সেন্ট জনস ওয়ার্টে ইন ভিট্রো অঙ্গজনন এবং জৈব সক্রিয় যৌগ উৎপাদনে উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রক এবং আয়রন অক্সাইড ন্যানো পার্টিকেলের সমন্বিত প্রভাব

এই গবেষণায়, সম্মিলিত চিকিৎসার উদ্দীপক প্রভাবউদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রক*হাইপেরিকাম পারফোরেটাম* এল. উদ্ভিদে ইন ভিট্রো অঙ্গসংস্থান এবং সেকেন্ডারি মেটাবোলাইট উৎপাদনে 2,4-D এবং কিনেটিন এবং আয়রন অক্সাইড ন্যানোপার্টিকেলস (Fe₃O₄-NPs)-এর প্রভাব নিয়ে গবেষণা করা হয়েছে। অপ্টিমাইজড ট্রিটমেন্ট [2,4-D (0.5 mg/L) + কিনেটিন (2 mg/L) + Fe₃O₄-NPs (4 mg/L)] উদ্ভিদের বৃদ্ধির প্যারামিটারগুলো উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত করেছে: কন্ট্রোল গ্রুপের তুলনায় উদ্ভিদের উচ্চতা ৫৯.৬%, মূলের দৈর্ঘ্য ১১৪.০%, কুঁড়ির সংখ্যা ১৮০.০% এবং ক্যালাসের তাজা ওজন ১৯৮.৩% বৃদ্ধি পেয়েছে। এই সম্মিলিত ট্রিটমেন্টটি পুনরুৎপাদন দক্ষতাও (৫০.৮৫%) বৃদ্ধি করেছে এবং হাইপেরিসিনের পরিমাণ ৬৬.৬% বাড়িয়েছে। GC-MS বিশ্লেষণে হাইপারোসাইড, β-প্যাথোলিন এবং সেটিল অ্যালকোহলের উচ্চ মাত্রা প্রকাশ পেয়েছে, যা মোট পিক এলাকার ৯৩.৩৬% জুড়ে রয়েছে, যেখানে মোট ফেনোলিক এবং ফ্ল্যাভোনয়েডের পরিমাণ ৮০.১% পর্যন্ত বৃদ্ধি পেয়েছে। এই ফলাফলগুলি ইঙ্গিত দেয় যে উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রক (PGRs) এবং Fe₃O₄ ন্যানো পার্টিকেল (Fe₃O₄-NPs) অঙ্গসৃষ্টি এবং জৈব সক্রিয় যৌগের সঞ্চয়নকে উদ্দীপিত করার মাধ্যমে একটি সমন্বিত প্রভাব ফেলে, যা ঔষধি উদ্ভিদের জৈবপ্রযুক্তিগত উন্নতির জন্য একটি সম্ভাবনাময় কৌশল হিসেবে বিবেচিত।
সেন্ট জন'স ওয়ার্ট (Hypericum perforatum L.), যা সেন্ট জন'স ওয়ার্ট নামেও পরিচিত, হাইপেরিকাসি (Hypericaceae) পরিবারের একটি বহুবর্ষজীবী গুল্মজাতীয় উদ্ভিদ যার অর্থনৈতিক মূল্য রয়েছে।[1] এর সম্ভাব্য জৈব-সক্রিয় উপাদানগুলির মধ্যে রয়েছে প্রাকৃতিক ট্যানিন, জ্যান্থোন, ফ্লোরোগ্লুসিনল, ন্যাপথ্যালেনডায়ানথ্রোন (হাইপেরিন এবং সিউডোহাইপেরিন), ফ্ল্যাভোনয়েড, ফেনোলিক অ্যাসিড এবং অপরিহার্য তেল।[2,3,4] সেন্ট জন'স ওয়ার্ট ঐতিহ্যবাহী পদ্ধতিতে বংশবৃদ্ধি করা যায়; তবে, ঐতিহ্যবাহী পদ্ধতির মৌসুমী প্রকৃতি, বীজের কম অঙ্কুরোদগম এবং রোগের প্রতি সংবেদনশীলতা এর বৃহৎ পরিসরে চাষ এবং গৌণ বিপাকের অবিচ্ছিন্ন গঠনের সম্ভাবনাকে সীমিত করে।[1,5,6]
সুতরাং, ইন ভিট্রো টিস্যু কালচারকে দ্রুত উদ্ভিদ বংশবিস্তার, জার্মপ্লাজম সম্পদের সংরক্ষণ এবং ঔষধি যৌগের ফলন বৃদ্ধির জন্য একটি কার্যকর পদ্ধতি হিসেবে বিবেচনা করা হয় [7, 8]। উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রক (PGRs) অঙ্গসংস্থান নিয়ন্ত্রণে একটি গুরুত্বপূর্ণ ভূমিকা পালন করে এবং ক্যালাস ও সম্পূর্ণ জীবের ইন ভিট্রো চাষের জন্য প্রয়োজনীয়। এই বিকাশ প্রক্রিয়াগুলির সফল সমাপ্তির জন্য তাদের ঘনত্ব এবং সংমিশ্রণের সর্বোত্তম ব্যবহার অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ [9]। অতএব, সেন্ট জন'স ওয়ার্ট (H. perforatum)-এর বৃদ্ধি এবং পুনর্জন্ম ক্ষমতা উন্নত করার জন্য নিয়ন্ত্রকগুলির উপযুক্ত গঠন এবং ঘনত্ব বোঝা গুরুত্বপূর্ণ [10]।
আয়রন অক্সাইড ন্যানো পার্টিকেল (Fe₃O₄) হলো এক শ্রেণীর ন্যানো পার্টিকেল যা টিস্যু কালচারের জন্য তৈরি করা হয়েছে বা হচ্ছে। Fe₃O₄-এর উল্লেখযোগ্য চৌম্বকীয় বৈশিষ্ট্য, ভালো জৈব সামঞ্জস্যতা এবং উদ্ভিদের বৃদ্ধি ত্বরান্বিত করা ও পরিবেশগত চাপ কমানোর ক্ষমতা রয়েছে, তাই এটি টিস্যু কালচার ডিজাইনে যথেষ্ট মনোযোগ আকর্ষণ করেছে। এই ন্যানো পার্টিকেলগুলির সম্ভাব্য প্রয়োগগুলির মধ্যে অন্তর্ভুক্ত থাকতে পারে কোষ বিভাজন ত্বরান্বিত করার জন্য ইন ভিট্রো কালচারকে অপ্টিমাইজ করা, পুষ্টি গ্রহণ উন্নত করা এবং অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইম সক্রিয় করা [11]।
যদিও ন্যানোপার্টিকেল উদ্ভিদের বৃদ্ধিতে ভালো উদ্দীপক প্রভাব দেখিয়েছে, *H. perforatum*-এর ক্ষেত্রে Fe₃O₄ ন্যানোপার্টিকেল এবং অপ্টিমাইজড উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রকের সম্মিলিত প্রয়োগ নিয়ে গবেষণা খুবই সীমিত। এই জ্ঞানের ঘাটতি পূরণের লক্ষ্যে, এই গবেষণাটি ঔষধি উদ্ভিদের বৈশিষ্ট্য উন্নত করার জন্য নতুন অন্তর্দৃষ্টি প্রদানের উদ্দেশ্যে ইন ভিট্রো মরফোজেনেসিস এবং সেকেন্ডারি মেটাবোলাইট উৎপাদনের উপর তাদের সম্মিলিত প্রভাব মূল্যায়ন করেছে। অতএব, এই গবেষণার দুটি উদ্দেশ্য রয়েছে: (১) ইন ভিট্রোতে ক্যালাস গঠন, শুট পুনরুৎপাদন এবং মূল গজানোকে কার্যকরভাবে উৎসাহিত করার জন্য উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রকের ঘনত্বকে অপ্টিমাইজ করা; এবং (২) ইন ভিট্রোতে বৃদ্ধির প্যারামিটারগুলির উপর Fe₃O₄ ন্যানোপার্টিকেলের প্রভাব মূল্যায়ন করা। ভবিষ্যৎ পরিকল্পনার মধ্যে রয়েছে অভিযোজনকালে (ইন ভিট্রো) পুনরুৎপাদিত উদ্ভিদের বেঁচে থাকার হার মূল্যায়ন করা। আশা করা যায় যে, এই গবেষণার ফলাফল *H. perforatum*-এর মাইক্রোপ্রোপাগেশন দক্ষতা উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত করবে, যার ফলে এই গুরুত্বপূর্ণ ঔষধি উদ্ভিদের টেকসই ব্যবহার এবং জৈবপ্রযুক্তিগত প্রয়োগে অবদান রাখবে।
এই গবেষণায়, আমরা মাঠে জন্মানো বার্ষিক সেন্ট জন'স ওয়ার্ট গাছ (মাতৃ উদ্ভিদ) থেকে পাতার এক্সপ্ল্যান্ট সংগ্রহ করেছি। এই এক্সপ্ল্যান্টগুলো ইন ভিট্রো কালচারের পরিবেশ অনুকূল করার জন্য ব্যবহার করা হয়েছিল। কালচার করার আগে, পাতাগুলোকে কয়েক মিনিট ধরে চলমান পাতিত জলের নিচে ভালোভাবে ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল। এরপর এক্সপ্ল্যান্টের পৃষ্ঠতলগুলোকে ৩০ সেকেন্ডের জন্য ৭০% ইথানলে ডুবিয়ে এবং তারপরে কয়েক ফোঁটা টুইন ২০ (Tween 20) যুক্ত ১.৫% সোডিয়াম হাইপোক্লোরাইট (NaOCl) দ্রবণে ১০ মিনিটের জন্য ডুবিয়ে জীবাণুমুক্ত করা হয়েছিল। সবশেষে, পরবর্তী কালচার মাধ্যমে স্থানান্তরের আগে এক্সপ্ল্যান্টগুলোকে জীবাণুমুক্ত পাতিত জল দিয়ে তিনবার ধুয়ে নেওয়া হয়েছিল।
পরবর্তী চার সপ্তাহ ধরে, অঙ্কুর পুনরুৎপাদনের বিভিন্ন প্যারামিটার পরিমাপ করা হয়েছিল, যার মধ্যে ছিল পুনরুৎপাদনের হার, প্রতি এক্সপ্ল্যান্টে অঙ্কুরের সংখ্যা এবং অঙ্কুরের দৈর্ঘ্য। যখন পুনরুৎপাদিত অঙ্কুরগুলো কমপক্ষে ২ সেমি দৈর্ঘ্যে পৌঁছায়, তখন সেগুলোকে একটি রুট তৈরির মাধ্যমে স্থানান্তর করা হয়, যা অর্ধ-শক্তিসম্পন্ন এমএস মিডিয়াম, ০.৫ মিগ্রা/লিটার ইন্ডোলবিউটাইরিক অ্যাসিড (আইবিএ) এবং ০.৩% গুয়ার গাম দিয়ে গঠিত ছিল। রুট তৈরির কালচার তিন সপ্তাহ ধরে চলেছিল, এই সময়ে মূল গজানোর হার, মূলের সংখ্যা এবং মূলের দৈর্ঘ্য পরিমাপ করা হয়েছিল। প্রতিটি ট্রিটমেন্ট তিনবার পুনরাবৃত্তি করা হয়েছিল, প্রতি রেপ্লিকেটে ১০টি এক্সপ্ল্যান্ট কালচার করা হয়, যার ফলে প্রতি ট্রিটমেন্টে প্রায় ৩০টি এক্সপ্ল্যান্ট পাওয়া যায়।
গাছের গোড়া থেকে সবচেয়ে লম্বা পাতার ডগা পর্যন্ত একটি রুলার ব্যবহার করে গাছের উচ্চতা সেন্টিমিটারে (সেমি) মাপা হয়েছিল। চারাগাছগুলো সাবধানে তুলে এবং চাষের মাধ্যমটি সরিয়ে ফেলার ঠিক পরেই মূলের দৈর্ঘ্য মিলিমিটারে (মিমি) মাপা হয়েছিল। প্রতিটি গাছের উপর সরাসরি প্রতি এক্সপ্ল্যান্টে কুঁড়ির সংখ্যা গণনা করা হয়েছিল। পাতার উপর থাকা কালো দাগ, যা নডিউল নামে পরিচিত, তার সংখ্যা খালি চোখে পরিমাপ করা হয়েছিল। এই কালো নডিউলগুলোকে হাইপেরিসিনযুক্ত গ্রন্থি বা জারণ দাগ বলে মনে করা হয় এবং এগুলোকে পরিচর্যার প্রতি গাছের প্রতিক্রিয়ার একটি শারীরবৃত্তীয় সূচক হিসেবে ব্যবহার করা হয়। সমস্ত চাষের মাধ্যম সরিয়ে ফেলার পর, মিলিগ্রাম (মিগ্রা) নির্ভুলতার একটি ইলেকট্রনিক স্কেল ব্যবহার করে চারাগাছগুলোর তাজা ওজন মাপা হয়েছিল।
ক্যালাস গঠনের হার গণনা করার পদ্ধতিটি নিম্নরূপ: বিভিন্ন বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রক (কাইনেজ, ২,৪-ডি, এবং Fe3O4) যুক্ত মাধ্যমে চার সপ্তাহ ধরে এক্সপ্ল্যান্ট কালচার করার পর, ক্যালাস গঠনে সক্ষম এক্সপ্ল্যান্টের সংখ্যা গণনা করা হয়। ক্যালাস গঠনের হার গণনা করার সূত্রটি নিম্নরূপ:
প্রতিটি ট্রিটমেন্ট তিনবার পুনরাবৃত্তি করা হয়েছিল এবং প্রত্যেকবার অন্তত ১০টি এক্সপ্ল্যান্ট পরীক্ষা করা হয়েছিল।
পুনরুৎপাদন হার ক্যালাস গঠন পর্যায়ের পরে ক্যালাস টিস্যুর সেই অনুপাতকে প্রতিফলিত করে যা সফলভাবে কুঁড়ি বিভেদন প্রক্রিয়া সম্পন্ন করে। এই সূচকটি ক্যালাস টিস্যুর বিভেদিত টিস্যুতে রূপান্তরিত হওয়ার এবং নতুন উদ্ভিদের অঙ্গে পরিণত হওয়ার ক্ষমতা প্রদর্শন করে।
মূল গজানোর গুণাঙ্ক হলো মূল গজাতে সক্ষম শাখার সংখ্যা এবং মোট শাখার সংখ্যার অনুপাত। এই সূচকটি মূল গজানোর পর্যায়ের সাফল্যকে প্রতিফলিত করে, যা অণুপ্রজনন এবং উদ্ভিদ বংশবিস্তারের ক্ষেত্রে অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ, কারণ ভালোভাবে মূল গজানো চারাকে প্রতিকূল পরিবেশে ভালোভাবে টিকে থাকতে সাহায্য করে।
হাইপেরিসিন যৌগ ৯০% মিথানল দিয়ে নিষ্কাশন করা হয়েছিল। পঞ্চাশ মিলিগ্রাম শুকনো উদ্ভিদ উপাদান ১ মিলি মিথানলে যোগ করা হয়েছিল এবং ঘরের তাপমাত্রায় অন্ধকারে একটি আলট্রাসনিক ক্লিনারে (মডেল A5120-3YJ) ৩০ কিলোহার্জে ২০ মিনিটের জন্য সনিকেশন করা হয়েছিল। সনিকেশনের পরে, নমুনাটি ৬০০০ আরপিএম-এ ১৫ মিনিটের জন্য সেন্ট্রিফিউজ করা হয়েছিল। সুপারন্যাট্যান্ট সংগ্রহ করা হয়েছিল, এবং কনসেইসাও এট আল. [14] দ্বারা বর্ণিত পদ্ধতি অনুসারে একটি প্লাস-3000 S স্পেকট্রোফটোমিটার ব্যবহার করে ৫৯২ nm-এ হাইপেরিসিনের শোষণ পরিমাপ করা হয়েছিল।
উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রক (PGRs) এবং আয়রন অক্সাইড ন্যানোপার্টিকেল (Fe₃O₄-NPs) দিয়ে করা বেশিরভাগ ট্রিটমেন্ট পুনরুজ্জীবিত কাণ্ডের পাতায় কালো নডিউল তৈরি করতে পারেনি। ০.৫ বা ১ মিগ্রা/লিটার ২,৪-ডি, ০.৫ বা ১ মিগ্রা/লিটার কিনেটিন, অথবা ১, ২ বা ৪ মিগ্রা/লিটার আয়রন অক্সাইড ন্যানোপার্টিকেল দিয়ে করা কোনো ট্রিটমেন্টেই কোনো নডিউল দেখা যায়নি। কয়েকটি সংমিশ্রণে কিনেটিন এবং/অথবা আয়রন অক্সাইড ন্যানোপার্টিকেলের উচ্চ ঘনত্বে নডিউলের বিকাশে সামান্য বৃদ্ধি দেখা গেছে (তবে তা পরিসংখ্যানগতভাবে তাৎপর্যপূর্ণ নয়), যেমন ২,৪-ডি (০.৫–২ মিগ্রা/লিটার)-এর সাথে কিনেটিন (১–১.৫ মিগ্রা/লিটার) এবং আয়রন অক্সাইড ন্যানোপার্টিকেল (২–৪ মিগ্রা/লিটার)-এর সংমিশ্রণ। এই ফলাফলগুলো চিত্র ২-এ দেখানো হয়েছে। কালো নডিউলগুলো হাইপেরিসিন-সমৃদ্ধ গ্রন্থিকে নির্দেশ করে, যা প্রাকৃতিকভাবে সৃষ্ট এবং উপকারী উভয়ই। এই গবেষণায়, কালো নডিউলগুলো প্রধানত টিস্যুর বাদামী হওয়ার সাথে সম্পর্কিত ছিল, যা হাইপেরিসিন জমার জন্য একটি অনুকূল পরিবেশ নির্দেশ করে। 2,4-D, কাইনেটিন এবং Fe₃O₄ ন্যানো পার্টিকেল দিয়ে চিকিৎসা ক্যালাসের বৃদ্ধিকে উৎসাহিত করেছে, বাদামী হওয়া কমিয়েছে এবং ক্লোরোফিলের পরিমাণ বাড়িয়েছে, যা উন্নত বিপাকীয় কার্যকারিতা এবং জারণজনিত ক্ষতির সম্ভাব্য হ্রাস নির্দেশ করে [37]। এই গবেষণায় সেন্ট জন'স ওয়ার্ট ক্যালাসের বৃদ্ধি এবং বিকাশের উপর 2,4-D এবং Fe₃O₄ ন্যানো পার্টিকেলের সাথে কাইনেটিনের সম্মিলিত প্রভাব মূল্যায়ন করা হয়েছে (চিত্র 3a–g)। পূর্ববর্তী গবেষণায় দেখা গেছে যে Fe₃O₄ ন্যানো পার্টিকেলের ছত্রাক-বিরোধী এবং জীবাণু-বিরোধী কার্যকলাপ রয়েছে [38, 39] এবং উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রকের সাথে একত্রে ব্যবহার করা হলে, এটি উদ্ভিদের প্রতিরক্ষা ব্যবস্থা উদ্দীপিত করতে এবং কোষীয় চাপের সূচক কমাতে পারে [18]। যদিও সেকেন্ডারি মেটাবোলাইটের জৈব সংশ্লেষণ জিনগতভাবে নিয়ন্ত্রিত হয়, তবে এর প্রকৃত ফলন পরিবেশগত অবস্থার উপর অত্যন্ত নির্ভরশীল। বিপাকীয় এবং রূপগত পরিবর্তনগুলি নির্দিষ্ট উদ্ভিদ জিনের অভিব্যক্তি নিয়ন্ত্রণ করে এবং পরিবেশগত কারণগুলির প্রতি সাড়া দিয়ে সেকেন্ডারি মেটাবোলাইটের স্তরকে প্রভাবিত করতে পারে। এছাড়াও, ইনডিউসার নতুন জিনের সক্রিয়তা শুরু করতে পারে, যা ফলস্বরূপ এনজাইমের কার্যকলাপকে উদ্দীপিত করে, এবং অবশেষে একাধিক জৈব-সংশ্লেষণ পথকে সক্রিয় করে ও সেকেন্ডারি মেটাবোলাইট তৈরি করে। অধিকন্তু, অন্য একটি গবেষণায় দেখা গেছে যে ছায়া কমালে সূর্যালোকের সংস্পর্শ বাড়ে, যার ফলে *হাইপেরিকাম পারফোরেটাম*-এর প্রাকৃতিক আবাসস্থলে দিনের তাপমাত্রা বৃদ্ধি পায়, যা হাইপেরিসিনের উৎপাদন বৃদ্ধিতেও অবদান রাখে। এই তথ্যের উপর ভিত্তি করে, এই গবেষণাটি টিস্যু কালচারে সম্ভাব্য ইনডিউসার হিসেবে আয়রন ন্যানোপার্টিকেলের ভূমিকা অনুসন্ধান করেছে। ফলাফলে দেখা গেছে যে এই ন্যানোপার্টিকেলগুলো এনজাইমের উদ্দীপনার মাধ্যমে হেস্পেরিডিন জৈব-সংশ্লেষণে জড়িত জিনগুলোকে সক্রিয় করতে পারে, যার ফলে এই যৌগটির সঞ্চয় বৃদ্ধি পায় (চিত্র ২)। অতএব, প্রাকৃতিক পরিবেশে বেড়ে ওঠা উদ্ভিদের তুলনায়, এটি যুক্তিযুক্ত যে যখন মাঝারি চাপের সাথে সেকেন্ডারি মেটাবোলাইটের জৈব-সংশ্লেষণে জড়িত জিনগুলোর সক্রিয়করণকে একত্রিত করা হয়, তখন ইন ভিভোতে এই ধরনের যৌগের উৎপাদনও বৃদ্ধি পেতে পারে। সম্মিলিত চিকিৎসা সাধারণত পুনর্জন্মের হারের উপর একটি ইতিবাচক প্রভাব ফেলে, কিন্তু কিছু ক্ষেত্রে এই প্রভাব দুর্বল হয়ে পড়ে। উল্লেখযোগ্যভাবে, 1 mg/L 2,4-D, 1.5 mg/L কাইনেজ এবং বিভিন্ন ঘনত্বের সাথে চিকিৎসা নিয়ন্ত্রণ গোষ্ঠীর তুলনায় স্বাধীনভাবে এবং উল্লেখযোগ্যভাবে পুনর্জন্মের হার 50.85% বৃদ্ধি করতে পারে (চিত্র 4c)। এই ফলাফলগুলি পরামর্শ দেয় যে ন্যানোহরমোনের নির্দিষ্ট সংমিশ্রণ উদ্ভিদের বৃদ্ধি এবং বিপাক উৎপাদনকে উৎসাহিত করার জন্য সিনার্জিস্টিকভাবে কাজ করতে পারে, যা ঔষধি উদ্ভিদের টিস্যু কালচারের জন্য অত্যন্ত গুরুত্বপূর্ণ। পামার এবং কেলার [50] দেখিয়েছেন যে 2,4-D চিকিৎসা স্বাধীনভাবে St. perforatum-এ ক্যালাস গঠনকে প্ররোচিত করতে পারে, যেখানে কাইনেজের সংযোজন উল্লেখযোগ্যভাবে ক্যালাস গঠন এবং পুনর্জন্মকে বৃদ্ধি করে। এই প্রভাবটি হরমোনগত ভারসাম্যের উন্নতি এবং কোষ বিভাজনের উদ্দীপনার কারণে ঘটেছিল। বাল এট আল। [51] দেখেছেন যে Fe₃O₄-NP চিকিৎসা স্বাধীনভাবে অ্যান্টিঅক্সিডেন্ট এনজাইমের কার্যকারিতা বাড়াতে পারে, যার ফলে St. perforatum-এ মূলের বৃদ্ধিকে উৎসাহিত করে। 0.5 mg/L, 1 mg/L, এবং 1.5 mg/L ঘনত্বে Fe₃O₄ ন্যানো পার্টিকেলযুক্ত কালচার মিডিয়া শণ গাছের পুনরুৎপাদনের হার উন্নত করেছে [52]। কাইনেটিন, 2,4-ডাইক্লোরোবেনজোথায়াজোলিনোন, এবং Fe₃O₄ ন্যানো পার্টিকেলের ব্যবহার ক্যালাস এবং মূল গঠনের হার উল্লেখযোগ্যভাবে উন্নত করেছে, তবে, ইন ভিট্রো পুনরুৎপাদনের জন্য এই হরমোনগুলি ব্যবহারের সম্ভাব্য পার্শ্ব প্রতিক্রিয়াগুলি বিবেচনা করা প্রয়োজন। উদাহরণস্বরূপ, 2,4-ডাইক্লোরোবেনজোথায়াজোলিনোন বা কাইনেটিনের দীর্ঘমেয়াদী বা উচ্চ-ঘনত্বের ব্যবহারে সোম্যাটিক ক্লোনাল ভ্যারিয়েশন, অক্সিডেটিভ স্ট্রেস, অস্বাভাবিক ক্যালাস মরফোলজি, বা ভিট্রফিকেশন হতে পারে। অতএব, একটি উচ্চ পুনরুৎপাদনের হার অগত্যা জেনেটিক স্থিতিশীলতার পূর্বাভাস দেয় না। সমস্ত পুনরুৎপাদিত উদ্ভিদকে আণবিক মার্কার (যেমন RAPD, ISSR, AFLP) বা সাইটোজেনেটিক বিশ্লেষণ ব্যবহার করে মূল্যায়ন করা উচিত যাতে তাদের সমজাতীয়তা এবং ইন ভিভো উদ্ভিদের সাথে সাদৃশ্য নির্ধারণ করা যায় [53,54,55]।
এই গবেষণায় প্রথমবারের মতো দেখানো হয়েছে যে, উদ্ভিদ বৃদ্ধি নিয়ন্ত্রক (২,৪-ডি এবং কিনেটিন)-এর সাথে Fe₃O₄ ন্যানোপার্টিকেলের সম্মিলিত ব্যবহার *হাইপেরিকাম পারফোরেটাম* উদ্ভিদের অঙ্গসংস্থান এবং প্রধান জৈব-সক্রিয় মেটাবোলাইট (হাইপেরিসিন এবং হাইপারোসাইড সহ)-এর সঞ্চয়নকে উন্নত করতে পারে। সর্বোত্তম প্রয়োগ পদ্ধতি (১ মিগ্রা/লি ২,৪-ডি + ১ মিগ্রা/লি কিনেটিন + ৪ মিগ্রা/লি Fe₃O₄-NPs) শুধুমাত্র ক্যালাস গঠন, অঙ্গসৃষ্টি এবং সেকেন্ডারি মেটাবোলাইটের ফলনই সর্বাধিক করেনি, বরং একটি মৃদু উদ্দীপক প্রভাবও প্রদর্শন করেছে, যা সম্ভাব্যভাবে উদ্ভিদের পীড়ন সহনশীলতা এবং ঔষধি গুণ উন্নত করে। ন্যানোপ্রযুক্তি এবং উদ্ভিদ টিস্যু কালচারের সমন্বয় ঔষধি যৌগের বৃহৎ পরিসরে ইন ভিট্রো উৎপাদনের জন্য একটি টেকসই এবং কার্যকর প্ল্যাটফর্ম প্রদান করে। এই ফলাফলগুলি শিল্পক্ষেত্রে প্রয়োগ এবং আণবিক প্রক্রিয়া, ডোজ অপ্টিমাইজেশন ও জেনেটিক নির্ভুলতা নিয়ে ভবিষ্যৎ গবেষণার পথ প্রশস্ত করে, যার ফলে ঔষধি উদ্ভিদের উপর মৌলিক গবেষণা ব্যবহারিক জৈবপ্রযুক্তির সাথে যুক্ত হয়।