ত গ্রন্থি বলে মনে করা হয় এবং চিকিৎসার প্রতি উদ্ভিদের প্রতিক্রিয়ার শারীরবৃত্তীয় সূচক হিসাবে ব্যবহৃত হয়। সমস্ত ক্রমবর্ধমান মাধ্যম অপসারণের পরে, চারার তাজা ওজন মিলিগ্রাম (মিলিগ্রাম) নির্ভুলতার সাথে একটি ইলেকট্রনিক স্কেল ব্যবহার করে পরিমাপ করা হয়েছিল।
কলাস গঠনের হার গণনার পদ্ধতিটি নিম্নরূপ: বিভিন্ন বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রক (কিনেস, 2,4-D, এবং Fe3O4) ধারণকারী মাধ্যমে চার সপ্তাহ ধরে এক্সপ্ল্যান্ট চাষ করার পরে, কলাস গঠনে সক্ষম এক্সপ্ল্যান্টের সংখ্যা গণনা করা হয়। কলাস গঠনের হার গণনার সূত্রটি নিম্নরূপ:
প্রতিটি চিকিৎসা তিনবার পুনরাবৃত্তি করা হয়েছিল, প্রতিটি পুনরাবৃত্তিতে কমপক্ষে ১০টি এক্সপ্ল্যান্ট পরীক্ষা করা হয়েছিল।
পুনরুত্পাদন হার কলাস টিস্যুর অনুপাতকে প্রতিফলিত করে যা কলাস গঠনের পর কুঁড়ি পার্থক্য প্রক্রিয়া সফলভাবে সম্পন্ন করে। এই সূচক কলাস টিস্যুর পৃথকীকৃত টিস্যুতে রূপান্তরিত হওয়ার এবং নতুন উদ্ভিদ অঙ্গে বৃদ্ধি পাওয়ার ক্ষমতা প্রদর্শন করে।
মূলোৎপাদন সহগ হল মূলোৎপাদন করতে সক্ষম শাখার সংখ্যার সাথে মোট শাখার সংখ্যার অনুপাত। এই সূচকটি মূলোৎপাদন পর্যায়ের সাফল্যকে প্রতিফলিত করে, যা মাইক্রোপ্রোপ্যাগেশন এবং উদ্ভিদ বংশবিস্তারের ক্ষেত্রে অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ, কারণ ভালো মূলোৎপাদন চারাকে ক্রমবর্ধমান পরিস্থিতিতে আরও ভালোভাবে বেঁচে থাকতে সাহায্য করে।
৯০% মিথানল দিয়ে হাইপারিসিন যৌগ বের করা হয়েছিল। ১ মিলি মিথানলের সাথে পঞ্চাশ মিলিগ্রাম শুকনো উদ্ভিদ উপাদান যোগ করা হয়েছিল এবং অন্ধকারে ঘরের তাপমাত্রায় একটি অতিস্বনক ক্লিনারে (মডেল A5120-3YJ) ৩০ kHz গতিতে ২০ মিনিটের জন্য সোনিকেটেড করা হয়েছিল। সোনিকেশনের পরে, নমুনাটি ১৫ মিনিটের জন্য ৬০০০ rpm এ সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। সুপারনাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল এবং কনসিকাও এবং অন্যান্যদের দ্বারা বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে প্লাস-৩০০০ এস স্পেকট্রোফটোমিটার ব্যবহার করে হাইপারিসিনের শোষণ ৫৯২ nm পরিমাপ করা হয়েছিল। [14]।
উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রক (PGRs) এবং আয়রন অক্সাইড ন্যানো পার্টিকেল (Fe₃O₄-NPs) দিয়ে বেশিরভাগ চিকিৎসা পুনরুজ্জীবিত কাণ্ডের পাতায় কালো নোডিউল গঠনের কারণ হয়নি। 0.5 বা 1 mg/L 2,4-D, 0.5 বা 1 mg/L কাইনেটিন, অথবা 1, 2, অথবা 4 mg/L আয়রন অক্সাইড ন্যানো পার্টিকেল দিয়ে কোনও চিকিৎসায় কোনও নোডিউল পরিলক্ষিত হয়নি। কাইনেটিন এবং/অথবা আয়রন অক্সাইড ন্যানো পার্টিকেলের উচ্চ ঘনত্বে নোডিউল বিকাশে সামান্য বৃদ্ধি (কিন্তু পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ নয়) দেখা গেছে, যেমন 2,4-D (0.5-2 mg/L) এর সাথে কাইনেটিন (1-1.5 mg/L) এবং আয়রন অক্সাইড ন্যানো পার্টিকেল (2-4 mg/L) এর সংমিশ্রণ। এই ফলাফলগুলি চিত্র 2 এ দেখানো হয়েছে। কালো নোডিউলগুলি হাইপারিসিন সমৃদ্ধ গ্রন্থিগুলিকে প্রতিনিধিত্ব করে, যা প্রাকৃতিকভাবে ঘটে এবং উপকারী উভয়ই। এই গবেষণায়, কালো নোডিউলগুলি মূলত টিস্যু বাদামী হওয়ার সাথে যুক্ত ছিল, যা হাইপারিসিন জমা হওয়ার জন্য একটি অনুকূল পরিবেশ নির্দেশ করে। 2,4-D, কাইনেটিন এবং Fe₃O₄ ন্যানো পার্টিকেল দিয়ে চিকিৎসা করলে ক্যালাসের বৃদ্ধি, বাদামী ভাব কমে যাওয়া এবং ক্লোরোফিলের পরিমাণ বৃদ্ধি পায়, যা উন্নত বিপাকীয় কার্যকারিতা এবং অক্সিডেটিভ ক্ষতির সম্ভাব্য হ্রাসের ইঙ্গিত দেয় [37]। এই গবেষণায় সেন্ট জনস ওয়ার্ট ক্যালাসের বৃদ্ধি এবং বিকাশের উপর 2,4-D এবং Fe₃O₄ ন্যানো পার্টিকেলের সাথে কাইনেটিনের প্রভাব মূল্যায়ন করা হয়েছে (চিত্র 3a–g)। পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে Fe₃O₄ ন্যানো পার্টিকেলগুলির অ্যান্টিফাঙ্গাল এবং অ্যান্টিমাইক্রোবিয়াল কার্যকলাপ রয়েছে [38, 39] এবং উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রকদের সাথে সংমিশ্রণে ব্যবহার করা হলে, উদ্ভিদ প্রতিরক্ষা ব্যবস্থাকে উদ্দীপিত করতে পারে এবং কোষীয় চাপ সূচক কমাতে পারে [18]। যদিও গৌণ বিপাকের জৈব সংশ্লেষণ জিনগতভাবে নিয়ন্ত্রিত হয়, তাদের প্রকৃত ফলন পরিবেশগত অবস্থার উপর অত্যন্ত নির্ভরশীল। বিপাকীয় এবং রূপগত পরিবর্তনগুলি নির্দিষ্ট উদ্ভিদ জিনের প্রকাশ নিয়ন্ত্রণ করে এবং পরিবেশগত কারণগুলির প্রতি সাড়া দিয়ে গৌণ বিপাকের স্তরকে প্রভাবিত করতে পারে। অধিকন্তু, প্রবর্তকরা নতুন জিনের সক্রিয়করণকে ট্রিগার করতে পারে, যা এনজাইমেটিক কার্যকলাপকে উদ্দীপিত করে, পরিণামে একাধিক জৈবসংশ্লেষণ পথ সক্রিয় করে এবং গৌণ বিপাক গঠনের দিকে পরিচালিত করে। অধিকন্তু, আরেকটি গবেষণায় দেখা গেছে যে ছায়া কমানোর ফলে সূর্যালোকের সংস্পর্শ বৃদ্ধি পায়, যার ফলে *হাইপেরিকাম পারফোরেটাম* এর প্রাকৃতিক আবাসস্থলে দিনের তাপমাত্রা বৃদ্ধি পায়, যা হাইপারিকিন উৎপাদন বৃদ্ধিতেও অবদান রাখে। এই তথ্যের উপর ভিত্তি করে, এই গবেষণায় টিস্যু কালচারে সম্ভাব্য প্রবর্তক হিসেবে লোহার ন্যানো পার্টিকেলের ভূমিকা তদন্ত করা হয়েছে। ফলাফলে দেখা গেছে যে এই ন্যানো পার্টিকেলগুলি এনজাইমেটিক উদ্দীপনার মাধ্যমে হেস্পেরিডিন জৈবসংশ্লেষণে জড়িত জিনগুলিকে সক্রিয় করতে পারে, যার ফলে এই যৌগের সঞ্চয় বৃদ্ধি পায় (চিত্র 2)। অতএব, প্রাকৃতিক পরিস্থিতিতে বেড়ে ওঠা উদ্ভিদের তুলনায়, এটি যুক্তি দেওয়া যেতে পারে যে মাঝারি চাপ এবং গৌণ বিপাকের জৈবসংশ্লেষণে জড়িত জিনগুলির সক্রিয়করণের সাথে মিলিত হলে ভিভোতে এই জাতীয় যৌগগুলির উৎপাদনও বাড়ানো যেতে পারে। সম্মিলিত চিকিৎসা সাধারণত পুনর্জন্মের হারের উপর ইতিবাচক প্রভাব ফেলে, তবে কিছু ক্ষেত্রে, এই প্রভাব দুর্বল হয়ে পড়ে। উল্লেখযোগ্যভাবে, ১ মিলিগ্রাম/লিটার ২,৪-ডি, ১.৫ মিলিগ্রাম/লিটার কাইনেজ এবং বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে চিকিৎসা নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় স্বাধীনভাবে এবং উল্লেখযোগ্যভাবে পুনর্জন্মের হার ৫০.৮৫% বৃদ্ধি করতে পারে (চিত্র ৪গ)। এই ফলাফলগুলি থেকে বোঝা যায় যে ন্যানোহরমোনের নির্দিষ্ট সংমিশ্রণ উদ্ভিদের বৃদ্ধি এবং বিপাক উৎপাদনকে উৎসাহিত করার জন্য সমন্বয়মূলকভাবে কাজ করতে পারে, যা ঔষধি গাছের টিস্যু কালচারের জন্য অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। পামার এবং কেলার [৫০] দেখিয়েছেন যে ২,৪-ডি চিকিৎসা স্বাধীনভাবে সেন্ট পারফোরাটামে ক্যালাস গঠনকে প্ররোচিত করতে পারে, যেখানে কাইনেজ যোগ করলে ক্যালাস গঠন এবং পুনর্জন্ম উল্লেখযোগ্যভাবে বৃদ্ধি পায়। হরমোনের ভারসাম্যের উন্নতি এবং কোষ বিভাজনের উদ্দীপনার কারণে এই প্রভাব পড়ে। বাল এবং অন্যান্যরা [৫১] দেখেছেন যে Fe₃O₄-NP চিকিৎসা স্বাধীনভাবে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইমের কার্যকারিতা উন্নত করতে পারে, যার ফলে সেন্ট পারফোরাটামে মূল বৃদ্ধি বৃদ্ধি পায়। ০.৫ মিলিগ্রাম/লিটার, ১ মিলিগ্রাম/লিটার এবং ১.৫ মিলিগ্রাম/লিটার ঘনত্বে Fe₃O₄ ন্যানো পার্টিকেল ধারণকারী কালচার মিডিয়া শণের গাছের পুনর্জন্মের হার উন্নত করে [৫২]। কাইনেটিন, 2,4-ডাইক্লোরোবেনজোথিয়াজোলিনোন এবং Fe₃O₄ ন্যানো পার্টিকেলের ব্যবহার ক্যালাস এবং শিকড় গঠনের হারকে উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত করেছে, তবে, ইন ভিট্রো পুনর্জন্মের জন্য এই হরমোনগুলি ব্যবহারের সম্ভাব্য পার্শ্ব প্রতিক্রিয়াগুলি বিবেচনা করা প্রয়োজন। উদাহরণস্বরূপ, 2,4-ডাইক্লোরোবেনজোথিয়াজোলিনোন বা কাইনেটিন দীর্ঘমেয়াদী বা উচ্চ-ঘনত্বের ব্যবহারের ফলে সোমাটিক ক্লোনাল পরিবর্তন, অক্সিডেটিভ স্ট্রেস, অস্বাভাবিক ক্যালাস আকারবিদ্যা বা ভিট্রিফিকেশন হতে পারে। অতএব, উচ্চ পুনর্জন্ম হার অগত্যা জিনগত স্থিতিশীলতার পূর্বাভাস দেয় না। সমস্ত পুনর্জন্মিত উদ্ভিদের আণবিক মার্কার (যেমন RAPD, ISSR, AFLP) বা সাইটোজেনেটিক বিশ্লেষণ ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা উচিত যাতে তাদের ভিভো উদ্ভিদের সাথে একজাতীয়তা এবং সাদৃশ্য নির্ধারণ করা যায় [53,54,55]।
এই গবেষণায় প্রথমবারের মতো প্রমাণিত হয়েছে যে উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রকদের (২,৪-ডি এবং কাইনেটিন) Fe₃O₄ ন্যানো পার্টিকেলের সাথে সম্মিলিত ব্যবহার *হাইপেরিকাম পারফোরেটাম*-এ মরফোজেনেসিস এবং মূল জৈব সক্রিয় বিপাক (হাইপারসিন এবং হাইপারোসাইড সহ) জমা বৃদ্ধি করতে পারে। অপ্টিমাইজড চিকিৎসা পদ্ধতি (১ মিলিগ্রাম/লিটার ২,৪-ডি + ১ মিলিগ্রাম/লিটার কাইনেটিন + ৪ মিলিগ্রাম/লিটার Fe₃O₄-NPs) কেবল কলাস গঠন, অর্গানজেনেসিস এবং সেকেন্ডারি মেটাবোলাইটের ফলন সর্বাধিক করে তোলেনি বরং একটি হালকা প্ররোচনামূলক প্রভাবও প্রদর্শন করেছে, যা উদ্ভিদের চাপ সহনশীলতা এবং ঔষধি মূল্যকে সম্ভাব্যভাবে উন্নত করেছে। ন্যানো প্রযুক্তি এবং উদ্ভিদ টিস্যু কালচারের সংমিশ্রণ ঔষধি যৌগের বৃহৎ আকারে ইন ভিট্রো উৎপাদনের জন্য একটি টেকসই এবং দক্ষ প্ল্যাটফর্ম প্রদান করে। এই ফলাফলগুলি শিল্প প্রয়োগ এবং আণবিক প্রক্রিয়া, ডোজ অপ্টিমাইজেশন এবং জেনেটিক নির্ভুলতার ক্ষেত্রে ভবিষ্যতের গবেষণার পথ প্রশস্ত করে, যার ফলে ঔষধি উদ্ভিদের উপর মৌলিক গবেষণাকে ব্যবহারিক জৈবপ্রযুক্তির সাথে সংযুক্ত করে।